早期應用丹參川芎嗪注射液對局灶性腦缺血-再灌注損傷大鼠血-腦屏障通透性的影響

牛文華，牛小媛，劉鳳琴

（山西醫科大學附屬第一醫院神經內科，山西太原 030001）

血-腦屏障（BBB）由三種結構組成：毛細血管內皮細胞、細胞間緊密連接、基底膜以及星形膠質細胞。它可以阻止血液中的某些物質向中樞轉運，從而保證中樞神經系統內環境的穩定。腦缺血-再灌注損傷后，由于BBB開放，通透性改變，血液中的某些有害物質就會進入腦內，從而加重腦的損傷，因此對干預BBB的通透性的治療具有重要的臨床意義。丹參川芎嗪注射液已被廣泛地用于心、腦、腎各個器官的保護性治療[1-3]。本實驗通過觀察丹參川芎嗪注射液對腦缺血-再灌注后BBB通透性的影響，探討其對腦缺血-再灌注損傷的保護作用，對臨床應用具有指導意義。

1 材料與方法

1.1 實驗動物及分組

雄性SD大鼠，體重250～300 g。動物隨機分為正常對照組及缺血-再灌注組，然后將缺血-再灌注組按照再灌注時間分為再灌注 3、12、24、48、72 h 組，每組 6 只。 在 EB 含量漏出最多的時間點，設鹽水組和SLI組。

1.2 動物模型制備及神經病學評分

1.2.1 造模 造模前大鼠禁食24h，用10%水合氯醛（350mg/100 g）腹腔注射，頸部正中切開皮膚，分別分離右側頸總動脈（CCA）、頸外動脈（ECA）及頸內動脈（ICA），在ECA上剪一小口，將線栓子插入大腦中動脈（MCA）的開口處，魚線插入深度平均為（18.5±0.5）mm。缺血后2 h實施再灌注，然后緩慢回抽魚線，使其頭端回撤至CCA內。假手術組不插入線栓，其他步驟同上。1.2.2神經功能評分 參照Zea Longa 5分制神經功能評分，0分：肢體活動正常；1分：左側前肢不能完全伸展；2分：行走時向左側旋轉；3分：行走時向左側傾倒；4分：不能自發行走，意識喪失。0分和4分者均被剔除。

1.3 BBB通透性評價

按照Uyama等[4]的方法，在再灌注后各個時間點前1 h用10%水合氯醛腹腔注射麻醉，經股靜脈注入2%EB生理鹽水溶液（4 ml/kg）1 h后，左心室灌注生理鹽水，斷頭取腦，取右側背外側新皮層，將其稱重后勻漿，而后離心，提取上清液。上清液用無水乙醇按1∶3稀釋，由熒光分光光度計測定其熒光值。根據標準曲線計算出EB含量（μg/ml），然后與組織的質量相比，得到每克腦組織的含量。

1.4 統計學方法

采用SPSS 13.0進行分析，多組定量資料間比較用方差分析，兩組資料間比較采用t檢驗，顯著性檢驗水準α=0.05。

2 結果

2.1 腦缺血-再灌注不同時間點BBB通透性的變化

結果發現，大鼠腦缺血-再灌注后3 h腦組織EB含量較正常組增多，再灌注24 h達高峰，再灌注48 h、72 h EB含量較再灌注24 h時下降，但仍高于對照組。12 h組和48 h組之間差異無統計學意義（P＞0.05）。

表1 不同時間點大腦皮層EB含量比較（）

表1 不同時間點大腦皮層EB含量比較（）

組別 只數 EB含量（μg/g） F值 P值對照組60.582±0.121再灌注3 h組60.977±0.128再灌注12 h組64.240±0.397266.802 <0.001再灌注24 h組65.543±0.396再灌注48 h組64.225±0.360再灌注72 h組62.615±0.231

2.2 丹參川芎嗪注射液對腦缺血-再灌注后BBB通透性的影響

在缺血2 h再灌注24 h設SLI組和鹽水組，結果顯示，SLI組腦組織EB含量明顯低于鹽水組。

表2 兩組干預后腦組織EB含量比較（）

表2 兩組干預后腦組織EB含量比較（）

分組 只數 EB含量（μg/g） t值 P值鹽水組65.540±0.3854.853 <0.05 SLI組64.405±0.423

3 討論

丹參、川芎為傳統的活血化瘀中藥，丹參可改善微循環、抗氧化、抗感染、下調ICAM-1和VCAM-1的表達[5-7]。川芎嗪可擴張血管、減少腦缺血時氧自由基的產生，發揮抑制神經細胞凋亡、抗感染等作用[8-9]。SLI是在丹參注射液與鹽酸川芎嗪注射液的基礎上研制出的中西藥復方制劑，已被用于臨床研究，集中體現了丹參注射液及鹽酸川芎嗪注射液的功效。

本實驗通過檢測大鼠損傷側腦組織內EB含量顯示，在腦缺血-再灌注3 h時，EB含量開始增加，即BBB的通透性開始上升，再灌注24 h達高峰。取BBB通透性最大的缺血-再灌注時間點，給予丹參川芎嗪注射液干預，結果顯示，丹參川芎嗪注射液能降低腦組織中的EB含量，即表示它能夠降低BBB通透性的升高程度。已有研究表明，BBB通透性升高與腦組織缺血-再灌注損傷過程中過多生成的OFR與細胞膜不飽和脂肪酸發生反應生成過氧化脂質及損害血管內皮細胞膜結構密切相關[10]。丹參川芎嗪注射液中的丹參素和川芎嗪分子量小，可以直接透過BBB，從而能直接滅活黃嘌呤氧化酶，提高SOD活性[11]，對脂質過氧化反應起到抑制作用，這可能是丹參川芎嗪注射液能夠降低腦缺血-再灌注損傷大鼠BBB通透升高程度的原因。雖然本研究結果顯示丹參川芎嗪注射液可減輕BBB通透性的升高程度，但是在此過程中丹參川芎嗪注射液的具體作用機制尚不明確，還需要做更進一步的后續研究。

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