MMP-9和 PCNA在涎腺腫瘤中的表達及意義

劉樹發(fā),楊 明,孟 丹,鄔志鋒

(佳木斯大學(xué)附屬口腔醫(yī)院,黑龍江 佳木斯 154002)

涎腺腫瘤是口腔頜面部的常見腫瘤,近年來發(fā)病呈上升趨勢,逐漸成為研究熱點。其發(fā)病機制受多因素影響,而腫瘤的浸潤、轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)是影響患者治療效果和預(yù)后的主要因素。基質(zhì)金屬蛋白酶-9(matrix Metallo Proteinase-9,MMP-9)即(明膠酶 B/92kUⅣ型膠)一組鈣鋅依賴性蛋白酶,其功能能降解細胞外基質(zhì)(extracellular matrix,ECM)且具有廣泛的底物特性,最終導(dǎo)致腫瘤細胞的浸潤甚至遠處轉(zhuǎn)移,同時促進腫瘤中新生血管的形成[1,2]。增殖細胞核抗原(proliferative cellnuclearantigen,PCNA)是 DNA聚合酶的輔酶,為細胞周期的內(nèi)源性組織標(biāo)記物,其在腫瘤中的表達程度與細胞增殖活性密切相關(guān)[3]。本實驗擬通過免疫組織化學(xué) SP法觀察 MM P-9和 PCNA在涎腺腫瘤中的表達情況 ,探討二者在涎腺腫瘤的發(fā)生、發(fā)展中的關(guān)系。

1 材料與方法

1.1 材料

收集佳木斯大學(xué)口腔醫(yī)院病理科1996～ 2007年手術(shù)切除且資料完整的涎腺腫瘤存檔蠟塊共65例,包括多形性腺瘤18例,基底細胞腺瘤 6例 ,Warthin瘤11例,腺樣囊性癌 17例,黏液 表皮樣 癌 13例 ;其中 男 36例 ,女 29例 ,平 均年齡 52歲 ;所有病例均為首發(fā)病例,經(jīng)過病理復(fù)查,術(shù)前均未放療或化療。

1.2 免疫組織化學(xué)染色

采用免疫組化 SP法,主要試劑鼠抗人 MM P-9和 PCNA單克隆抗體及 SP試劑盒等均購自武漢博士德公司。染色過程嚴(yán)格按說明書進行,分別用用已知陽性切片作陽性對照,用 PBS(pH=7.4)代替一抗作空白對照 ,染色步驟嚴(yán)格按照試劑說明書進行。

1.3 結(jié)果判斷

MM P-9的陽性染色定位于細胞漿中,PCNA的陽性染色定位于細胞核中,均呈現(xiàn)棕黃色或棕褐色顆粒。MM P-9陽性判斷標(biāo)準(zhǔn):按著色分級為未著色為0分、淺黃色為1分、棕黃色為2分、棕褐色為3分;陽性細胞占所觀察細胞百分比＜5%計為0分,5%～ 15%計為1分,26%～ 50%計為2分,51%～ 75%計為3分,＞75%計為4分。將每張切片的著色強度和陽性細胞百分比得分相乘,分為4級:0分為陰性(-);1～ 4分為弱陽性 (+);5～ 8分為中度陽性(++);9～ 12分為強陽性(+++)。PCNA記數(shù)10個高倍鏡不重復(fù)視野中1000個腫瘤細胞中的陽性細胞數(shù),陽性細胞數(shù)占癌細胞總數(shù)的百分?jǐn)?shù)為陽性細胞表達率,即為 PCNA標(biāo)記指數(shù)(PLI)。

1.4 統(tǒng)計學(xué)分析

應(yīng)用 SPSS11.0統(tǒng)計學(xué)軟件進行分析。MMP-9和 PCNA在涎腺良惡性腫瘤中表達之間的相互關(guān)系用i2檢驗和Spearman等級相關(guān)檢驗。不同組間 PLI用 t檢驗,PLI的統(tǒng)計指標(biāo)以± s)%表示。

2 結(jié)果

2.1 MM P-9與 PCNA在涎腺腫瘤中的表達

MM P-9在涎腺惡性腫瘤和良性腫瘤中的陽性表達率分別為73.33%和31.43%,表達水平顯著增高,差異有統(tǒng)計學(xué)意義 (i2=11.3492,P ＜ 0.01)(表1)。MM P-9主要在腫瘤細胞的胞漿中呈陽性表達,表達陽性的腫瘤細胞多位于浸潤的前沿(如圖1、2),在血管內(nèi)皮細胞中也有部分表達。PCNA陽性棕黃色顆粒位于腫瘤細胞的胞核。涎腺良、惡性腫瘤中 PLI增殖指數(shù)分別為 (30.95± 8.53)、(70.13± 19.52),差異有統(tǒng)計學(xué)意義(t= 10.75,P＜0.01)(表1)。

