消金膏質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

王 赫

消金膏為長(zhǎng)春市南關(guān)區(qū)中醫(yī)院臨床經(jīng)驗(yàn)方。是由黃柏、大黃、姜黃、蒼術(shù)、天花粉、白芷、陳皮、厚樸等中藥組成。具有活血、消腫、止痛、拔毒、疔瘡癤腫、癰、蛇盤(pán)瘡的功效。其中黃柏為常用中藥，也為方中君藥，為蕓香科植物黃皮樹(shù) Phellodendron chinense Schneid.的樹(shù)皮。臨床應(yīng)用十分廣泛，具有清熱、燥濕、瀉火、解毒的功效，主治熱痢、泄瀉、消渴、黃疸、痿、夢(mèng)遺、淋濁、痔瘡、便血、赤白帶下、骨蒸勞熱、目赤腫痛、口舌生瘡、瘡瘍腫毒等，含有的小檗堿、黃柏酮等成分有抗菌、收斂、消炎的作用，多各種皮膚濕毒、瘡瘍等癥狀效果良好。為了控制制劑的質(zhì)量、保證療效，我們利用高效液相色譜法對(duì)黃柏中的指標(biāo)成分鹽酸小檗堿進(jìn)行含量測(cè)定， 并對(duì)該方法學(xué)進(jìn)行研究，對(duì)黃柏、大黃、姜黃進(jìn)行薄層色譜鑒別研究。結(jié)果表明該方法可以用于消金膏復(fù)方制劑的質(zhì)量控制。

1 儀器與試劑

LC-10AT日本島津高效液相色譜儀；超聲波洗滌機(jī)；乙腈為色譜純，水為超純水，其他試劑均為分析純；消金膏（10g/袋）、黃柏陰性、大黃陰性、姜黃陰性均由長(zhǎng)春市南關(guān)區(qū)中醫(yī)院制劑室提供，對(duì)照品鹽酸小檗堿和對(duì)照藥材黃柏、大黃、姜黃均購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所。

2 定性鑒別

2.1 黃柏[1,2]

取本品內(nèi)容物10g，加甲醇50mL，加熱回流30min，放至室溫，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)訜o(wú)水乙醇溶解，使成1mL，作為供試品溶液；按處方比例取缺黃柏的陰性樣品10g，同法制成陰性對(duì)照溶液；另取黃柏對(duì)照藥材0.1g，加熱回流30min，放至室溫，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)訜o(wú)水乙醇溶解，使成1mL，作為對(duì)照藥材溶液。吸取上述3種溶液各6μL，分別點(diǎn)于同一以0.4%羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水（10∶6∶1∶1）為展開(kāi)劑，置氨蒸氣預(yù)飽和的展開(kāi)缸內(nèi)預(yù)平衡30min，上行展開(kāi)，展距為8cm，取出，晾干，在熒光（365nm）下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。陰性對(duì)照中無(wú)干擾。結(jié)果見(jiàn)圖1。

2.2 大黃[3,4]

取本品內(nèi)容物10g，加甲醇25mL，攪拌5min，超聲提取20min，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)铀?0mL使溶解，再加鹽酸1mL，加熱回流30min，立即冷卻，用乙醚振搖提取3次，每次20mL，合并乙醚液，蒸干，殘?jiān)右宜嵋阴ト芙猓钩?mL，作為供試品溶液。按處方比例取缺大黃的陰性樣品10g，同法制成陰性對(duì)照溶液；另取大黃對(duì)照藥材0.1g，同法制成對(duì)照藥材溶液。吸取上述3種溶液各6μL，分別點(diǎn)于同一以0.4%羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠H薄層板上，以正己烷-乙酸乙酯-甲酸（60∶20∶1）為展開(kāi)劑，上行展開(kāi)，展距為8cm，取出，晾干，在熒光（365nm）下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的橙黃色熒光斑點(diǎn)，陰性對(duì)照中無(wú)干擾。結(jié)果見(jiàn)圖2。

2.3 姜黃

取本品內(nèi)容物5g，加無(wú)水乙醇20mL，攪拌5min，回流提取30min，放冷，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)脽o(wú)水乙醇，使成1mL，作為供試品溶液。另取姜黃對(duì)照藥材0.2g，加無(wú)水乙醇25mL，回流提取30min，放冷，過(guò)濾，濾液蒸干，殘?jiān)脽o(wú)水乙醇溶解，使成1mL，作為對(duì)照藥材溶液；按處方比例取缺姜黃的陰性樣品10g，同法制成陰性對(duì)照溶液；吸取上述3種溶液各5μL，分別點(diǎn)于同一以0.4%羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以甲苯-三氯甲烷-乙醇（50∶30∶3）為展開(kāi)劑，上行展開(kāi)，展距為8cm，取出，晾干，在熒光（365nm）下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯黃色色的熒光斑點(diǎn)。結(jié)果見(jiàn)圖3。

3 含量測(cè)定

3.1 色譜條件

色譜柱：Shim-pack（島津）C18 （150×4.6mm，5μm）；流動(dòng)相：乙腈-0.15%磷酸溶液（含0.1%的十二烷基磺酸鈉）（50∶50）；檢測(cè)波長(zhǎng)：265nm。流速：1mL/min；柱溫：25℃[5]；按鹽酸小檗堿峰計(jì)算理論板數(shù)應(yīng)不低于4000。按外標(biāo)法計(jì)算。對(duì)照品溶液、供試品溶液及缺黃柏的陰性樣品溶液色譜圖見(jiàn)圖4～圖6。圖譜顯示，陰性對(duì)照溶液在鹽酸小檗堿相應(yīng)的保留時(shí)間處無(wú)吸收峰，表明處方中其他成分對(duì)測(cè)定鹽酸小檗堿無(wú)干擾。

