頭孢呋辛鈉在小鼠體內的藥代動力學及組織分布研究

王 敏,侯麗然,高金波

(黑龍江省教育廳生物藥制劑重點實驗室佳木斯大學,黑龍江 佳木斯 154007)

注射用頭孢呋辛鈉為一種半合成第二代頭孢菌素,具有較好的廣譜抗菌作用,其作用機理是通過結合細菌蛋白,從而抑制細菌細胞壁的合成[1]。臨床應用于敏感的革蘭陰性菌所致的呼吸道、泌尿系、皮膚和軟組織、骨和關節、女生殖器等部位的感染等[2]。頭孢呋辛鈉血藥濃度測定國外多采用微生物法[3～5],國內未見文獻報道。本文根據頭孢呋辛鈉的結構特點,建立了測定血漿和組織中頭孢呋辛鈉濃度的 HPLC法,并利用該方法對注射用頭孢呋辛鈉在小鼠體內的藥代動力學及在組織內的分布進行了試驗研究,給出了動力學參數和在體內組織中的分布狀況。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Agilengt 1100高效液相色譜儀;包括:G1314A紫外檢測器,G1379A真空在線脫氣機,G1311A四元泵,G1313A自動進樣器;CP225D電子天平(上海恒平電子有限公司);Sartorius酸度計,FSH-2A型勻漿機(國立常州試驗設備研究所)。

1.2 試藥

頭孢呋辛對照品(中國藥品生物制品檢定所,批號130493-200102,含量 96.2%);注射用頭孢呋辛鈉 (北京悅康藥業集團有限公司,批號:B20060103);對乙酰基酚(含量＞ 98.5%,東北制藥總廠,批號051029);乙腈為色譜純;水為重蒸餾水。

2 實驗方法與結果

2.1 對照液及內標溶液的配制

頭孢呋辛鈉照品溶液:精密稱取頭孢他啶對照品5.0mg,用制成濃度為0.5mg˙mL-1的頭孢呋辛鈉對照品貯備液。置冰箱4℃保存。內標液:精密稱取對乙酰氨基酚10.0mg用水制成濃度 1.0mg˙mL-1的內標貯備液,置冰箱4℃保存。臨用用水將內標貯備液稀釋 100倍,即為 10μg˙ mL-1的內標溶液。

2.2 色譜條件

色譜柱為 Hypersil C18(4.6mm× 150mm,5μm)不銹鋼柱;流動相 pH3.4醋酸鹽緩沖液 (取0.1mol/L醋酸鈉溶液50mL,加 0.1mol/L醋酸溶液至 1000mL,用 NaOH溶液與CH3COOH溶液調節使 pH至3.4)-乙腈(85：15);用 0.45 μm的濾膜過濾;檢測波長為274nm;流速為1.0mL/min,室溫25℃ ,進樣 20μL。

2.3 樣品的處理方法

2.3.1 血漿

取小鼠血漿0.5mL,加乙腈1mL沉淀蛋白,旋渦混合1min,4000r/min離心10min,取上清液用0.45μm的微孔濾膜過濾。

2.3.2 組織

取 3只小鼠的心、脾、肺及腎臟和肝1g,用生理鹽水洗凈表面浮血,濾紙吸干 ,稱質量,加入2mL pH7.0的磷酸鹽緩沖液進行勻漿 ,4000r/min離心10min,取上層清液200 μL,加400μL乙腈沉淀蛋白,4000r/min離心 20min,取上清液用0.45 μm的微孔濾膜過濾。

2.4 標準曲線繪制

用空白血漿加頭孢呋辛鈉照品貯備液配成含頭孢呋辛鈉 1μ g/mL,5 μg/mL,25 μg/mL,100μ g/mL,250 μg/mL 的 血漿標準液,分別加入0.50mL的對乙?；觾葮巳芤簻u旋30s,按血樣預處理項下處理后,以0.45 μm的濾膜過濾,依次進樣,測定其峰面積。以所測得的頭孢呋辛鈉峰面積與內標峰面積的比值 As/Ai為橫坐標與相應的頭孢呋辛鈉濃度 C(mg˙L-1)為縱坐標作線性回歸,結果顯示頭孢呋辛鈉血藥濃度在 1～ 250μg/mL范圍內線性良好,回歸方程為:C=16.12As/Ai+ 1.46,r=0.9998,n=5,以信躁比 =3計 ,最低檢測濃度為0.25 μg/mL。

