新生兒缺氧缺血性腦病與T輔助細胞亞群功能的相關性探討

李敏遐 候燕明 林冬云

新生兒缺氧缺血性腦病(hypoxic ischemic encephalopathy，HIE)是圍生期新生兒因缺氧、缺血引起的腦部疾病，主要由宮內窘迫、新生兒窒息缺氧引起，窒息愈嚴重，時間愈長，腦病愈嚴重，后遺癥發生率也愈高[1-3]。一般來說，輕度患兒預后良好，病情嚴重者可導致早期死亡或造成智能低下、腦性癱瘓、癲癇及共濟失調等不可逆性腦損害，是引起新生兒死亡和(或)兒童神經精神發育障礙的主要原因。嚴重影響患兒今后的生活。

近年來，免疫系統在新生兒HIE中的作用受到關注，有報道指出Th1、Th2亞群及其相互之間的平衡關系與新生兒HIE的發生、發展、預后及轉歸有密切關系[2]。為進一步探討T輔助細胞亞群功能與新生兒HIE的相關性，本研究對在清遠市人民醫院收治的患有HIE的新生兒80例進行T輔助細胞亞群檢測，并與正常新生兒對比，現將結果報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集2008年3月至2009年1月清遠市人民醫院收治的HIE患兒80例，其中男48例，女32例，胎齡38.0～41.2周，平均（38.8±2.1）周；出生時體質量2650～3850g；入院時間為出生后1.0～44.5h，平均（15.6±2.8）h；臨床分度為輕度HIE 28例，中度HIE 36例，重度HIE 16例。所有患兒的診斷標準和臨床分度符合1996年中華醫學會兒科分會新生兒組杭州會議制定的《新生兒缺氧缺血性腦病診斷依據和臨床分度標準》[2]，并經頭顱CT掃描確診。同時選取于清遠市人民醫院產科同期出生的正常兒40例，作為正常對照組，其中男22例，女18例，胎齡37.5～41.5周，平均（37.5±3.2）周，出生時體質量2680～4000g，出生時及生后均無窒息及缺氧史。兩組新生兒在性別、胎齡和出生體質量等一般狀況等方面比較，P＞0.05，差異無統計學意義。

1.2 方法

1.2.1 標本采集

HIE患兒于就診當時抽取股靜脈血5mL，對照組新生兒在出生時留取臍帶血5mL。將采集得的外周血經肝素抗凝，外周血單個核細胞(PBMC)的分離應用密度梯度離心法進行，用Buffer緩沖液(含2%FCS的0.1mol/L PBS)懸浮細胞，調整細胞濃度為5×106/mL，置于4℃，備用。

1.2.2 檢測方法

采用Dynal免疫磁珠法對Th細胞進行分離純化。用雙抗體夾心酶聯免疫吸附法（ELISA）檢測培養上清液中的γ-干擾素（IFN-γ）、白細胞介素2（IL-2）、IL-4及IL-6的水平，操作具體步驟按照試劑盒說明進行。

1.3 統計學方法

采用SPSS12.5統計軟件包對數據進行處理，計量資料以均數±標準差（±s）表示，兩組間比較應用t檢驗，率比較采用χ2檢驗，以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 兩組新生兒T輔助細胞亞群分泌細胞因子IFN-γ、IL-2、IL-4和IL-6的水平比較

結果見表1。

表1 兩組新生兒T輔助細胞亞群分細胞因子IFN-γ、IL-2、IL-4和IL-6的水平(±s，pg/mL)

表1 兩組新生兒T輔助細胞亞群分細胞因子IFN-γ、IL-2、IL-4和IL-6的水平(±s，pg/mL)

與正常新生兒組比較，*P＜0.05，差異有統計學意義

2.2 HIE組病情不同程度患兒間T輔助細胞亞群分細胞因子水平比較

結果見表2。

表2 HIE組病情不同程度T輔助細胞亞群分細胞因子水平(±s，pg/mL)

表2 HIE組病情不同程度T輔助細胞亞群分細胞因子水平(±s，pg/mL)

與輕度缺氧缺血性腦病患兒比較，△P＜0.05，差異有統計學意義

3 討 論

新生兒HIE是由于患兒在圍生期缺氧所導致的顱腦損傷性疾病[4]，是臨床上導致新生兒死亡及嬰幼兒神經系統功能發育障礙的主要因素。而神經系統和免疫系統均是重要調節系統，共同維持機體內環境處在相對穩定的狀態。當機體受到刺激產生應激反應或感染后，這兩個系統常產生相互作用。免疫系統通過細胞因子對神經系統發揮著特殊的調節作用，相當一部分神經遞質和內分泌激素受體均可存在于免疫細胞上[5,6]。

T輔助細胞根據其分泌細胞因子的不同而分成Th1和Th2兩個亞型，Th1主要分泌IFN –γ、IL-2和TNF-α，以介導細胞免疫功能為主；Th2 主要分泌IL- 4、IL- 6、IL-8及IL-10等參與體液免疫的因子。正常情況下，Th1 /Th2保持在動態平衡的狀態，任何一方的增多或減少都可能打破原有的平衡，導致患兒機體免疫功能異常。本實驗檢測IFN –γ、IL-2的水平來反映Th1的功能；IL- 4、IL- 6的水平來反映Th2的功能[7,8]。

本實驗結果表明，本組HIE患兒IFN –γ、IL-2水平明顯低于正常新生兒組，且IFN –γ、IL-2水平與患兒病情的嚴重程度呈負相關，病情越重，IFN-γ、IL-2水平越低。Th2 細胞所分泌的IL-4、IL-6明顯增多，高于正常新生兒組，IL-4、IL-6水平與患兒病情的嚴重程度呈顯著正相關，病情越嚴重，IL-4、IL-6的水平越高。呈現Th2功能亢進，Th1功能下降，Th1/Th2 比例失衡，提示Th細胞的異常表達對新生兒HIE的發病有重要意義。有研究指出，IL-6直接參與HIE腦損傷，IFN–γ、IL-2則通過損害機體的免疫功能間接引起新生兒腦損傷，其水平可反映患兒缺氧缺血的嚴重程度。因此，對新生兒的T輔助細胞亞群功能的檢測，可為疾病的早期診斷、病情輕重程度的評估和判斷預后的重要指標。

[1]韓玉昆. 新生兒缺氧缺血性腦病診斷依據和臨床分度[J].中華兒科雜志,1997,12(2):99.

[2]中華醫學會兒科學分會新生兒學組.新生兒缺氧缺血性腦病診斷標準[J].中華兒科雜志,2005,43(8):584.

[3]錢雁萍.螺旋CT在新生兒缺氧缺血性腦病中的應用[J].江西醫藥,2009,44(12):1252-1253.

[4]祝兆蓮,曹洪英.新生兒缺氧缺血性腦病病因分析[J].黑龍江醫學,2001,25(11):879.

[5]張園園,王青青,王建莉,等.NK受體KIR生物學功能的研究進展[J].免疫學雜志,2005,21(3):262-264.

[6]陳慶華,安云慶.自然殺傷細胞活化信號的轉導和效應[J].首都醫科大學學報,2005,26(3):360-362.

[7]王莉佳,趙曉東,劉恩梅,等.新生兒缺氧缺血性腦病T細胞活化受抑的機制探討[J].實用兒科臨床雜志,2003,18(2):116-120.

[8]郭炯光,洪小楊,錢淑鴦,等.新生兒血清S-100蛋白水平與腦損傷的關系[J].中國現代醫藥,2006,8(8):38-39.