3.2 對(duì)照品溶液的制備

精密稱(chēng)取100℃干燥至恒重的鹽酸小檗堿對(duì)照品適量，加流動(dòng)相振搖溶解，制成每1mL含0.03mg的溶液，即得。

3.3 供試品溶液的制備

取本品1g，精密稱(chēng)定，置50mL量瓶中，加流動(dòng)相40mL，超聲處理30min（功率250W，頻率40kHz），放冷，用流動(dòng)稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，棄去初濾液，取續(xù)濾液，即得[6]。

3.4 線(xiàn)性關(guān)系的考察

精密稱(chēng)取在100℃干燥干燥至恒重的鹽酸小檗堿對(duì)照品6.55mg，置25mL容量瓶中，加適量流動(dòng)相振搖溶解，并定容至刻度，搖勻，精密量取3mL，置25mL容量瓶中，加流動(dòng)相稀釋?zhuān)ㄈ葜量潭龋瑩u勻，得濃度為0.03144mg/mL的對(duì)照品溶液。分別吸取對(duì)照品溶液4、8、12、16、20μL，注入液相色譜儀，按上述色譜條件測(cè)定峰面積，以峰面積為縱坐標(biāo)（Y），鹽酸小檗堿含量為橫坐標(biāo)（X）繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，計(jì)算回歸方程為y=2365817.68x＋1045.81，相關(guān)系數(shù)r=1.0000。結(jié)果表明，鹽酸小檗堿在0.12576～0.62880μg范圍內(nèi)線(xiàn)性關(guān)系良好。

3.5 中間精密度試驗(yàn)

在不同時(shí)間由不同的分析人員照“3.3”項(xiàng)下制備供試品溶液（批號(hào)：20090418），測(cè)定鹽酸小檗堿峰面積（n=6），結(jié)果表明鹽酸小檗堿含量的RSD為1.42%，說(shuō)明該方法中間精密度良好。

圖4 鹽酸小檗堿對(duì)照品

圖5 消金膏供試品圖譜

圖6 陰性對(duì)照?qǐng)D譜

3.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取同一供試品溶液（批號(hào)：20090418），室溫下放置，按上述色譜條件，分別于0、2、4、6、8、10h進(jìn)樣，測(cè)定峰面積，其鹽酸小檗堿峰面積的RSD為1.02%，表明供試品溶液中鹽酸小檗堿在10h內(nèi)穩(wěn)定。

表1 準(zhǔn)確度實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.7 重復(fù)性試驗(yàn)

取同一批號(hào)的樣品6份（批號(hào)：20090418），按照“3.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按照上述色譜條件測(cè)定，結(jié)果鹽酸小檗堿含量的RSD為1.28%，表明該方法重復(fù)性良好。

3.8 準(zhǔn)確度試驗(yàn)

精密稱(chēng)取已知鹽酸小檗堿含量的供試品（其鹽酸小檗堿含量按重復(fù)性試驗(yàn)6次測(cè)定平均值計(jì)算，為1.526mg/g，批號(hào)：20090418）6份，分別精密加入鹽酸小檗堿濃度為0.382mg/mL的對(duì)照品溶液2mL，照“3.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，測(cè)定，外標(biāo)法計(jì)算，見(jiàn)表1，測(cè)得平均回收率為99.19%，RSD=0.81 %（n=6）。

3.9 樣品的含量測(cè)定

取3批樣品，按照“3.3”項(xiàng)下制備供試品溶液，照上述色譜條件測(cè)定，以外標(biāo)法計(jì)算，測(cè)定3批樣品的含量，含量測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 樣品含量測(cè)定（n=3）

4 討 論

4.1 供試品溶液制備方法的選擇

分別用流動(dòng)相和甲醇超聲和回流的方法提取供試品進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，結(jié)果顯示超聲和回流的實(shí)驗(yàn)結(jié)果是一致的，由于甲醇提取的供試品雜質(zhì)較多，并且高效液相色譜理論塔板數(shù)達(dá)不到要求，所以我們選擇用流動(dòng)相作為提取溶劑、操作方法方便的超聲提取方式。

4.2 檢測(cè)波長(zhǎng)的確定

選用濃度為0.02mg/mL的鹽酸小檗堿對(duì)照品，進(jìn)行紫外掃描，圖譜顯示在199～400nm處有5個(gè)吸收峰，文獻(xiàn)多報(bào)道多用265nm，同時(shí)參考《中華人民共和國(guó)藥典}2005年版一部黃柏項(xiàng)下含量測(cè)定方法，經(jīng)試驗(yàn)以265nm為檢測(cè)波長(zhǎng)其靈敏度高，能夠滿(mǎn)足質(zhì)量控制的要求。

4.3 流動(dòng)相的選擇

本研究中為了使鹽酸小檗堿達(dá)到較好的分離，在流動(dòng)相中加入了十二烷基磺酸鈉，它是一種表面活性劑，十二烷基磺酸鈉電離的十二烷基磺酸根可與目標(biāo)分子互相吸引作用，得到一個(gè)較大的基團(tuán)，同時(shí)十二烷基的存在保證了在反相填料C18的表面有一定的互相作用，增大的目標(biāo)物質(zhì)的保留，十二烷基磺酸鈉在水溶液中黏度大且容易產(chǎn)生氣泡，流動(dòng)相現(xiàn)用現(xiàn)配，并且要過(guò)濾，使用結(jié)束后要用水沖洗管道、以便很好的維護(hù)儀器[7,8]。

4.4 小結(jié)

本文所建立的方法快速簡(jiǎn)便準(zhǔn)確，重復(fù)性好，可用于消金膏的質(zhì)量控制。

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