七葉神安片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

李玉英，曾雪花，謝雄瑞，吳俊賢

(1.廣東省河源市藥品檢驗(yàn)所，廣東 河源 517000; 2.廣東省佛山市三水區(qū)人民醫(yī)院，廣東 佛山 528100)

七葉神安片為2005年版《中國(guó)藥典(一部)》收載品種，原標(biāo)準(zhǔn)中只有人參皂苷Rb3的定量指標(biāo)，沒有人參皂苷Rb1的定量指標(biāo)，且按藥典標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)時(shí)，從進(jìn)樣第2針開始人參皂苷Rb3和人參皂苷Rb1對(duì)照品色譜峰有時(shí)會(huì)消失。為使檢驗(yàn)工作順利進(jìn)行并保證產(chǎn)品質(zhì)量，筆者改進(jìn)了人參皂苷Rb3的梯度洗脫方法[1]，并用高效液相色譜(HPLC)法測(cè)定人參皂苷Rb1含量[1－4]，效果滿意。

1 儀器與試藥

Agilent 1200型高效液相色譜儀(美國(guó)Agilent公司);CP225D型電子天平(德國(guó)Sartorius公司);KQ－250D型超聲波清洗儀(昆山市超聲儀器有限公司)。七葉神安片(昆明大觀制藥有限公司，批號(hào)為20080909;昆明興中制藥有限責(zé)任公司，批號(hào)為20080506;廣東環(huán)球制藥有限公司，批號(hào)為080903;廣西北生藥業(yè)股份有限公司，批號(hào)為090201);陰性對(duì)照樣品(自制);人參皂苷Rb3對(duì)照品和人參皂苷Rb1對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)分別為111686－200501和11704－200217);乙醇(分析純，廣州化學(xué)試劑廠)，乙腈(色譜純，廣州化學(xué)試劑廠)，磷酸(分析純，廣州化學(xué)試劑廠)，水(超純水，自制)。

2 方法與結(jié)果

2.1 人參皂苷Rb3含量測(cè)定用梯度洗脫方法改進(jìn)

色譜柱以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;流動(dòng)相為乙腈(流動(dòng)相A)，0.2%磷酸溶液(流動(dòng)相B)，梯度洗脫按表1安排進(jìn)行;流速1.0 mL/min;檢測(cè)波長(zhǎng)203 nm;柱溫32℃;進(jìn)樣量10 μL。理論板數(shù)按人參皂苷Rb3峰計(jì)算應(yīng)不低于6000。將藥典中人參皂苷Rb3的梯度洗脫方法改進(jìn)后，又做過8次試驗(yàn)，再也沒有出現(xiàn)人參皂苷Rb3和人參皂苷Rb1對(duì)照品峰消失的現(xiàn)象。

表1 梯度洗脫條件

2.2 人參皂苷Rb1含量測(cè)定

2.2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

與2.1項(xiàng)相同。

2.2.2 溶液制備

精密稱取人參皂苷Rb1對(duì)照品適量，加乙醇制成每1 mL含人參皂苷Rb10.25 mg的對(duì)照品溶液;取本品20片，除去包衣，研細(xì)，混勻，取約相當(dāng)于2片質(zhì)量，精密稱定，置具錐形瓶中，精密加入乙醇20 mL，稱定質(zhì)量，超聲(功率300 W，頻率50 kHz)處理15 min，放冷，稱定質(zhì)量，用乙醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻后濾過，得供試品溶液。

2.2.3 方法學(xué)考察

陰性干擾試驗(yàn):取空白樣品，按供試品溶液制備項(xiàng)下的方法提取并測(cè)定。結(jié)果陰性對(duì)照品溶液在人參皂苷Rb1對(duì)照品出峰位置無吸收，說明陰性無干擾(圖1)。

