活血化瘀膏對(duì)小鼠臀部急性軟組織損傷抗炎作用的研究*

王 平，戚天臣

（1.天津中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院骨傷科，天津 300193；2.天津中醫(yī)藥大學(xué)，天津 300193）

急性軟組織損傷是骨傷科臨床常見病、多發(fā)病，屬于中醫(yī)“筋傷”的范疇。活血化瘀膏為本院院內(nèi)制劑，臨床用于治療各種軟組織損傷，通過長(zhǎng)期的臨床觀察，活血化瘀膏具有明顯的活血化瘀、消腫止痛及抗炎作用，實(shí)驗(yàn)用于觀察活血化瘀膏對(duì)急性軟組織損傷的抗炎作用及相關(guān)機(jī)制研究。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 選用昆明種（SPF級(jí)）小鼠45只（由中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供），體質(zhì)量25～30 g，雌雄兼用，分籠飼養(yǎng)，自然光照，自由飲水，實(shí)驗(yàn)前適應(yīng)性喂養(yǎng)1周。

1.2 實(shí)驗(yàn)藥物 活血化瘀膏：本院院內(nèi)制劑（津藥制字（2003）Z第0815號(hào)），主要成份為乳香（醋炙）、沒藥（醋炙）、透骨草、細(xì)辛、伸筋草、紅花等；扶他林乳膠劑（北京諾華制藥有限公司生產(chǎn)，國(guó)藥準(zhǔn)字：H19990291）

2 實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ徒?/h2>

采用文獻(xiàn)報(bào)道[1]改良自制軟組織損傷打擊器(打擊錘法碼50 g)，小鼠左側(cè)臀部剃毛，側(cè)臥式固定于軟組織打擊器平臺(tái)上，將打擊錘拉至5 cm高度松開，自由落下，連續(xù)打擊5下，每只動(dòng)物只打擊左側(cè)臀部。采用隨機(jī)數(shù)字表法將45只小鼠分為空白對(duì)照組（A組），扶他林對(duì)照組（B組）和活血化瘀膏治療組（C組），每組各15只。造模后A組不做處理，B組外用扶他林乳膠劑（扶他林1 g/kg），C組外敷活血化瘀膏（活血化瘀膏1 g/kg），B、C組均在損傷處1 cm2外用藥物，并用特制膠布固定、包扎。每天換藥1次，共給藥6 d。

3 實(shí)驗(yàn)方法

3.1 損傷證候指數(shù)[2]自造模后每天觀察傷處腫脹和瘀斑等證候表現(xiàn)，并分級(jí)評(píng)分并記錄。1）皮下瘀血：多量塊狀計(jì)2分，少量點(diǎn)狀計(jì)1分，無(wú)瘀血者計(jì)0分。2）肌肉腫脹：明顯腫脹計(jì)2分，稍有腫脹計(jì)1分，無(wú)腫脹者計(jì)0分。3）肌肉顏色：紫暗色深計(jì)2分，暗紅色淺計(jì)1分，色澤正常計(jì)0分。

3.2 組織形態(tài)學(xué)檢查 造模后第1天開始治療，分別在第2天，第4天，第6天，每組各取5只小鼠，處死后取材，常規(guī)石蠟包埋切片，分別作蘇木精-伊紅（HE）染色，磷鎢酸蘇木素染色，醛復(fù)紅橙黃G法染色。光鏡觀察：1）創(chuàng)傷局部皮下組織、肌肉組織和創(chuàng)傷性無(wú)菌性炎癥反應(yīng)等病理表現(xiàn)。2）創(chuàng)傷病灶中嗜中性粒細(xì)胞，肥大細(xì)胞分類、計(jì)數(shù)及脫顆粒率評(píng)定。

3.3 統(tǒng)計(jì)方法 使用SPSS 11.5軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，組間比較采用單因素方差分析，P<0.05為有顯著性差異。

4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

4.1 活血化瘀膏對(duì)軟組織損傷模型小鼠損傷證候指數(shù)的影響 見表1。造模后小鼠傷處迅速出現(xiàn)腫脹、皮膚瘀斑及皮下出血現(xiàn)象，傷后24 h最明顯，隨后逐漸減輕，至第5天腫脹基本消退，局部殘留皮膚瘀斑。C組與B組比較，傷處腫脹程度低，消退速度快，在傷后第3天已見明顯消退，瘀斑的消散情況C組亦優(yōu)于B組。損傷證候指數(shù)評(píng)分（見表1）C組低于B組；C組與A組相比第1～6天均有顯著性差異（P＜0.05），B組與A組相比也有顯著性差異；但C組在第 3天以后明顯優(yōu)于 B 組（P＜0.05）。

表1 不同觀察時(shí)間（d）的損傷證候指數(shù)(±s)Tab.1 The injury symptom index at different time points(d)(±s)

表1 不同觀察時(shí)間（d）的損傷證候指數(shù)(±s)Tab.1 The injury symptom index at different time points(d)(±s)

注：B、C組與A組比，*P<0.05；C組與B組比，△P<0.05。

組別A組B組C組1 d 5.87±0.355.47±0.52*5.20±0.41*2 d 5.20±0.564.67±0.49*4.53±0.52*3 d 4.70±0.483.60±0.52*3.10±0.57*△4 d 4.10±0.582.70±0.48*2.00±0.47*△5 d 3.20±0.452.00±0.71*1.20±0.45*△6 d 2.60±0.551.60±0.55*0.80±0.45*△