2.5 回收率及精密度實驗

取小鼠的血漿0.5mL,加入頭孢呋辛鈉照品貯備液0.1mL,0.2mL,0.3mL,0.4mL,0.5mL,再加入內標液 0.50 mL,加入重蒸餾水使成為2.0 mL,渦旋30s,按樣品處理方法進行處理后,進樣測得峰面積。5種濃度的回收率分別為(97.12± 1.96)%,(98.99± 1.01)%,(98.35± 1.64)%,(96.50±2.89)%及(96.15±3.03)%。RSD為1.24%。

2.6 藥代動力學研究

30只健康小鼠,雌雄各半,體質量25g左右,頭孢呋辛鈉用滅菌生理鹽水溶解后,按1000mg/kg劑量背部推注,于給藥后即刻及 0.125、 0.25、 0.5、 1、 2、 3h對 小鼠進行斷頭取血1.5mL,肝素抗凝后 3500r/min離心 10min分離血漿,置 -20℃保存至測定。采用 3p87藥代動力學程序擬合,顯示藥-時曲線符合單劑量一級吸收一室模型,C=18.7042e(-0.3136t)-18.7042e(-1.1216t);t時間體內的代謝物量 M=18.7042;藥物自體內消除一級速度常數 Kel=0.3136;表觀一級吸收速率常數 Ka=1.1216;單劑量給藥后的最高血藥濃度Cmax=18.7042;單劑量給藥后出現最高血藥濃度的時間即峰時 tp=1.5772;藥物從中央室消除的半衰期 t1/2K el= 2.2098;藥物的吸收半衰期 t1/2K a=0.6179;血藥濃度-時間曲線下總面積 AUC=76.3199;滯后期 t0=0.1346。

2.7 組織分布研究

18只健康小鼠,雌雄各半,體質量25g左右,按上述劑量及給藥方法 ,分別于背部給藥后的 0.5、1、 1.5、 2、3、 4h采血并立即處死,迅速取出心、肝、脾、肺、腎每個時間點3只動物 ,分別按樣品處理方法處理后進樣,測定各時間點組織中頭孢呋辛鈉的濃度。見表1。

表1 各組織中藥物濃度(± s,μg˙g-1)。

表1 各組織中藥物濃度(± s,μg˙g-1)。

3 討論

小鼠單次背部推注1000mg/kg頭孢呋辛鈉后,血藥濃度上升迅速,又在很短的時間內下降,體內分布快而廣。t1/2K a=0.6179h,說明藥物在小鼠體內消除快。心臟、肝臟、脾、肺、腎臟藥物濃度測定結果說明,隨血藥濃度的下降,各組織中藥物濃度也下降,總趨勢一致,但組織中藥物濃度下降滯后于血藥濃度,3h時血藥濃度已低于檢測限,而3h時組織藥物濃度仍可達一定的水平。實驗結果表明,頭孢呋辛鈉在體內主要以原形經腎臟排泄,在組織中分布較廣。

[1] 中華人民共和國藥典委員會編.中華人民共和國藥典〔S〕.2000年版,二部,2000,177

[2] 劉又寧,余秉翔,方向群,等.氟氧頭孢對呼吸道感染療效的臨床觀察 [J].中國抗生素雜志,1996,21(2):105-108

[3] Bundtzen R W,Toothaker R D,Nielson O S,et al.Pharmacokinetics of cefuroxime in normal and imparied renal function:comparison of high pressure liquid chromatography and microbiological assays[J].Antimicrob Agents Chemother,1981,19:443-446

[4] Lovering A M,Perez J,Bowker K E,et al.A comparison of the penetration of cefuroxime and cephamandole into bone,fat and haematoma fluid in patients undergoing total hip replacement[J].J Antimicrob Chemother,1997,40(1):99-102

[5] Deguchi K,Yokota N,Koguchi M,et al.Antimicrobial activities of cefuroxime against recent clinical isolates[J].J Antibiot,1994,47:365-368