經前三劑止痛方治療實驗性痛經模型大鼠作用機制研究*

方 玲 ，朱新冰 ，尹 菊 ，郭 虹 ，高 嵐 ，張艷軍

（1.天津中醫藥大學中藥學院，天津市中藥藥理重點實驗室，天津 300193；2.天津市中心婦產科醫院，天津 300193）

原發性痛經（PD）是一種多病因疾病，常表現為月經前及行經期間，下腹及腰部痙攣性疼痛，嚴重時伴有惡心、嘔吐、肢冷，尤其多見于未婚青年女性。中醫藥在治療和預防痛經方面得到了越來越廣泛的認可。經前三劑止痛方（JQF）是臨床上治療PD的有效方藥，連續服用3個月經周期，每個月經期之前服用3劑，臨床原發性痛經治愈率可達96%。子宮內膜合成和釋放前列腺素增加，是原發性痛經的重要原因，本研究系統考察了JQF對實驗性痛經模型大鼠子宮前列腺素和激素水平的影響，探討其治療痛經的作用機制，為臨床上更好地使用該方提供實驗依據，并為進一步研發奠定基礎。

1 實驗材料

1.1 實驗動物 健康SD大白鼠，雌性，30只未孕，體質量180～220 g，由中國醫學科學院放射醫學研究所動物室提供（合格證號：SCXK（京）2007－0001）。天津中醫藥大學實驗動物中心二級動物實驗室條件下飼養。

1.2 藥物與試劑 經前三劑止痛方（JQF）制劑由天津中醫藥大學中藥制劑實驗室制備（2100 g生藥材得浸膏干粉520 g，其出膏率為24.7%，本文所指中藥給藥均為浸膏干粉，灌胃給藥時用生理鹽水溶解）；苯甲酸雌二醇注射液，天津金耀氨基酸有限公司生產，批號0701041；縮宮素注射液，蚌埠市宏業生化制藥廠生產，批號070310；阿司匹林片，廣東百澳藥業有限公司生產，批號20070501；大鼠前列腺素 F2α（PGF2α）酶聯免疫吸附實驗（ELISA）試劑盒，購自上海西唐生物科技有限公司。6-酮-前列腺素1α（6-keto-PGF1α）、血栓素B2（TXB2）放免藥盒和雌激素（E2）、孕激素（P）試劑盒，天津市南開醫院同位素室提供。前列腺素E2（PGE2）放免試劑盒盒，購自北京總醫院科技開發中心放免所。

1.3 儀器 DL28R冷凍離心機(上海離心機械研究所）；FlexStation3多功能微孔分析儀（美國Molecular Devices）；XH6020r免疫計數器（西安262廠）。

2 實驗方法

2.1 模型復制與分組給藥 采用注射雌二醇和催產素的方法復制大鼠痛經模型，連續10 d給大鼠皮下注射雌二醇[第1、10天皮下注給0.5 mg/（只·d），余日均為0.2 mg/（只·d）]，間隔40 h后，腹腔注射催產素2 U/只。將30只大鼠分為正常對照組、模型組、JQF高劑量組、JQF低劑量組、阿司匹林對照組，每組各6只。JQF低劑量組、JQF高劑量組每天每只大鼠分別灌胃給予JQF浸膏干粉2 kg/L，阿司匹林對照組每天每只大鼠灌胃給予阿司匹林片5 g/L，正常對照組、模型組每天灌胃等體積生理鹽水，各組均連續灌胃10 d。

2.2 子宮組織 PGF2α、PGE2、TXB2、6-keto-PGF1α含量測定 復制大鼠痛經模型并給予藥物干預后，取各組動物同側同位段新鮮子宮0.25 g，用生理鹽水沖洗1～2次，置微型勻漿器中勻漿，勻漿物加入子宮重 10 倍量的無水乙醇：氯化鉀溶液（1∶9），3500r/min離心20 min，取上清液,用ELISA法測定PGF2α；放免法測定 PGE2、6-keto-PGF1α、TXB2含量。

2.3 JQF對模型大鼠子宮組織雌激素、孕激素水平的影響 取子宮勻漿物上清液，放免法測定E2、P含量。

2.4 統計學方法 應用SPSS 11.5統計軟件進行數據處理，實驗數據以均數±標準差（x±s）表示，采用單因素方差分析，方差齊時組間兩兩比較樣用LSD方法，方差不齊時組間兩兩比較用Dunnett T3法。P<0.05為有統計學差異。

3 實驗結果

3.1 JQF對痛經模型大鼠子宮組織PGF2α、PGE2含量及比值變化的影響 子宮內膜合成和釋放前列腺素增加，是原發性痛經的重要原因，本研究檢測了JQF對痛經模型大鼠子宮中前列腺素的影響。結果表明，模型組大鼠子宮組織PGF2α含量明顯高于正常對照組。與模型組比較，阿司匹林陽性對照組子宮組織PGF2α含量可明顯降低，JQF不同劑量均可不同程度的降低子宮組織 PGF2α水平（P＜0.05 或 P＜0.01），其中JQF高劑量組與正常對照組比較無統計學差異；模型組大鼠子宮組織中PGE2含量與正常對照組比較明顯降低（P<0.01）；與模型組比較，大鼠子宮組織中PGE2含量JQF高劑量組、阿司匹林陽性對照組均明顯升高（P＜0.05），結果見表 1。