4.2 組織學(xué)觀察結(jié)果 傷后第2天，A組有局部皮下組織水腫，出血以及中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)較高，可見單核細(xì)胞浸潤(rùn)，被損傷橫紋肌纖維腫脹明顯，部分可見肌纖維變性壞死。B、C組與A組比較，可見真皮和皮下組織水腫減輕，中性粒細(xì)胞和嗜酸粒細(xì)胞的密度減低，單核細(xì)胞數(shù)量增多，可見纖維母細(xì)胞增生。傷后第4天，A組局部皮下組織水腫減輕，嗜中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)密度降低，單核細(xì)胞較多，膠原纖維增生，毛細(xì)血管增生（見圖1）。B組、C組與A組比較，可見皮下組織水腫以及肌纖維腫脹明顯減退，中性粒細(xì)胞和嗜酸粒細(xì)胞少見，膠原纖維增生，肉芽組織開始形成纖維結(jié)締組織。傷后第6天，A組皮下水腫基本消失，可見皮下毛細(xì)血管增生，在血管內(nèi)及血管周圍可見少量炎性細(xì)胞，纖維結(jié)締組織增生較明顯，有部分纖維結(jié)締組織形成。B組、C組基本恢復(fù)正常，但C組纖維結(jié)締組織形成較B組少。

圖1 小鼠軟組織損傷后第4天局部組織病理學(xué)改變Fig.1 The histopathologic change of soft tissue injury on the fourth day in mice

4.3 肥大細(xì)胞脫顆粒率評(píng)定結(jié)果 見表2。創(chuàng)傷后，局部組織中肥大細(xì)胞脫顆粒率增高。C組、B組與A組比較在傷后第2天開始即有顯著性差異（P＜0.01），C 組與 B組比較無(wú)明顯差異（P＞0.05）。

表2 不同時(shí)間肥大細(xì)胞脫顆粒率比較(±s)Tab.2 Comparison of the degranulation in the mast cells at different time points(±s)%

表2 不同時(shí)間肥大細(xì)胞脫顆粒率比較(±s)Tab.2 Comparison of the degranulation in the mast cells at different time points(±s)%

注：B、C 組與 A 組比，*P<0.01；C 組與 B 組比，＃P>0.05。

組別A組B組C組2 d 49.25±7.5931.07±9.35*30.44±8.27*＃4 d 43.07±9.0526.46±9.29*27.66±9.84*＃6 d 40.35±7.1322.95±6.40*22.64±6.63*＃

5 討論

活血化瘀膏具有活血化瘀、消腫止痛的功效，其中乳香為傷科要藥，既能活血行氣止痛，又能消腫生肌，沒藥同具此功效，但乳香偏于行氣、伸筋，而沒藥善于散血化瘀，兩者合用能增強(qiáng)行氣活血止痛之功；紅花具有活血通經(jīng)，祛瘀止痛的作用，而伸筋草具有舒筋活絡(luò)之功效，據(jù)現(xiàn)代藥理學(xué)研究，細(xì)辛揮發(fā)油、水及醇提取物具有解熱、抗炎之功，故其有止痛之效，故而活血化瘀膏綜合各藥之功效，有利于急性軟組織修復(fù)。

從實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出，B組、C組的皮下水腫，肌肉腫脹較A組消退明顯（P<0.05），C組在第3天以后損傷癥候指數(shù)的改善明顯優(yōu)于B組 (P<0.05)。從病理片上可以明顯地看出，活血化瘀膏組早期肥大細(xì)胞脫顆粒率較低，與空白組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），局部炎癥水腫消散迅速，提示局部炎癥反應(yīng)被抑制，后期局部可見小血管增多、普遍擴(kuò)張充血、結(jié)締組織形成較少、橫紋肌纖維再生等，而肥大細(xì)胞脫顆粒率則反映了局部組織創(chuàng)傷和炎癥反應(yīng)的程度。通過本實(shí)驗(yàn)研究，可以看出活血化瘀膏具有明顯的消除創(chuàng)傷性無(wú)菌性炎癥反應(yīng)和消除局部水腫的作用，減輕細(xì)胞組織缺氧，減少嗜中性粒細(xì)胞、肥大細(xì)胞的損害，并減少白細(xì)胞的炎性滲出，達(dá)到促進(jìn)組織修復(fù)的目的[3]。故活血化瘀膏具有改變急性軟組織損傷證候作用，對(duì)于急性軟組織損傷具有抗炎作用，從而為活血化瘀膏的臨床應(yīng)用提供了理論依據(jù)。

[1] 周國(guó)林,姚全勝,潘玉英.一種動(dòng)物軟組織損傷的實(shí)驗(yàn)方法[J].中國(guó)藥理學(xué)通報(bào),1991,7(5):396-398.

[2] 何朝勇,李 楠,陳麗華，等.奇正消痛貼治療急性軟組織損傷實(shí)驗(yàn)研究[J].中醫(yī)正骨,2008,20(11):9-12.

[3] 張愛平,林燕萍,王和鳴，等.納米相陶瓷遠(yuǎn)紅外線治療急性軟組織損傷動(dòng)物模型實(shí)驗(yàn)研究[J].福建中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2001,11(1):20-21.