實驗性肌炎動物模型中肌電圖變化分析

楊蘊天,江新梅

(1.內蒙古醫學院附屬醫院神經內科,內蒙古呼和浩特010050;2.吉林大學第一醫院神經內科)

在臨床上,肌電圖對于多發性肌炎的診斷有著重要的意義[1],為了探討多發性肌炎動物模型中肌電圖的作用,我們應用改良方法用家兔骨骼肌勻漿加佛氏佐劑制作實驗性自身免疫性肌炎(EAM)的動物模型[2],觀察其在肌酶、肌電圖及肌肉病理上的改變,著重對EAM動物肌電圖變化進行分析。

1 材料與方法

1.1 動物模型的建立與分組

16只健康英國短毛豚鼠(吉林大學實驗動物中心提供),體重300-400克,雌雄各半。4-5只同處一籠,每日給以適量的新鮮蔬菜,以免維生素C缺乏。第一周所有的豚鼠均于項背部皮下注射肌勻漿0.2ml+完全佛氏佐劑0.1ml。以后每周注射一次,連續4周。開始免疫注射6周后,取肌酶譜升高的豚鼠作為多發性肌炎的動物模型(16只豚鼠肌酶譜均升高)。隨機分為A組(8只),B組(8只)。

1.2 實驗方法

在開始免疫注射6周后,A組豚鼠每只經胃管喂以強的松3 mg/(kg·d),連續6周;B組豚鼠作為空白對照,繼續喂養6周。

1.3 肌電圖檢測

于免疫前、免疫注射6周后及藥物治療6周后檢測豚鼠的前肢近端外側肌EMG,左右隨機進行,肌電圖儀為國產JD-Ⅱ型肌電圖儀,室溫15-25℃。

1.4 肌肉病理

免疫注射6周后及藥物治療6周后處死豚鼠,取股四頭肌進行肌肉活檢,采用常規蘇木精-伊紅(HE)染色。

1.5 血清肌酶檢測

所有豚鼠分別于免疫前、免疫注射6周后和藥物治療6周后,經心臟穿刺取血1-2 ml,3 000 r/min離心5分鐘,取上層血清,用日立747型生化自動分析儀檢測肌酸磷酸激酶(CPK),乳酸脫氫酶(LDH),谷草轉氨酶(AST)。

1.6 統計學方法

各組內數據比較采用兩樣本均數的 t檢驗,各組間數據比較采用方差分析。

2 結果

2.1 動物的一般情況

免疫注射前豚鼠體型豐滿,皮毛光滑,活動攝食好;免疫注射6周后各組動物均表現倦怠,消瘦,生長緩慢,肌肉軟,喜臥位,局部皮膚破潰;治療4周后A組癥狀明顯好轉,皮膚破潰處結痂、愈合,活動能力增強;B組動物癥狀進行性加重,直至處死。

2.2 肌電圖

免疫6周后運動單位時限明顯縮短,波幅降低,多相波增多(運動電位超過基線4次以上者為多相波)。A藥物干預6周后運動單位時限延長,波幅升高,多相波減少,各項值與治療前比較有顯著差異(P＜0.05),B組改變不明顯(P＞0.05),A組與B組各項值比較有顯著差異(P＜0.05)。(見表1)

表1 EAM豚鼠治療前及治療后的肌電圖各項值比較

2.3 肌肉病理

免疫6周后發現肌肉病理改變,病變以骨骼肌多發性炎癥為特點。鏡下見橫紋肌呈灶性分布的肌細胞變性、壞死和炎細胞浸潤,間質小血管壁增厚,周圍有炎細胞浸潤(見圖1);A組藥物干預6周后肌肉病損明顯得到緩解,炎細胞浸潤和骨骼肌壞死程度都有明顯減輕(見圖2);B組病理改變緩解不明顯(見圖3)。

2.4 肌酶

圖1 免疫6周后出現肌炎改變HE×200

圖2 A組藥物干預6周后肌肉炎癥改變減輕 HE×200

表2 EAM豚鼠治療前及治療后肌酶譜值比較(IU/L,s)

表2 EAM豚鼠治療前及治療后肌酶譜值比較(IU/L,s)

治療前 治療后A組 B組CPK 1567.540±160.49 480.200±237.309 888.717±211.730 LDH 232.767±187.734 28.840±34.763 125.671±83.165 AST 136.200±41.881 75.013±19.374 99.820±65.198

3 討論

多發性肌炎(PM)是神經肌肉疾病中的常見病,是一種以四肢近端肌無力、肌萎縮及血清肌酶水平升高為特點的骨骼肌特發性炎癥,肌電圖靜息電位出現大量纖顫正尖波,運動單位時限縮短,波幅降低,多相波增多,募集反應呈病理干擾相[3,4]。本實驗所采用的實驗方法參考趙紅東等的報道[2],成功的制成了與人類PM病變相似的動物模型。我們的實驗結果表明,免疫注射后豚鼠肌電圖出現了肌源性損害征象,經過藥物治療后,肌電圖改變明顯好轉,同時肌肉病理、血清肌酶亦平行好轉。肌炎時肌細胞變性壞死,肌電圖可較全面反映肌肉病變程度,肌電圖的改變與肌肉病理改變相平行[5],我們的實驗也證實了這一點。但與肌電圖相比,病理檢查雖是最后的確診標準,但因其創傷大,不易重復檢查,不宜作為動態觀察指標。因此肌電圖對于評估EAM模型建立及藥物療效有著重要意義。

[1]張乃崢.多發性肌炎和皮肌炎診斷標準[J].中華風濕病學雜志,1998,2(3):184.

[2]趙紅東,陳祖舜,沈鳴久.實驗性肌炎動物模型制作的研究[J].臨床神經病學雜志,2000,13(5):275.

[3]Dimitri D.Inflammatory myopathies:diagnosis and classifications[J].Presse Med,2009,38(7-8):1141.

[4]Kawai S.Diagnosis and therapy for polymyositis and dermatomyositis[J].Nippon Naika Gakkai Zasshi,2007,96(10):2171.

[5]Blijham PJ,Hengstman GJ,Hama-Amin AD,et al.Needle electromyographic findings in 98 patients with myositis[J].Eur Neurol,2006,55(4):183.