復方甘草酸苷片的質量標準研究

陳傳瑩 單 亮 李 強

復方甘草酸苷片（商品名：美能）是由甘草酸單銨鹽、甘氨酸、DL-蛋氨酸組成的復方制劑，于1948年在日本上市，現主要用于治療慢性肝病，改善肝功能異常[1]，療效確切，臨床應用多年。從傳統中藥材甘草中可提取得到甘草酸，再經成鹽可制備得甘草酸單銨鹽，長期以來被廣泛應用于醫藥、食品和化妝品等領域，對其臨床以及其他用途的安全性檢驗已獲得FDA的認可[2]，國家標準中規定甘草酸單銨鹽的含量為73.0%。為保證本制劑批間質量的一致性和安全性，進行質量標準考察實驗。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

島津（泵LC-10AT；檢測器SPD-10A）HPLC，浙大N-2000色譜工作站；色譜柱：Kromasil 100A C18柱，規格250mm×4.6mm（Dikma公司生產）；ZRS-8G智能溶出試驗議（天津大學無線電廠）。

1.2 供試樣品

復方甘草酸苷片（規格：甘草酸單銨25mg、甘氨酸25mg、蛋氨酸25mg；批號：20041215、20041219、20041223）。

1.3 對照品

甘草酸單銨（批號：20040811，由甘草酸單銨原料精制而成，含量為99.05%，有關物質為0.57%）。

1.4 復方甘草酸苷片上市樣品

復方甘草酸苷片（規格：甘草酸單銨25mg、甘氨酸25mg、蛋氨酸25mg；進口藥品注冊證號：H20030184；生產批號：2004018；生產單位：日本美能發源制藥公司（Minophagen Pharmaceutical Co.，Ltd）。

2 含量測定

2.1 甘草酸苷

2.1.1 色譜條件

色譜柱：Kromasil 100A C18柱，規格250mm×4.6mm（Dikma公司生產）；以2%的醋酸-乙腈=65∶35為流動相；檢測波長為254nm；流速：1.0mL/min；進樣量20μL[3,4]。

2.1.2 測定方法

取本品20片，研細，精密稱取適量(約相當于甘草酸苷25mg)，置50mL量瓶中，加水溶解后并稀釋至刻度，搖勻，放置30min后，濾過，取續濾液作為供試品溶液；另取經105℃干燥至恒重的甘草酸單銨對照品（以甘草酸苷計）適量，精密稱定，同法制成每1mL中約含500μg的溶液作為對照品溶液，精密量取上述兩種溶液各20μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖及峰面積，按外標法以峰面積計算即得，色譜圖見圖1。

2.1.3 標準曲線

取甘草酸單銨對照品以甘草酸苷計適量，用水制成每1mL中各含80、160、320、480、800μg的溶液，分別量取20μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，以進樣濃度（C）為橫坐標，甘草酸單銨峰峰面積（S）為縱坐標，計算直線回歸方程，繪制標準曲線。結果表明，在76.8～796.2μg/mL范圍內，線性關系符合要求。

2.1.4 溶液穩定性試驗

照含量測定項下方法配制供試品溶液，于室溫下自然放置，分別于0、2、4、8、12h進樣，測定甘草酸苷峰面積，計算日內溶液的穩定性。RSD為0.9%，供試品溶液在12h內基本穩定。

2.1.5 重現性試驗

取同一批號樣品，分別稱取適量（約相當于甘草酸苷25mg）5份，精密稱定，置50mL量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過，續濾液作為供試品溶液，照含量測定項下的方法測定。RSD為2.30%，本法的重現性符合要求。

2.1.6 加樣回收率

按處方量的80%、100%、120%稱取甘草酸單銨（以甘草酸苷計）對照品各兩份，精密稱定，分置100mL量瓶中，并同時稱取處方量的空白輔料分置量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續濾液作為供試品。另精密稱取甘草酸單銨對照品（以甘草酸苷計）適量，同法溶解并稀釋成每1mL中約含500μg的溶液作為對照品溶液。照含量測定方法測定，按外標法以峰面積計算回收率[5]。結果平均回收率為98.74%，RSD為0.9%，符合要求。

2.1.7 三批樣品及上市樣品含量測定

取本品及上市樣品各20片，除去包衣后，精密稱定，研細，精密稱取適量（約相當于甘草酸苷25mg），置100mL量瓶中，加水適量，振搖使溶解，并加水稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續濾液作為供試品溶液；另取經105℃干燥至恒重的甘草酸單銨對照品（以甘草酸苷計）適量，精密稱定，同法制成每1mL中約含500μg的溶液作為對照品溶液，分別量取供試品溶液與對照品溶液各20μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按外標法以峰面積計算，即得[6]。本品3批復方甘草酸苷片及市售復方甘草酸苷片的含量測定，結果見表1。

