高效液相色譜法測定潤肺止咳膠囊中黃芩苷的含量

張月梅

吉林省長春市兒童醫院，吉林 長春 130061

潤肺止咳膠囊具有養陰清熱，潤肺止咳的功效。。臨床用來治療肺熱燥咳，或熱病傷陰所致咳嗽，該藥由百部(蜜炙)、生地黃、麥冬、蘆根、黃芩、苦杏仁、枇杷葉(蜜炙)、桔梗、浙貝母、甘草十味中藥提取、精制加工而制成的膠囊劑。

按照中藥新藥研究的有關技術要求，為了更好的控制潤肺止咳膠囊的質量，參照潤肺止咳膠囊標準WS－10130(ZD－0130) －2002及相關文獻的檢驗方法［1－4］，參照潤肺止咳膠囊質量標準，選擇黃芩中含有的有效成分黃芩苷［5－8］作為含量測定成分，并采用高效液相色譜法測定制劑中黃芩苷的含量，為控制產品質量建立一套科學有效的方法。

1 儀器與試劑

島津LC－2010A高效液相色譜儀，色譜工作站:2010色譜工作站，潤肺止咳膠囊由青海大地藥業有限公司提供(批號:091108、091109、091110)，黃芩苷對照品購自中國藥品生物制品檢定所。甲醇 (天津市四友生物醫學技術有限公司)，水 (二次重蒸水，自制)，磷酸 (北京化工廠)，流動相所用的試劑為色譜純，其他試劑、試藥均為分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件及測定波長的選定 色譜條件:色譜柱:Inertsil ODS－3(250mm×4.6mm，5μl);用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;以磷酸溶液 (0.1%)—甲醇 (54∶46)為流動相;理論塔板數按黃芩苷峰計算應不低于2500，檢測溫度為室溫，流速為1.0ml/min。檢測波長:取黃芩苷對照品適量，用甲醇溶解，配置成適合濃度的供試液，用紫外風光光度儀，在200nm～400nm光譜掃描，其最大吸收波長為274nm，故選定274nm為其測定波長。

2.2 溶液配制與測定方法 對照品溶液的制備:對照品溶液取黃芩苷對照品適量，精密稱定，加50%甲醇溶解并配制成每1ml含0.2mg的溶液，搖勻，即得。供試品溶液的制備:取重量差異合格的潤肺止咳膠囊10粒，精密稱定，倒出內容物，研細，取0.64g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入50%甲醇50ml，稱定重量，超聲處理 (功率160W，頻率40kHz)20min，放冷，再稱定重量，用50%甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液，即得。測定法:分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各20μl，注入液相色譜儀，測定，即得。

2.3 方法學考察

2.3.1 專屬性考察 取缺黃芩的陰性對照樣品，制備陰性對照樣品溶液，按上述色譜條件，測得黃芩苷對照品、供試品溶液和陰性對照溶液的色譜圖，結果在與黃芩苷對照品相同保留時間處，供試品溶液出現黃芩苷色譜峰，陰性對照樣品此保留時間處無雜質峰出現，表明陰性對照無干擾。見圖1－圖3。

2.3.2 標準曲線的制備

稱取黃芩苷對照品適量，精密稱定，配制成一系列濃度的溶液，按擬定的色譜條件進樣，測定峰面積，以峰面積積分值為縱坐標，黃芩苷濃度為橫坐標繪制標準曲線，計算得回歸方程:C=7×106A+3.6162，r=0.9999。結果表明，在51.2μg/ml～818.4μg/ml范圍內，黃芩苷濃度與峰面積呈良好的線性關系。

2.3.3 精密度試驗

精密吸取供試品溶液20μl，重復進樣5次測定黃芩苷峰面積計算相對標準偏差。見表2。

表2 精密度試驗結果

結果表明:本法精密度符合規定。

2.3.4 穩定性試驗

分別取同一份供試品溶液20μl，按上述色譜條件每隔一定時間進樣，記錄峰面積，考察樣品溶液的穩定性，計算相對標準偏差。見表3。

表3 穩定性試驗結果

結果表明，供試品溶液中黃芩苷的含量在8小時內穩定性良好。

2.3.5 重復性試驗

精密稱取樣品適量，由同一人制成六份供試品溶液，精密吸取20μl注入色譜儀，按擬定的色譜條件測定峰面積，計算相對標準偏差。見表4。

表4 重復性試驗結果

結果表明，本方法重現性良好。

2.3.6 中間精密度試驗

精密稱取樣品適量，由不同人在不同時間制成六份供試品溶液，精密吸取20μl注入色譜儀，按擬定的色譜條件測定峰面積，計算相對標準偏差。見表5。

表5 中間精密度試驗結果

結果表明，本方法中間精密度良好。

2.3.7 回收率試驗

采用加樣回收法，取已知含量的潤肺止咳膠囊劑6份，內容物研成細粉，分別添加黃芩苷對照品適量，制成供試品溶液，按上述色譜條件測定，以下式計算回收率。見表6。

表6 回收率試驗結果

結果表明，本法具有良好的回收率。

3 討論

我們的國家是天然藥物的故鄉，有方劑九萬余首，中成藥五千余種、中藥劑型三十五大類四十三種、藥材一萬兩千八百零七種。我們有雄厚的中醫藥理論和豐富的臨床用藥經驗，但在目前植物藥的大市場中我國僅占3%～5%的份額。相反，日本、韓國的漢方藥制劑卻占領了絕大部分國際藥物市場，歐美植物藥的發展勢頭亦對益強勁。我國中藥產品缺少競爭力的主要原因之一在于現行的中藥質量控制方法不能全面地反映中藥制劑的質量，對其內在成分的穩定性、一致性和相對可控性分析不移，直接導致臨床療效的不確定。這一切都嚴重地限礙了我國中藥及其制劑的發展，也成為阻礙我國中藥參與國際市場中競爭的主要因素。因此，提高中藥的質量是實現中藥現代化的迫切需要。中藥特別是中藥復方，包含成百個化學成分，其物質基礎是有效化合物群。無淪是單味中藥還是復方，其化學物質在類型和數量等方面都各異。正是這種多樣性和復雜性構成了單味中藥或復方中藥的復雜體系。如何應用現代儀器和手段研究中藥及其復方的治病物質基礎—化學成分，是建立符合中醫藥質量標準體系的關健。它的出版必將有助于推動中藥質長標準體系約研究。

隨著中藥現代化的不斷深入，HPLC法在中藥成分分析方面應用日趨廣泛，已成為控制中藥質量的重要手段之一，本文采用HPLC法，為控制產品質量，我們參照潤肺止咳膠囊標準，對方中黃芩所含有效成分黃芩苷進行了含量測定。實驗證明，本方法靈敏度高，專屬性強、穩定可靠，適用于潤肺止咳膠囊中黃芩苷的含量測定。

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