表1 各組動物子宮組織中PGF2α、PGE2含量比較(±s)Tab.1 Comparison of PGF2α and PGE2 in the rats of each group(±s)μg/L

表1 各組動物子宮組織中PGF2α、PGE2含量比較(±s)Tab.1 Comparison of PGF2α and PGE2 in the rats of each group(±s)μg/L

注：與正常對照組比較，**P<0.01；與模型組比較，##P<0.01。

組別正常對照組模型對照組JQF低劑量組JQF高劑量組阿司匹林組n66666 PGF2α 209.65±77.51802.79±153.69**505.65±98.02##221.42±140.67##488.78±134.22##PGE2 801.12±111.32594.88±137.15**619.65±187.78810.35±208.62#875.62±244.11#PGF2α/PGE2 0.27±0.111.50±0.56**0.99±0.390.27±0.16##0.59±0.12##

3.2 JQF對痛經模型大鼠子宮TXB2、6-keto-PGF1α含量及比值變化的影響 本研究考察了JQF對痛經模型大鼠子宮6-keto-PGF1α、TXB2含量的影響。結果表明，模型組與對照組比較，TXB2顯著升高（P<0.05），結果具有統計學差異。與模型組比較，用藥各組TXB2水平顯著降低（P<0.01或P<0.05）、6-keto-PGF1α水平 JQF 高劑量組升高 （P＜0.05），JQF低劑量組無統計學差異。用藥各組T/K比值較模型組高劑量組顯著降低（P＜0.01）、西藥組有所降低（P＜0.05）。見表 2。

表2 各組動物子宮組織中TXB2、6-keto-PGF1α含量比較±s)Tab.2 Comparison of TXB2 and 6-keto-PGF1α in the rats of each group(±s)μg/L

表2 各組動物子宮組織中TXB2、6-keto-PGF1α含量比較±s)Tab.2 Comparison of TXB2 and 6-keto-PGF1α in the rats of each group(±s)μg/L

注：與正常對照組比較，*P<0.05,**P<0.01；與模型組比較，#P<0.05,##P<0.01。

組別正常對照組模型對照組JQF低劑量組JQF高劑量組阿司匹林組n66666 TXB2 542.73±53.01722.42±90.54*582.63±64.11#520.87±66.27#398.18±25.38##6-keto-PGF1α 914.81±100.641023.63±75.551018.74±59.791288.60±207.00#779.40±65.30##TXB2/6-keto-PGF1α 0.55±0.080.67±0.090.57±0.050.40±0.08##0.52±0.04#

3.3 JQF對痛經模型大鼠子宮雌激素、孕激素水平的影響 本研究考察了JQF對痛經模型大鼠子宮勻漿組織雌激素和孕激素含量的影響。結果表明，與對照組比較，模型組雌激素水平顯著升高（P<0.01），孕激素水平降低（P<0.05），結果具有統計學差異。與模型組比較，西藥組雌激素水平降低（P<0.05），孕激素水平升高（P<0.05）。JQF低劑量組、JQF高劑量組均可顯著降低模型大鼠雌激素水平（P<0.01），JQF高劑量組可升高模型大鼠孕激素水平（P<0.05）。結果見表3。

表3 JQF對痛經模型大鼠子宮雌激素、孕激素水平的影響(±s)Tab.3 The effects of JQF on estrin and progestogen in the rats with dysmenorrhea μg/L

表3 JQF對痛經模型大鼠子宮雌激素、孕激素水平的影響(±s)Tab.3 The effects of JQF on estrin and progestogen in the rats with dysmenorrhea μg/L

注：與正常對照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01；與模型組比較 ＃P＜0.05，＃＃P＜0.01。

組別正常對照組模型對照組JQF低劑量組JQF高劑量組阿司匹林組n66666 E2P 19.07±3.3238.75±10.57**25.82±3.23##23.63±3.09##25.72±4.70#20.69±4.8710.44±5.37*15.54±9.1420.11±7.52#21.59±8.78#

4 討論

女性內分泌失調引起的痛經是當今世界醫學尚未攻克的難題之一。據英國一家醫學權威機構調查報告指出，全球女性中80%有不同程度的痛經。JQF為自擬方，方中以當歸、川芎、赤芍、益母草為主要組成，是臨床治療原發性痛經的有效方藥，只需月經前使用3 d，本次月經無疼痛，連續使用3個月即可停藥，均獲滿意療效，因此，有必要對其藥效機制進行深入探討。現代醫學普遍認為，原發性痛經發生的主要原因是由于神經內分泌失調引起的子宮張力增加和過度痙攣性收縮，激素水平失調、催產素、加壓素以及某些自主神經系統遞質如內皮素等與痛經的發病直接相關[1-2]。

