凋亡抑制基因Survivin在胰腺癌中的表達及臨床意義

葉群立 楊 振

Survivin是凋亡抑制蛋白家族的一個新成員，是迄今發現最強的凋亡抑制因子[1]。近年研究表明，Survivin與腫瘤的發生、發展密切相關。本研究旨在探討胰腺癌組織中Survivin蛋白的表達及其與淋巴結轉移的關系，為臨床治療及提高患者的生存率提供理論依據。

1 材料與方法

1.1 臨床資料

采用鄭州大學第一附屬醫院病理科2004至2006年胰腺癌根治術后存檔蠟塊25例，均經病理學診斷為導管腺癌，術前均未接受放射治療和化學治療。其中男15例，女10例，年齡38～85歲，平均52歲。按1997年UICC制訂的TNM分期標準分期：Ⅰ期3例，Ⅱ期8例，Ⅲ期10例，Ⅳ期4例。有淋巴結轉移者17例，無轉移者8例。病理分化程度：高中分化16例，低分化9例；另取10例癌旁非腫瘤胰腺組織標本作對照。

1.2 Survivin的檢測

采用免疫組織化學鏈酶抗生物素蛋白-過氧化物酶（SP）法染色，SP試劑盒購于北京中山生物技術有限公司，用兔抗人Survivin多克隆抗體（武漢博士德生物工程有限公司）檢測Survivin的表達，嚴格按照說明書操作。已知陽性胰腺癌切片作為陽性對照，PBS緩沖液代替一抗作為陰性對照。結果判定：以細胞質中出現棕黃色顆粒為陽性細胞，400倍鏡下計數500個細胞，≥10%為陽性，＜10%為陰性。

1.3 統計學分析

采用SPSS10.0統計軟件包進行統計分析。計數資料的比較采用c2檢驗，相關分析采用Spearman等級分析。

2 結 果

2.1 Survivin蛋白陽性表達

Survivin在正常胰腺組織中不表達，腫瘤組織中Survivin蛋白陽性染色顆粒主要定位于腫瘤細胞胞質內，細胞膜亦可有少量著色，周圍間質亦見少量陽性染色。胰腺癌組Survivin蛋白陽性表達率72.0%（18/25）顯著高于正常胰腺組0%（0/10），差異有統計學意義（P＜0.05）。

2.2 Survivin蛋白陽性表達與胰腺癌臨床病理特征的關系

淋巴結轉移組Survivin蛋白陽性表達率（82.4%，14/17）顯著高于無淋巴轉移組（50.0%，4/8），P＜0.05；根據臨床病理分期，Ⅰ+Ⅱ期組（63.6%，7/11）與Ⅲ+Ⅳ組（78.6%，11/14）期之間Survivin蛋白陽性表達率差異有統計學意義（P＜0.05）；隨臨床分期增加及淋巴結的轉移，Survivin蛋白陽性表達率逐漸升高（rs=0.514，P＜0.05），見表1。另外，Survivin蛋白陽性表達與患者年齡、性別及分化程度無關（P＞0.05）。

表1 Survivin與胰腺癌臨床病理特征的關系

3 討 論

隨著人們對細胞凋亡認識的逐步加深，新的觀點認為腫瘤的發生發展亦是細胞凋亡的結果，細胞凋亡的抑制與惡性腫瘤的發生發展有密切關系[2]。Survivin基因是一個新近發現的凋亡抑制基因[1]，具有強大的凋亡抑制功能，其異常表達與多種人類腫瘤的發生發展及預后密切相關[3]，成為人們研究的一個熱點。

Ambrosini等[1]利用效應細胞蛋白酶受體1（EPR1）cDNA在人類基因組文庫中雜交篩選并克隆產生了1個IAP基因家族新成員，即Survivin基因。組織分布上Survivin只表達于胚胎和發育的胎兒組織，除胸腺、生殖腺外不見于其他終末分化的正常成人組織。相反在大多數腫瘤組織中均可檢測到Survivin的表達[4,5]。Survivin的主要生物學功能就是抗凋亡，它是目前已知作用最強的凋亡抑制蛋白。細胞凋亡主要有兩條途徑：死亡受體途徑和線粒體途徑，兩條途徑最終都通過激活下游效應因子caspase-3及caspase-7使細胞凋亡。Survivin可以直接粘附于活化的caspase-3及caspase-7，使其不能發揮作用，從而阻斷細胞凋亡過程[6]。