表1 含量測定結果

參照以上結果，將復方甘草酸苷片的含量限度訂為”本品含甘草酸苷（C42H62O16）應為標示量的90.0%～110.0%”。

2.2 蛋氨酸

2.2.1 測定法

取本品20片，精密稱定，研細，精密稱取適量（約相當于蛋氨酸25mg），置250mL碘瓶中，加水25mL使溶解，再加碘化鉀4g，磷酸鹽緩沖液（磷酸氫二鉀61g，磷酸二氫鉀20.4g，加水溶解并稀釋至500mL，pH=7.0）5mL，精密加入碘滴定液（0.1mol/L）5mL，密塞，搖勻，在暗處放置30min，用硫代硫酸鈉滴定液（0.1mol/L）滴定，至近終點時，加淀粉指示液，繼續滴定至藍色消失，并將滴定液的結果用空白試驗校正。每1mL的硫代硫酸鈉滴定液（0.1mol/L）相當于7.461mg的C5H11NO2S 。

2.2.2 重現性試驗

精密稱取本品適量（約相當于蛋氨酸25mg）6份，分別置100mL量瓶中，照含量測定方法測定含量。RSD為0.50%，重現性符合要求。

2.2.3 回收率

取蛋氨酸約20、25、30mg各兩份，精密稱定，同時稱取處方量除蛋氨酸外其他成分，分置100mL量瓶中，照含量測定方法測定，計算回收率。平均回收率為99.78%，RSD為0.75%，回收率符合要求。

2.2.4 三批樣品及上市樣品的含量測定

取樣品及上市樣品，照含量測定方法測定含量，結果見表2。

表2 含量測定結果

參照以上結果，將本品的蛋氨酸含量限度訂為：“含蛋氨酸（C5H11NO2S）應為標示量的90.0%～110.0%。”

2.3 甘氨酸

2.3.1 測定方法

精密稱取本品適量（約相當于甘氨酸25mg），置100mL量瓶中，加入1mol/L鹽酸溶液5mL，放置15min，加水至刻度，搖勻，濾過，精密量取10mL，加甲基紅指示液1滴，用氫氧化鈉滴定液（0.1mol/L）滴定至黃色，再加中性甲醛溶液（對酚酞指示液顯中性）10mL，振搖，放置10分鐘，用氫氧化鈉滴定液（0.1mol/L）滴定，近終點，加酚酞指示液1mL，繼續滴定至溶液呈橘紅色，并將滴定液的結果用空白試驗校正。每1mL的氫氧化鈉滴定液（0.1mol/L）相當于7.507mg的C2H5NO2。

2.3.2 重現性試驗

精密稱取本品適量（約相當于甘氨酸25mg）6份，分別置100mL量瓶中，照含量測定方法測定含量，RSD為0.39%，重現性符合要求。

2.3.3 回收率

取甘氨酸約20、25、30mg各兩份，精密稱定，同時稱取處方量除甘氨酸外其他成分分置100mL量瓶中，照含量測定方法測定，計算回收率為99.64%，RSD為0.29，符合要求。

2.3.4 三批樣品的含量測定

取樣品及市售復方甘草酸苷片，照含量測定方法測定含量，結果見表3。

表3 含量測定結果

參照以上結果，將本品的甘氨酸含量限度訂為：“含甘氨酸（C2H5NO2） 應為標示量的 90.0%～110.0%。

3 討 論

本試驗提供了一個可行的測定及評價復方甘草酸苷片質量標準的方法，建立了在同一系統使用性條件下對復方甘草酸苷片中3種主成分進行含量測定，操作簡便、準確、重復性好，各組分分離完全，可有效控制復方甘草酸苷片的質量。三組分含量測定結果表明：實驗藥品的處方合理，工藝穩定，含量符合《中國藥典》2005版的要求。

[1]He GX.Clinical therapeutic observation of Kushenin Plus compound Glycyrrhizin in the treatment of chronic type B hepatitis China[J].J Chin Mater Med,2008,33(4):443-444.

[2]Qu ZT,Xiang ZB.Advances in pharmacological action of glycyrrhizin[J]. Lishizhen Med Mater Med Res,2007,18(10):2568.

[3]Tian L,Gao XL. Study on the dissolution of compound Glycyrrhizin tablets[J]. Chin JMAP,2009,26(6):471-474.

[4]Fu YH.Determination of ammonium glycyrrhizinate in compound glycyrrhizin injection by HPLC[J]. Chin Tradit Patent Med,2006,28(6):913-914.

[5]Li YF,Li ZH,Zhu ZH.HPLC determination of glycyrrhizic acid in Chenxianglubailu tablets[J].Chin J Pharm Anal,2008,28(2):304-305.

[6]Chen CY,Shan L,Li Q. Determination of dissolution of compound Glycyrrhizin tablets by HPLC[J].Chin JMAP,2009,26(7):598-601.