2.2 MM P-9與 PCNA表達的關(guān)系

隨著 MMP-9在涎腺腫瘤中表達強度的增加,PCNA標(biāo)記細胞數(shù)的百分率呈增高趨勢。涎腺惡性腫瘤中 MM P-9陽性組中 PLI增殖指數(shù)為(70.55±20.24),明顯高于陰性組中 PLI增殖指數(shù) (38.45±9.25),差異有統(tǒng)計學(xué)意義(t= 4.29,P ＜ 0.01)(表2)。經(jīng) Spearman等級相關(guān)分析,MM P-9的表達與 PCNA的表達呈顯著正相關(guān) (r= 0.583,P＜0.05)。

表1 涎腺腫瘤中 MMP-9和 PCNA的表達

表2 涎腺惡性腫瘤中 MMP-9不同表達水平與 PLI增殖指數(shù)的關(guān)系

圖1 腺樣囊性癌 MM P-9陽性表達(×200)

圖2 黏液表皮樣癌 MM P-9陽性表達(×200)

3 討論

涎腺腫瘤中浸潤和轉(zhuǎn)移是影響預(yù)后的主要因素,而眾多因素中腫瘤細胞穿透基底膜增殖發(fā)展在腫瘤的浸潤和轉(zhuǎn)移中起到關(guān)鍵作用。

3.1 MMP-9的表達與涎腺腫瘤的關(guān)系

MM PS家族影響著腫瘤的發(fā)生發(fā)展,細胞外基質(zhì)(ECM)的降解是腫瘤浸潤和轉(zhuǎn)移的關(guān)鍵步驟。MMP-9是中性 pH值中活性最佳的酶,能夠廣泛降解 ECM中的 IV、V型膠原和明膠[4]。Robert[5]等研究發(fā)現(xiàn),腫瘤細胞的無限增殖、血管浸潤和遠處血行或者淋巴轉(zhuǎn)移是導(dǎo)致患者預(yù)后的主要因素,而 MM P-9在其中發(fā)揮重要作用。本實驗中觀察發(fā)現(xiàn),MM P-9在涎腺良、惡性腫瘤的陽性表達率分別為31.43%、73.33%,差異有統(tǒng)計學(xué)意義 (P ＜0.01)。表明基底膜的完整性遭到破壞,腫瘤細胞浸潤增殖,腫瘤惡性程度增高。

3.2 PCNA的表達與涎腺腫瘤的關(guān)系

PCNA是存在于細胞核內(nèi)的一種酸性蛋白質(zhì),近年研究證實,它是 DNA聚合酶 δ的輔助因子,參與 DN A的合成并在細胞周期中起著重要的調(diào)控作用[6]。PCNA可以代表腫瘤細胞增殖能力。目前已將它視為 S期細胞的標(biāo)志物,用于細胞增殖動力學(xué)研究[7]。Maeda[8]等對胃癌組織研究發(fā)現(xiàn),PCNA與腫瘤的浸潤、肝轉(zhuǎn)移及腹膜轉(zhuǎn)移等有顯著相關(guān)性。本試驗中觀察發(fā)現(xiàn),PCNA在涎腺良、惡性腫瘤中均有不同程度的表達,低分化組表達高于高分化組,其陽性率呈上升趨勢,與文獻報道相符。表明腫瘤惡性程度越高腫瘤細胞增殖能力越強,細胞增殖活躍,易發(fā)生遠處轉(zhuǎn)移。

3.3 MM P-9與 PCNA的關(guān)系

研究表明,MM P-9的表達強度與 PCNA的增殖活性密切相關(guān)。孫淑娥[2]等在 MM P-9、PCNA在卵巢上皮性腫瘤中的表達及臨床意義中發(fā)現(xiàn) MM P-9的表達強度與腫細胞的增殖活性表達呈正相關(guān)。本實驗顯示,在涎腺惡性腫瘤組織中隨著 MM P-9表達強度的增高,PCNA的增殖指數(shù) PLI亦增高,經(jīng) Spearman等級相關(guān)分析二者表達呈正相關(guān)(P ＜0.05)。可見,MM P-9與 PCNA共同參與腫瘤的浸潤,二者一起作用機制可能是 MMP-9降解細胞外基質(zhì),破壞基底膜。能加速血管內(nèi)皮細胞的遷移、增殖及新生血管網(wǎng)形成,促進腫瘤的生長。兩者在腫瘤的生物學(xué)行為中共相互作用,或者二者受某一相同因素影響。對二者的檢測有助于評估腫瘤的惡性程度,從而對臨床治療及預(yù)后的判斷提供依據(jù)。隨著研究的深入,MM P-9和 PCNA可以作為評價腫瘤惡性潛能的生物學(xué)指標(biāo),成為腫瘤標(biāo)志物,有廣闊的研究前景。

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