大量研究表明，痛經患者血中 PGF2α含量及PGF2α/PGE2比值增高是造成痛經的直接原因[3-4]，降低PGF2α水平可在一定程度上緩解疼痛。子宮內膜細胞是合成PGs的功能細胞和靶細胞[5]，在激素和某些介質的特定作用下，產生各種不同的前列腺素物質，調節子宮肌細胞的收縮和舒張。子宮合成和釋放前列腺素的增加是原發性痛經的重要原因，尤其是PGF2α增高，PGF2下降時會導致兩者比值過度升高。PGF2α作用于螺旋小動脈壁上的PGF2α受體，引起子宮過度收縮，子宮血流不足，子宮肌肉組織缺血，刺激子宮自主神經疼痛纖維而發生痛經。本研究結果表明，JQF均可顯著降低實驗性大鼠子宮組織的PGF2α的含量以及PGF2α/PGE2比值，可能是其治療痛經作用的重要機制之一。

正常情況下，血栓素（TXA2）、前列腺環素（PGI2），TXA2/PGI2處于平衡狀態，維持適當的血管張力及血小板內環境穩定，TXA2/PGI2失衡將引起血小板與血管壁相互作用即痛經患者存在異常激活的高凝狀態，引發血管痙攣、血栓形成、缺血等,導致痛經的發生和加重[6]。由于TXA2、PGI2在體內極不穩定，短時間內水解成穩定的TXB2和6-Keto-PGF1α，所以檢測TXB2、6-Keto-PGF1α的含量即可反映TXA2、PGI2的水平。本研究結果表明，JQF可顯著降低痛經大鼠子宮組織的TXB2和升高6-Keto-PGF1α含量，調節兩者的比例，使其達到適宜的有效濃度，以抑制血小板聚集和血栓形成，改善子宮微循環，恢復子宮平滑肌的正常舒縮狀態，是治療痛經病證的有效方劑。

參與調節月經的卵巢激素主要是雌激素和孕激素，卵巢激素的不平衡可影響前列腺素合成與釋放，PGF2α可刺激子宮平滑肌收縮，PGE能抑制子宮收縮。E2水平升高，可以刺激PGF2α的合成、釋放，從而使子宮血管收縮，子宮缺血而發生痛經。高孕酮水平可抑制產生PGF2α則不使發生痛經。JQF能夠降低大鼠子宮中E2的水平，提高P的水平，起到抑制子宮平滑肌過度收縮的作用；從生理學角度看，β-EP（內源性阿片肽）具有內源性鎮痛作用，子宮是β-EP的靶器官。β-EP受性激素制約，孕酮能顯著提高β-EP的分泌，而雌二醇卻抑制孕酮對β-EP的作用，JQF能夠降低大鼠子宮中E2的含量，增加P的含量，從而可能提高β-EP的分泌，起到治療痛經的作用；血液中血管加壓素水平的增高是原發性痛經發生的重要因素[7]，雌激素能刺激垂體后葉釋放血管加壓素，此作用可被孕激素抵消。原發性痛經婦女晚黃體期雌激素水平異常升高，在月經期第1天血管加壓素水平高于正常人2～5倍，造成子宮過度收縮及缺血。JQF能夠降低大鼠子宮中E2的含量，增加P的含量，可能降低血管加壓素水平，緩解子宮過度收縮及缺血起到治療痛經的作用；青春期痛經多發，與體內雌激素/孕激素的比值升高有關，體內雌激素過多或相對過多，致使體內水鈉潴留，局部出現水腫也是痛經發生的原因之一。

綜上所述，JQF抗痛經作用并非是某方面單一作用的結果，而是多方面共同作用的綜合效應。抑制子宮 PGF2α的產生，降低 PGF2α/PGE2比值，穩定實驗性大鼠子宮組織TXB2/6-Keto-PGF1α比值，緩解縮宮反應以及對大鼠體內性激素（E2、P）的調節等均為JQF治療痛經的藥理學基礎。

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[3] Seifert B,Liedtke MP.Uterine prostaglandins and dysmenorrheal[J].Zentralbl Gynakol,1978，100(21):1361-1366.

[4] Shangold MM,Aksel S,Schomberg DW,et al.Plasma prostaglandin F 2-alpha levels in dysmenorrehic women[J].Fertil Steril,1976,27(10):1171-5.

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[6] Dawood MY,Khan-Dawood FS.Differential suppression of menstrual fluid prostaglandin F2a,prostaglandin E2,6-keto prostaglandin F1a and thromboxane B2 by suprofen in women with primary dysmenorrhea[J].Prostaglandins Other Lipid Mediat,2007,83(1-2):146-53.

[7] Ekstr?m P,Akerlund M,Forsling M,et al.Stimulation of vasopressin release in women with primary dysmenorrhoea and after oral contraceptive treatment-effect on uterine contractility[J].Br J Obstet Gynaecol,1992,99(8):680-4.