西安交通大學醫學院第二附屬醫院(西安 710004)金愛萍 王 紅 韓東剛

動脈粥樣硬化是原發性高血壓的病理基礎,而內皮損傷被證實為動脈粥樣硬化的主要誘因。最新研究發現,外周循環中存在的內皮祖細胞(EPCs)可維持內皮完整性、促進內皮細胞的再生修復,顯著影響動脈粥樣硬化的進程,是心血管事件的獨立預測指標[1]。頸動脈內膜中層厚度(IM T)是近年來國外大規模心血管病臨床試驗中最常采用的替代終點之一,可作為反映全身動脈粥樣硬化的一個窗口[2]。已證實,炎癥在心血管疾病的發生、發展過程中扮演著重要的角色[3]。本研究通過觀察原發性高血壓患者循環 EPCs與 IMT及炎性介質的相關性,進一步探討其在此類患者發病機制中的作用。

對象與方法

1 研究對象 選取我院2007年4月至2008年11月收治的50例初診原發性高血壓患者作為高血壓組,其中男 29例,女 21例,年齡 50.31±11.41歲。診斷根據 2005年《中國高血壓防治指南》修訂版,即收縮壓≥140 mmHg和 (或 )舒張壓≥90 mm Hg。排除標準:冠心病病史、2月內服用他汀類藥物、未絕經女性、合并其他器質性心臟病如心肌炎、心肌病等;感染性疾病、肝腎功能不全、血脂異常者。選擇同期門診體檢合格的50例健康者作為對照組,其中男 27例,女 23例,年齡 52.13±13.85歲。兩組在年齡、性別上具有可比性(P＞ 0.05)。

2 方 法 (1)炎性因子的測定:受試者夜間禁食 12h后,清晨測量血壓,抽取空腹靜脈血 10ml,采用免疫透射比濁法測定血清超敏 C反應蛋白(Hs-CRP)含量,采用 ELISA法測定白介素-6(IL-6)和腫瘤壞死因子 -α(TNF-α)水平。 (2)EPCs的分離、培養、計數和鑒定:取抗凝外周血,以 Ficoll密度梯度離心法收集白膜層的單個核細胞,PBS洗滌 2次,接種于包被人纖連蛋白的24孔培養板中。在添加了青霉素100U/ml、鏈霉素 100 μ g/ml、 VEGF 50ng/ml、 20%優 質 胎牛 血清 的M199培養液中培養,3～ 4d更換培養液 1次;培養 14d后倒置相差顯微鏡下計數細胞克隆形成單位。細胞與DiI-Ac-LDL(2.4 μ g/ml)37℃下孵育 1h以檢測 EPCs對 acLDL的攝取。然后用 2%多聚甲醛固定細胞10min。固定后用 PBS液浸洗,再將 FITC-UEA-I(10 μ g/ml)加于上述標本 37℃下孵育 1h。熒光顯微鏡鑒定 DiI-Ac-LDL和 FITC-UEA-I染色雙陽性細胞為正在分化的內皮祖細胞。(3)IMT測定:儀器為美國HP5500型超聲診斷儀,7.0M Hz線陣探頭。患者取仰臥位,檢查部位包括頸總、頸內動脈,于頸總動脈分叉近端1 cm處后壁測量或IM T最厚處,縱向超聲顯像可表現為由相對較低回聲分隔的兩條平行亮線,兩線間距離即 IMT,凍結頸動脈竇以下 1 cm圖像,測量 3次IM T,取3次測量值的平均值為頸總動脈IMT厚度值。

結 果

1 兩組受試者循環EPCs數量比較 高血壓組循環 EPCs克隆形成單位數目為20.88±7.64個,顯著低于對照組 62.51±9.22個(P ＜ 0.05)。

2 各組受試者臨床指標的比較 見附表。高血壓組的頸動脈 IM T、Hs-CRP、IL-6、TNF-α、收縮壓和脈壓均顯著高于對照組(P＜0.05)。

附表 兩組患者臨床指標比較(n=50,±s)

附表 兩組患者臨床指標比較(n=50,±s)

注:與對照組比較,*P＜0.05

指 標 對照組 高血壓組頸動脈 IM T(mm)0.81±0.13 1.07± 0.25*Hs-CRP(mg/L)1.47± 0.81 2.52± 1.12*IL-6(pg/ml)79.84± 32.07 105.66± 42.38*TNF-α(mg/ml)26.25± 8.34 48.55± 19.64*收縮壓(mmHg)123.52± 18.24 143.47±22.12*舒張壓(mmHg)80.07±10.27 82.94± 11.66脈壓 (mmHg)43.45± 8.56 60.53± 10.44*

