子宮肌瘤中ER、PR和IGF-1受體表達的研究

王立群，王霜秋，趙 靜 ，趙秀芝

（1.河北省唐山工人醫院，河北唐山 063000；2.華北煤炭醫學院，河北唐山 063000）

子宮肌瘤是女性生殖器官中最常見的良性腫瘤，多見于30～50 歲婦女，其中 40～50 歲婦女的發生率高達 51.2%～60.0%[1]。它可引起出血、感染、壓迫癥狀及繼發不孕等多種并發癥，是目前子宮全切的主要原因之一，嚴重威脅了女性的身體健康，其病因及發病機制目前仍不十分清楚。本組研究通過對肌瘤患者雌激素受體（ER）、孕激素受體（PR）、胰島素樣生長因子-1受體（IGF-1R）表達的檢測，以探討子宮肌瘤的發生與IGF-1R的關系，為臨床藥物治療本病提供理論依據。

1 資料與方法

1.1 一般資料

病例（實驗標本）為2007年9月～2008年2月在我院婦科手術治療的子宮肌瘤患者60例，年齡29～53歲，術前3個月未使用任何激素類藥物，全部病例均經病理證實為子宮平滑肌瘤。結合月經史和子宮內膜病理結果，有36例為增生期，24例為分泌期。子宮肌瘤組（S組）為手術切除的子宮肌瘤組織，對照組分別為子宮肌瘤周圍鄰近肌層組織（A組）及遠離肌瘤5 cm的正常平滑肌組織（B組）各60例。

1.2 方法

1.2.1 HE染色及診斷 手術切除子宮或肌瘤后，立即取肌瘤組織、肌瘤周圍肌層組織及遠離肌瘤5 cm的正常肌層組織各1份，置于10%中性福爾馬林液體中固定，常規石蠟包埋，切4 μm厚連續石蠟切片，常規HE染色，經光鏡觀察組織學形態，做出病理診斷，并進行篩選，以備免疫組化方法檢測。

1.2.2 子宮組織ER、PR及IGF-1R的免疫組化檢測 ①石蠟切片經二甲苯脫蠟至去離子化。②采用EDTA修復緩沖液進行抗原高壓熱修復。③修復后的切片自然冷凍至室溫。④X-100室溫洗滌10 min。⑤3%過氧化氫封閉內源性過氧化物酶，室溫10 min。⑥PBS緩沖液洗滌3 min×3次。⑦滴加特異性抗體（30 μl/片），孵育過夜。 ⑧PBS 緩沖液洗滌 3 min×3次。⑨PV9000試劑盒中的試劑1（大分子通透劑）37℃孵育30 min。⑩PBS緩沖液洗滌3 min×3次；PV9000試劑盒中的試劑（抗鼠/兔抗體酶復合物）37℃孵育30 min；PBS緩沖液洗滌3 min×3次。DVB鏡檢控制顯色；流水沖洗3 h以上，以去除DVB殘留物。蘇木素復染，脫水，透明涂封片。PR（ZM-0215）、ER（ZM-0104）、EGFR（ZM-0083）均購于北京中杉金橋生物技術有限公司。

1.2.3 形態觀察與結果測定 在光學顯微鏡下對標本中的免疫陽性細胞分布進行觀察、定位及初步分析判斷。ER、PR的陽性細胞標準為細胞核或細胞漿染色、IGF-1R陽性細胞標準為細胞膜染色。在400高倍鏡下觀察5個視野計算陽性腫瘤細胞數占腫瘤細胞總數的比例，陽性細胞數大于10%確定為陽性。

1.3 統計學分析

所得計數資料數據采用四格表χ2檢驗，當n≥40但有1≤T＜5時，用校正的χ2檢驗，當n＜40時，用四格表的確切概率法計算，P＜0.05為差異有統計學意義。所有統計分析均采用SPSS 10.1統計軟件處理。

2 結果

本次實驗結果顯示，子宮肌瘤細胞、肌瘤周圍肌層細胞、遠離肌瘤5 cm的正常肌層細胞均見ER、PR和IGF-1R有程度不同的表達。IGF-1R在子宮肌瘤中的表達量明顯高于正常子宮平滑肌組織，IGF-1R為細胞膜受體，其陽性顆粒為棕色。ER、PR陽性顆粒主要位于細胞核內，偶見于胞質。比較三種細胞ER、PR和IGF-1R的表達，肌瘤細胞最強，肌瘤周圍肌層細胞次之，正常子宮肌層細胞最弱。兩種肌層細胞ER、IGF-1R表達差異無統計學意義（P＞0.05）。三種細胞PR表達差異無統計學意義（P>0.05），但肌瘤細胞PR表達較ER表達明顯增強，差異有統計學意義（P＜0.05）。見表1。

表1 不同組別子宮組織ER、PR、IGF-1R的表達（%）Tab.1 Expressions of ER，PR and IGF-1R of differential groups of uterine tissue（%）

子宮肌瘤細胞和肌瘤周圍肌層細胞ER表達在增生期明顯高于分泌期（P＜0.05），而IGF-1R表達在分泌期高于增生期（P＜0.05），增生期和分泌期PR表達差異無統計學意義（P＞0.05）。 見表 2。

3 討論

目前認為子宮肌瘤的發生發展可能與遺傳、卵巢內分泌功能、雌、孕激素及肌瘤組織中雌、孕激素受體、生長因子、細胞凋亡、癌基因與抑癌基因、細胞免疫等有關。雌、孕激素的促有絲分裂作用是由一些生長因子介導的[2]，其中IGF-1的作用可能最為顯著[3-4]。本實驗結果表明子宮肌瘤細胞中IGF-1受體表達明顯高于肌瘤周圍鄰近肌層細胞及遠離肌瘤5 cm的正常肌層細胞，差異有統計學意義（P＜0.05）。子宮肌瘤組織中雌、孕激素受體陽性百分比明顯高于正常平滑肌組織，統計學上有明顯差異；相關性分析表明：IGF-1受體的含量與雌、孕激素受體含量均呈顯著正相關。高雌、孕激素導致了子宮肌瘤的發生、發展；而肌瘤組織中高水平的IGF-1R，與通過自分泌/旁分泌的IGF-1結合，產生一系列肌瘤細胞增殖的效應，促進肌瘤不斷生長[5]。本次實驗發現IGF-1受體含量與雌激素、孕激素含量均呈顯著正相關，說明IGF系統與卵巢甾體激素可能相互促進、相互協同，共同促進子宮肌瘤的生長。

表2 不同組別子宮組織ER、PR、IGF-R在增殖期和分泌期的表達（%）Tab.2 Expressions of ER，PR and IGF-1R of differential groups of uterine tissue in proliferative and secretory phase（%）

[1]曹澤毅.中華婦產科學[M].北京:人民衛生出版社,2004:1082.

[2]王世閬.子宮肌瘤[M].2版.北京:人民衛生出版社,2000:4-12.

[3]Strawn EY Jr，Novy MJ，Burry KA，et al.Insulin-like growth factor-1 promotes leiomyoma cell growth in vitro[J].Am J Obstet Gynecol,1995,172(6):1837-1843.

[4]Vanderven LT，Roboll PJ，Gloudemans T，et al.Expression of insulinlike growth factors(IGFs)，their receptors and IGF binding protein-3 in normal begin and malignant smooth muscle tissuss[J].Br J Cancer,1997,75(11):1631-1640.

[5]Wang ZH，Ma JX,Zeng BJ,et al.Correlation of glioma cell regression with inhibition of insulin-like growth factor 1 and insulin-like growth factor-binding protein 2 expression[J].Neuroendocrinology,1997,66:203-206.