中成藥和保健品中非法添加減肥類化學(xué)物質(zhì)的快檢

毛 慶，張小松

(重慶市藥品檢驗(yàn)所，重慶 401121)

近年來，大量減肥類產(chǎn)品充斥我國中成藥、保健品市場，一些不法個(gè)人、廠商唯利是圖，為獲得明顯的療效，在藥品和保健品中非法添加茶堿、鹽酸麻黃堿、咖啡因、鹽酸芬氟拉明、酚酞、鹽酸西布曲明等減肥類化學(xué)物質(zhì)[1]。為及時(shí)有效地打擊這種非法行為，筆者利用最新的核－殼填料技術(shù)建立了適用于《國家食品藥品監(jiān)督管理局藥品檢驗(yàn)補(bǔ)充檢驗(yàn)方法和檢驗(yàn)項(xiàng)目批準(zhǔn)件》(No.2006004)中關(guān)于治療肥胖癥的中成藥非法添加減肥類化學(xué)物質(zhì)的快速檢測模式。

1 儀器與試藥

安捷倫1100型液相色譜儀。茶堿、鹽酸麻黃堿、咖啡因、鹽酸芬氟拉明、酚酞、鹽酸西布曲明對照品(批號分別為100121－199903，171241－200102，171215－200305，10073－0002，0091－9601，100624－200401，中國藥品生物制品檢定所);甲醇、乙腈(色譜純)，水(超純水)，甲酸銨、甲酸(分析純);減肥產(chǎn)品(市場抽樣品)。

2 方法與結(jié)果

2.1 分析條件

色譜柱:KinetexTMC18柱(100 mm ×2.10 mm，2.6μm);流動(dòng)相:0.02 mol/L甲酸銨(用甲酸調(diào)節(jié)pH至3.50)緩沖液為組分A、乙腈為組分B、甲醇為組分C，起始比例為 A∶B∶C=86∶7∶7，4 min變化到 A ∶B ∶C=40 ∶35∶35，并保持到 20 min;流速:0.20 mL/min;柱溫:35℃ ;檢測波長:220 nm。

2.2 溶液制備

取膠囊內(nèi)容物約1粒量，取研細(xì)的片劑細(xì)粉約1片量，取茶包內(nèi)容物約1包量，分別置具塞試管中，加70%的甲醇溶液25 mL，密塞，振搖、超聲處理 5 min，靜置，用 0.22μm 濾頭過濾，取續(xù)濾液，用初始流動(dòng)相稀釋10倍作為供試品溶液。分別取鹽酸西布曲明、鹽酸芬氟拉明、酚酞、鹽酸麻黃堿、茶堿、咖啡因?qū)φ掌愤m量，用初始流動(dòng)相溶解并稀釋成分別約含50 μg/mL的混合溶液，作為對照品溶液。

2.3 測定法及分析

分別進(jìn)樣 10 μL，記錄色譜圖(圖1)。在20 min內(nèi)，能夠快速確認(rèn)樣品紫外色譜圖上的3種可疑減肥物質(zhì)，即咖啡因、鹽酸芬氟拉明、鹽酸西布曲明;利用安捷倫1100自動(dòng)進(jìn)樣器的進(jìn)樣程序，對疑似峰用對應(yīng)的對照品溶液自動(dòng)加樣后進(jìn)樣，用二極管陣列檢測器對加樣后疑似色譜峰進(jìn)行峰純度檢測，并經(jīng)同一液相條件下液質(zhì)聯(lián)用儀一級和二級質(zhì)譜定性確認(rèn)結(jié)果(圖2)。

圖1 混合對照品色譜圖

圖2 抽檢樣品色譜圖

3 討論

國家食品藥品監(jiān)督管理局規(guī)定:對涉嫌非法添加化學(xué)藥品的治療肥胖癥的中成藥進(jìn)行檢查，【鑒別】用液相色譜保留時(shí)間及該色譜峰的一級、二級質(zhì)譜圖與對照品一致來確認(rèn);【含量測定】按照2005年版《中國藥典(二部)》附錄ⅤD高效液相色譜法測定。但實(shí)際工作中參照此方法監(jiān)管市場需要花大量時(shí)間來摸索方法，致使打假工作效率不高。非法添加減肥類化學(xué)物質(zhì)的目的是能夠產(chǎn)生好的減肥療效，非法添加的量一定是常量或超量，因而常規(guī)高效液相色譜法就能滿足對非法添加的減肥類化學(xué)物質(zhì)的分離、初步定性、定量;為了確保定性的準(zhǔn)確，用色譜峰(前提還是要有效分離)的一級、二級質(zhì)譜圖與對照品一致來確認(rèn)。但是常規(guī)高效液相色譜和液質(zhì)聯(lián)用間存在一個(gè)很大的問題，兩者的流動(dòng)相組成、流速等不能通用，需要摸索兩套不同的色譜條件。利用超高壓液相色譜(UPLC)法在質(zhì)譜要求的0.2 mL/min流速下可以對樣品進(jìn)行良好分離，但是UPLC太昂貴，藥檢所配置較少;5μm填料、4.6 mm內(nèi)徑的色譜柱的常規(guī)流速約為1 mL/min，在柱后用三通分流進(jìn)質(zhì)譜檢測器，色譜峰的擴(kuò)散太大。

我所利用美國菲羅門公司新近研發(fā)KinetexTM2.6μm填料、2.1 mm內(nèi)徑的核－殼技術(shù)色譜柱，在常規(guī)安捷倫1100型高效液相色譜儀上實(shí)現(xiàn)了UPLC法的性能，在以甲酸銨緩沖鹽為流動(dòng)相、流速為0.2 mL/min的條件下使多個(gè)減肥類化合物良好分離，同時(shí)提高了檢測靈敏度，減少了溶劑的消耗。

筆者認(rèn)為，建立一種流速(0.2 mL/min左右)適用于常規(guī)液相色譜儀、流動(dòng)相為質(zhì)譜適用的揮發(fā)性緩沖鹽、各目標(biāo)化合物完全分離且峰形良好的色譜方法是當(dāng)前打假工作的當(dāng)務(wù)之急。這樣就能真正讓常規(guī)液相和質(zhì)譜聯(lián)用成為現(xiàn)實(shí)，實(shí)現(xiàn)補(bǔ)充檢驗(yàn)方法中的【鑒別】和【含量測定】方法的液相條件統(tǒng)一，減少非標(biāo)方法摸索中的繁瑣和不確定性，本快檢模式能使樣品的粗篩工作盡量簡化，提高工作的目標(biāo)性和準(zhǔn)確性。

[1]譚小秋，高燕紅.高效液相色譜法測定減肥食品中的鹽酸芬氟拉明含量[J].中華預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志，2001，35(2):124－125.