高膽固醇血癥患者血漿對氧磷酯酶1活性變化的研究

蔣興亮 劉素蘭 張均 王光華

(川北醫學院附屬醫院檢驗科,四川 南充 637000)

高膽固醇血癥是導致動脈粥樣硬化(atherosclerosis,As)的危險因素之一。高膽固醇導致體內自由基代謝平衡失調,脂蛋白極易被自由基及脂質過氧化物氧化修飾,其結構和功能發生改變有關[1]。對氧磷酯酶1(paraoxonase1,PON1)是肝臟合成和分泌的一種能夠水解脂質過氧化物的抗氧化酶[2],本研究測定高膽固醇血癥患者PON1活性及血脂、氧化修飾低密度脂蛋白(ox-LDL)和丙二醛(MDA)水平,了解PON1活性在高膽固醇血癥患者中的變化及與高膽固醇血癥之間的關系。

1 資料與方法

1.1 研究對象 2007年10月—2008年10月在我院門診就診的高膽固醇(TC)[血漿 TC≥6.22 mmol?L-1,三酰甘油(TG)＜1.70 mmol?L-1)]患者109例。其中男性71例,女性38例,年齡35～6957.8±8.1歲。正常膽固醇[血漿TC ＜5.18 mmol?L-1,且低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)＜3.37 mmol?L-1,TG ＜1.70 mmol?L-1]組為 66例健康體檢者,其中男性43例,女性23例,年齡34～65歲,平均55.1±7.7歲。所有受檢者均無影響脂肪代謝的疾病(如糖尿病、甲狀腺功能減低或肝腎功能不全等);近2個月無急性心肌梗死、心絞痛和腦血管意外,血壓穩定在正常水平;至少1個月內未用過降脂藥、抗血小板藥及鈣離子拮抗劑。

1.2 方法

1.2.1 標本收集 所有受檢者禁食12 h,于清晨采集靜脈血液,肝素抗凝,分離血漿,置-20℃保存備檢。

1.2.2 血漿PON1活性測定 以對氧磷為底物,通過測定對氧磷的水解產物對硝基苯酚的產生速率來計算PON1活性[3]。

1.2.3 血漿MDA測定 用硫代巴比妥酸法。試劑盒由南京建成生物工程公司提供。

1.2.4 血漿ox-LDL的測定 用單抗ELISA法。試劑盒由上海榮盛生物技術有限公司提供。

1.2.5 血脂測定 采用酶法測定TG、TC,用一步酶法分別測定高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)及低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C),透射免疫濁度法分別測定載脂蛋白A(apoA)、載脂蛋白B(apoB)和脂蛋白(a)[LP(a)]。試劑盒由浙江東甌生物工程公司提供。所有生化項目均在日立7170S生化分析儀上完成。

2 結 果

2.1 高膽固醇血癥組和對照組血脂水平的比較高膽固醇血癥組TC、LDL-C濃度顯著高于對照組(P＜0.01),LP(a)、apoB高于對照組(P＜0.05),其他血脂指標差異無統計學意義(表1)。

表1 高膽固醇血癥組與對照組血脂水平的比較()

表1 高膽固醇血癥組與對照組血脂水平的比較()

注:與對照組比較,*P＜0.05,**P＜0.01

項目 高T C組(n=109)對照組(n=66)TG(mmol? L-1) 1.39±0.52 1.32±0.44 TC(mmol?L-1) 6.98±1.38** 4.49±0.51 HDL-C(mmol?L-1) 1.24±0.30 1.26±0.32 LDL-C(mmol?L-1) 5.02±0.92** 2.50±0.71 apoA(g?L-1) 1.20±0.21 1.22±0.24 apoB(g?L-1) 1.18±0.51* 0.81±0.32 LP(a)(mg?L-1) 192.3±129.0* 160.3±103.1

2.2 高膽固醇血癥組與對照組血漿PON1、MDA、ox-LDL的水平 高膽固醇血癥組患者血漿PON1活性顯著低于對照組(P＜0.01),而血漿MDA、ox-LDL水平顯著高于對照組(P＜0.01)(表2)。