本研究顯示，Survivin在正常胰腺組織中不表達，Survivin在胰腺癌組織中的陽性表達率顯著高于正常胰腺組織，提示Survivin基因的表達發生在胰腺癌惡性轉化的早期，表明Survivin基因與胰腺癌的發生有關。Survivin基因在胰腺癌組織中的表達可能抑制了異常突變細胞的凋亡，從而擾亂了細胞生長和凋亡途徑，促使細胞逃離生長監控，導致腫瘤的發生。對Survivin蛋白的檢測可作為早期胰腺癌的輔助診斷。Satoh等[7]研究了胰腺癌、慢性胰腺炎和正常胰腺組織標本，發現Survivin僅在胰腺癌組織中有高表達，并與凋亡指數呈負相關。Suga等[4]對大腸組織從增生到癌變不同時期標本的Survivin表達情況進行了研究，所得到的結論基本相似。從而認為Survivin基因的表達是癌變早期事件。

本研究證實，Ⅰ+Ⅱ期組與Ⅲ+Ⅳ組期之間Survivin蛋白陽性表達率差異有統計學意義；淋巴結轉移組Survivin蛋白陽性表達率顯著高于無淋巴轉移組；隨臨床分期增加及淋巴結的轉移，Survivin蛋白陽性表達率逐漸升高。提示Survivin基因不但參與原位腫瘤形成過程的調節，促進其發展，可能還參與癌細胞轉移過程的調節，在轉移過程中發揮作用。由于Survivin對凋亡的抑制，癌細胞得以繼續分裂，造成腫瘤的臨近和遠隔部位轉移灶的形成。也有研究表明，Survivin mRNA的表達與胃癌侵犯的深度和腹膜轉移有關，認為Survivin在胃癌的局部侵犯過程中有一定的作用。Sarela等[8]認為，在惡性腫瘤中，脫落的癌細胞因為Survivin 對凋亡的抑制而受到了保護，得以繼續存活并分裂增殖，進而形成腫瘤鄰近或遠離部位的轉移，從而引起預后不良。

Survivin的異常表達與胰腺癌的發生、發展密切相關，其在胰腺癌中的高表達與淋巴結轉移及臨床病理分期密切相關，可能是影響胰腺癌預后的重要分子指標。

[1]Ambrosini G,Adida DC,Altier DC. A novel anti-apoptosis gene,survivin,expressed in cancer and lymphoma[J]. Nat Med,1997,3(8):917-921.

[2]Granville DJ,Carthy CM,Hunt DWC,et al. Apoptosis: molecular aspects of cell death and disease[J]. Lab Invest,1998,78(8):893-898.

[3]Salz W,Eisenberg D,Plescia J,et al. A survivin gene signature predicts aggressive tumor behavior[J]. Cancer Res,2005,65(9):3531-3534.

[4]Suga K,Yamamoto T,Yamada Y,et al. Correlation between transcriptional expression of survivin isoforms and clinicopathological findings in human colorectal carcinomas[J]. Oncol Rep,2005,13(5):891-897.

[5]Li JX,Zhou KY,Liang T,et al. Knockdown of survivin Expression by Small Interfering RNA Induces Apoptosis in Human Breast Carcinoma Cell Line MCF-7[J]. Ai Zheng,2005,24(3):268-272.

[6]Tamm I,Macadam Y,Sausville E,et al. IAP-family protein survivin inhibits caspase activity and apoptosis induced by Fas(CD95),Bax,caspases,and anticancer drugs[J]. Cancer Res,1998,58(23):5315-5320.

[7]Satoh K,Kaneko K,Hirota M,et al. Expression of survivin is correlated with cancer cell apoptosis and is involved in the development of human pancreatic duct cell tumors[J]. Cancer,2001,92(2):251-258.

[8]Sarela AI,Macadam RC,Farmery SM,et al. Expression of the antiapoptosis gene,survivin,predicts death from recurrent colorectal carcinoma[J]. Gut,2000,6(5):645-650.