圖1 高效液相色譜圖

線性關(guān)系考察:取人參皂苷Rb1對(duì)照品溶液，分別進(jìn)樣2.5，5.0，10，20，30，40 μL 測(cè)定。以人參皂苷 Rb1對(duì)照品進(jìn)樣量(μg)為橫坐標(biāo)(X)、峰面積積分值為縱坐標(biāo)(Y)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，回歸方程為 Y=1.87684 X+8.40332，r=0.9999(n=6)。結(jié)果表明，人參皂苷Rb1進(jìn)樣量在0.625～10.00 μg范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

重現(xiàn)性試驗(yàn):取同一批(批號(hào)為20080909)樣品，依法制備6份供試液并測(cè)定。結(jié)果人參皂苷Rb1的峰面積平均為562，RSD為0.2%(n=6)，表明方法重現(xiàn)好。

穩(wěn)定性試驗(yàn):取同一供試品(批號(hào)為20080909)溶液，分別于0，2，4，6，8，12，20，24 h 時(shí)依法測(cè)定。結(jié)果人參皂苷 Rb1峰面積平均值為566，RSD為0.3%(n=8)，表明供試品溶液在 24 h內(nèi)穩(wěn)定。

加樣回收試驗(yàn):取批號(hào)為20080909的樣品約0.42 g，精密稱定，置具錐形瓶中，平行取6份，分別精密加入人參皂苷Rb1對(duì)照品1.25 mg和乙醇20 mL，稱定質(zhì)量，超聲(功率300 W，頻率50 kHz)處理15 min，放冷，稱定質(zhì)量，用乙醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，依法測(cè)定。結(jié)果見表2。

表2 人參皂苷Rb1加樣回收試驗(yàn)結(jié)果(n=6)

2.2.4 樣品含量測(cè)定

取4批樣品，按供試品溶液制備方法制備溶液，分別精密吸取供試品溶液及對(duì)照品溶液各10 μL，注入液相色譜儀，測(cè)定含量。結(jié)果樣品的人參皂苷Rb1平均含量為0.29 mg/片。

3 討論

按藥典方法測(cè)定人參皂苷Rb3含量時(shí)，從進(jìn)樣第2針開始人參皂苷Rb3和人參皂苷Rb1對(duì)照品峰有時(shí)會(huì)消失。筆者認(rèn)為藥典中的梯度洗脫方法不合理，洗脫時(shí)流動(dòng)相比例從50∶50轉(zhuǎn)為30∶70只有6 min，時(shí)間太短，色譜柱中流動(dòng)相比例不能有效達(dá)到規(guī)定，使對(duì)照品不能有效洗脫檢測(cè)，色譜峰不會(huì)出現(xiàn)。改進(jìn)藥典中的梯度洗脫方法后，可以有效洗脫檢測(cè)成分，因而再也沒有出現(xiàn)對(duì)照品峰消失的現(xiàn)象。因此建議藥典委員會(huì)改進(jìn)人參皂苷Rb3高效液相含量測(cè)定用梯度洗脫方法。

2005年版《中國(guó)藥典(一部)》收載品種七葉神安片的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中沒有人參皂苷Rb1的定量指標(biāo)，參照2005年版《中國(guó)藥典(一部)》，用HPLC法測(cè)定人參皂苷Rb1含量，結(jié)果人參皂苷Rb1與其他雜質(zhì)峰分離度良好。HPLC法具有簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、靈敏度高、回收率好等優(yōu)點(diǎn)，能有效測(cè)定七葉神安片的人參皂苷Rb1含量。

[1]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典(一部)[M].北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2005:303－304.

[2]廖曉春，熊 毅，胡煒彥，等.高效液相色譜法測(cè)定七葉神安片中人參皂苷 Rb3的含量[J].藥學(xué)分析雜志，2006，26(3):322 －324.

[3]高明菊，馬 妮，曾 江，等.七葉神安滴丸質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)研究[J].現(xiàn)代中藥研究與實(shí)踐，2003(S1):57－58.

[4]崔秀明，周家明，柯金虎，等.七葉神安滴丸對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)的藥效學(xué)研究[J].現(xiàn)代中藥研究與實(shí)踐，2003(S1):58－59.