表2 高膽固醇血癥患者血漿PON1、ox-LDL、MDA()

表2 高膽固醇血癥患者血漿PON1、ox-LDL、MDA()

注:與對照組比較,*P＜0.05

組別 例數 PON1(kU?L-1)MDA(μmol?L-1)ox-LDL(μg?L-1)對照組 66 171.4±66.2 9.7±2.3 455.1±178.2高 TC組 109 138.1±62.4*12.8±3.8*589.1±198.2*

2.3 高膽固醇血癥患者血漿PON1與 ox-LDL、MDA的關系 PON1分別與血脂、ox-LDL、MDA進行直線相關分析,結果顯示PON1活性與MDA(r=-0.441,P＜0.01)及 ox-LDL(r=-0.402,P＜0.01)呈顯著負相關,與血脂無相關性。

3 討 論

高膽固醇血癥通過多種機制誘導心腦大血管和微血管系統的致炎癥和致血栓狀態、氧化應激損傷、損害血管內皮細胞代謝和功能,最終導致As的發生和發展[4]。高膽固醇血癥時抗氧化能力下降,氧自由基(OFR)生成增加,通過損傷血管內皮細胞結構及功能,誘導血管內皮細胞粘附分子基因表達,促進局部炎性反應和細胞增殖,增強白細胞與內皮細胞的粘附,滅活一氧化氮(NO)生物活性,從多方面作用參與 As的發生發展。本研究采用MDA及ox-LDL作為評價高膽固醇血癥氧化應激的指標,檢測MDA及ox-LDL水平可間接反映體內過氧化物的水平及受氧化損傷的程度。結果顯示,高膽固醇血癥患者血漿MDA及ox-LDL水平較正常對照組顯著升高(P＜0.01),提示在高膽固醇血癥狀態時體內氧化與抗氧化的平衡被破壞,導致脂質過氧化物的聚積。

本研究結果顯示,高膽固醇血癥組患者血漿PON1活性較對照組顯著降低(P＜0.01),且PON1活性與MDA水平及ox-LDL水平呈顯著負相關(P＜0.01)。PON1作為一種抗氧化酶,與體內其他抗氧化酶或物質一樣,在水解過氧化物的過程中活性逐步下降,機體抗氧化能力降低,使其直接參與血中脂質過氧化物的水解能力減弱,不能有效清除過氧化物,特別是脂質過氧化物。過氧化物使 LDL、HDL發生氧化修飾,其結構和功能發生改變,尤其是低密度脂蛋白氧化后,通過多種機制可引發及促進As病變,這是As的始動和關鍵環節[5]。因此,在高膽固醇血癥的治療中,不僅要加強血脂的調節,而且應重視提升包括PON1在內的機體的抗氧化能力。

總之,高膽固醇血癥患者產生大量的過氧化物,使包括PON1在內的抗氧化酶活性降低,導致機體的抗氧化能力下降,氧化與抗氧化平衡被打破,最終對機體造成不利影響。

1 T aniyama Y,G riendling KK.Reactive oxygen species in the vasculature:M olecular and cellular mechanisms[J].Hypertension,2003,42(6):1075-1081.

2 Mackness B,Hine D,McElduff P,et al.High C-reactive protein and low paraox onase 1 in diabetes as risk factors for coronary heart disease[J].Atherosclerosis,2006,186(2):396-401.

3 蔣興亮,龔國忠,周京國,等.血漿對氧磷酯酶1活性在各類肝損害病程中的變化及意義[J].中國臨床醫學,2006,13(4):584-586.

4 Kitayama J,Faraci M R,Lentz SR,et al.Cerebral vascular dysfunction during hypercholesterolemia[J].Stroke,2007,38(7):2136-2141.

5 Shimada K,M okuno H,Matsunaga E,et al.Circulating oxidized low-density lipoprotein is an independent predictor for cardiac event in patients with coronary artery disease[J].A therosclerosis,2004,174(2):343-347.