3 EPCs數量與頸動脈 IMT、炎性因子和血壓的相關性分析 高血壓患者的 EPCs數量與頸動脈 IM T(r=0.552,P=0.001)、Hs-CRP(r=0.457,P=0.004)、 IL-6(r=0.401,P=0.01)、脈壓 (r=0.363,P=0.023)、收縮壓 (r=0.336,P=0.025)和 TNF-α(r=0.281,P=0.041)呈顯著負相關。偏相關分析表明,EPCs數量與頸動脈 IMT(r=0.577,P=0.000)、Hs-CRP(r=0.483,P=0.003)、IL-6(r=0.442,P=0.008)和脈壓(r=0.390,P=0.011)呈顯著負相關。

討 論

內皮細胞是“內皮-高血壓-心血管事件”鏈條中重要的始動環節和核心步驟,高血壓作為重要的心血管病危險因素,其血管內皮結構的完整性和內皮細胞功能均受到損害[1],并可引起血管重塑,導致外周阻力進一步升高,后者將加重血管內皮的損傷,進而形成惡性循環,最終引發嚴重的靶器官損害和心血管事件。

EPCs是一種多能干細胞,可循環、增殖并分化為血管內皮細胞,但尚未表達成熟血管內皮細胞的表面特征[4]。其從骨髓釋放,并在外周循環中運行,在損傷信號的誘導下遷移到損傷局部,分化為成熟內皮細胞,參與血管新生和修復。同時亦可通過旁分泌機制分泌血管內皮生長因子、肝細胞生長因子,胰島素樣生長因子等血管生成物質[5],從而促進 EPCs增殖分化。新近研究表明,EPCs可反映內皮及血管再生能力及動脈粥樣硬化斑塊負荷,是動脈粥樣硬化性疾病的獨立危險因素[4],外周血 EPCs的數量可以作為評價血管功能的指標,對心血管事件具有獨立預測價值。本研究原發性高血壓患者循環EPCs數目減少,提示后者可能參與原發性高血壓的發病機制:①高血壓狀態下EPCs加速衰老,可能與 EPCs端粒酶的失活有關,EPCs分化成熟為完整內皮細胞的能力減弱,不利于血管的修復[4];②導致內皮功能障礙;③刺激血管平滑肌細胞增殖[5];④促進血栓形成;⑤影響腎素-血管緊張素-醛固酮系統,減少一氧化氮的產生和利用[5,6]。

已證實,高血壓是動脈粥樣硬化的危險因素,長期高血壓損傷血管內膜,高壓力、高流量的血流動力學改變是靶器官損傷的直接原因,血管結構和功能的改變發生較早,也較明顯,主要表現為血管平滑肌細胞肥大、增生、結締組織增加,使血管壁增厚,尤其是中層肥厚,壁腔比例明顯加大,血流阻力和血管反應性增加,進而導致患者的血壓持續升高[7]。文獻顯示,顱外頸動脈與冠狀動脈、腦動脈粥樣硬化的發生及嚴重程度存在明顯相關性,頸動脈 IMT的改變早于斑塊的發生,已被公認為一種反映早期動脈粥樣硬化的無創傷性可靠指標[2]。本研究亦得出相似結論。

本研究原發性高血壓患者的 Hs-CRP、IL-6和TNF-α顯著增高,可能原因在于:高血壓損傷血管內皮細胞,可引起單核-巨噬細胞、T淋巴細胞等炎性細胞粘附,激活單核-巨噬細胞系統,促使炎性細胞進入受損細胞,產生 IL-6、TNF-α等初級炎癥因子,IL-6和TNF-α共同促進肝臟合成及釋放 CRP,后者與脂蛋白結合,由經典途徑激活補體系統,繼而產生大量終末復合物,造成血管內膜受損;同時,單核細胞、粒細胞均含有 CRP受體,CRP的大量產生可使其受體活化,通過直接或間接作用,造成血管損傷[8]。反之,細胞因子對血壓亦有調節作用,IL-6可通過影響下丘腦-垂體-腎上腺軸而參與血壓的調節,TNF-α則被證實為能夠刺激血管平滑肌細胞分泌內皮素,促進血管緊張素原在肝臟中的表達[8]。隨著 EPCs研究被引入到炎癥領域,一些學者認為,外周血EPCs的數量可以反映炎癥相關性肺損傷和 sepsis時血管損傷的程度,與疾病的預后相關,因而有診斷的價值[9,10]。原發性高血壓患者EPCs與頸動脈 IM T、Hs-CRP、IL-6和脈壓呈顯著負相關,提示 EPCs可作為高血壓患者反映血管炎癥損傷的指標和對炎癥的預后判斷,從而預測高血壓危險,評價治療,并判斷預后。同時還提示了高血壓的發生發展是內皮系統、血管重構和炎性反應等多因素綜合作用的結果。

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