球孢白僵菌MZ041016菌株對平菇厲眼蕈蚊的毒力

袁盛勇, 孔 瓊, 張宏瑞, 李正躍, 張雪梅, 李雄強, 李文偉

(1.云南紅河學院農學系,蒙自 661100; 2.云南紅河學院生物系,蒙自 661100;3.云南農業大學植保學院,昆明 650201)

昆蟲病原真菌是一類通過菌絲穿透寄主體壁侵染昆蟲的病原微生物,對于防治刺吸式口器害蟲,如蚜蟲、葉蟬、飛虱等具有獨到之處,因此研究和開發針對刺吸式口器害蟲的真菌制劑受到國內外的普遍關注[1]。球孢白僵菌(Beauveria bassiana)是目前研究和應用最多的一種重要昆蟲病原真菌,寄主范圍廣,可侵染15個目149個科的700余種昆蟲和螨類,致病性強,適應性強[2],對控制害蟲嚴重發生和減少環境污染起到了很大的作用。

平菇厲眼蕈蚊(Lycoriella pleuroti Yang et Zhang)隸屬于雙翅目,長角亞目,眼蕈蚊科,厲眼蕈蚊屬,是國內食用菌的優勢危害種,俗稱菌蚊、菌蛆。該蟲能為害平菇、猴頭菇、茶樹菇、靈芝等多種食用菌和藥用菌[3]。成蟲常在培養料和出菇期的菌袋口端及子實體上爬行、交尾、產卵。幼蟲潛入培養料及子實體中,直接取食食用菌的菌絲和培養料的原基或鉆蛀幼嫩菇體,造成退菌、原基消失,培養料松散、逐漸變成黃褐色,菇蕾萎縮死亡、菌柄折斷倒伏、耳片缺刻和菇體孔洞,嚴重時子實體完全失去商品價值[4]。關于應用球孢白僵菌防治平菇厲眼蕈蚊的研究尚未見報道,本研究以能侵染平菇厲眼蕈蚊的球孢白僵菌為材料,研究其對平菇厲眼蕈蚊的防治效果,以達到用生物農藥代替化學農藥防治平菇厲眼蕈蚊的目的。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 供試菌種

球孢白僵菌MZ041016菌株保存在紅河學院農學系實驗室,經復壯和擴繁之后供試驗用。

1.1.2 供試昆蟲

從平菇栽培基地采集成蟲,在實驗室菌袋上飼養得到供試蟲態。

1.2 試驗方法

1.2.1 菌種的擴繁、分生孢子液的制備

采用馬鈴薯瓊脂培養基(PDA)在溫度25℃下進行培養,培養10d收集分生孢子。

1.2.2 分生孢子液的制備

用50mL無菌水+0.05%吐溫20作為潤濕劑振蕩脫溶固體培養基上的孢子,并以雙層絲襪過濾,除去菌絲和雜質。用血球計數板在顯微鏡下檢查計算孢子數,測出濃度,再用無菌水分別稀釋成所需的梯度濃度。

1.2.3 菌株對平菇厲眼蕈蚊幼蟲的毒力測定

將球孢白僵菌MZ041016菌株分生孢子稀釋為孢子含量3.0×104～3.0×108個/mL5個處理濃度,每個處理設3個重復,并用0.05%吐溫20+無菌水作對照,每個濃度30頭幼蟲,浸入20～30mL孢子懸液中30s后迅速取出,用干濾紙吸去留在蟲體上的懸浮液,置于盛有黃豆粉的培養皿中,用紗布封口,置于25℃,相對濕度80%的人工氣候培養箱中,每天觀察記錄化蛹和死亡數量,并將蟲尸取出,連續觀察7d。

1.2.4 菌株對平菇厲眼蕈蚊成蟲的毒力測定

球孢白僵菌MZ041016菌株分生孢子液稀釋為3.0×104～3.0×108個/mL5個處理濃度,每個處理設3個重復,并用0.05%吐溫20+無菌水作對照,采用噴霧法接種。在每個容量為300mL瓶壁有孔的礦泉水瓶內放入30頭成蟲。接種時先將成蟲置于瓶內,用M301414型喉頭噴霧器均勻噴施4mL分生孢子液,用紗布封口,置于25℃、相對濕度為80%的人工氣候培養箱中。每天觀察記錄其死亡蟲數,并將蟲尸取出。

1.3 數據統計方法

數據采用統計軟件SPSS10處理,根據校正死亡率進行概率值轉換后,對劑量作線性回歸分析,建立直線回歸模型,從而分別估計劑量效應 LC50、LT50和相關系數(R)等參數。

2 結果與分析

2.1 球孢白僵菌MZ041016菌株不同濃度孢子液對平菇厲眼蕈蚊成蟲的毒力

毒力測定結果(表 1～3)表明,球孢白僵菌MZ041016菌株分生孢子懸浮液濃度為3.6×108個/mL時對平菇厲眼蕈蚊成蟲毒力最強,第7天校正死亡率86.72%,其次是3.6×107個/mL濃度下,其校正死亡率為74.79%,毒力最差為3.6×104個/mL濃度下,校正死亡率為25.02%。在3.6×108個/mL濃度下第2天成蟲出現死亡,隨著時間推移和濃度增加,校正死亡率呈逐漸增加趨勢。對平菇厲眼蕈蚊成蟲毒力測定中第4～7天的致死中濃度(LC50)依次為2.988×108、3.55×107、3.78×106個/mL和2.319×105個/mL。可看出隨著孢子濃度的增加,平菇厲眼蕈蚊成蟲的 LT50逐漸減小,3.6×105～3.6×108個/mL濃度下的LT50依次為8.57、6.14、5.18d和4.28d。

表1 球孢白僵菌MZ041016菌株分生孢子不同濃度對平菇厲眼蕈蚊成蟲的毒力

表2 球孢白僵菌MZ041016菌株分生孢子對平菇厲眼蕈蚊成蟲的致死中濃度

表3 球孢白僵菌MZ041016菌株分生孢子對平菇厲眼蕈蚊成蟲的致死中時

2.2 球孢白僵菌MZ041016菌株不同濃度孢子液對平菇厲眼蕈蚊幼蟲的毒力

表1、表2和表3統計結果表明,球孢白僵菌MZ041016菌株分生孢子懸浮液3.6×108個/mL濃度下對平菇厲眼蕈蚊幼蟲毒力最強,第7天校正死亡率為87.69%,其次是3.6×107個/mL濃度下,校正死亡率為80.46%,毒力最差為3.6×104個/mL濃度下的31.11%。在不同濃度下第2天幼蟲開始出現死亡,隨著時間的推移和濃度增加,校正死亡率呈逐漸增加趨勢。對平菇厲眼蕈蚊幼蟲毒力測定中第 4～7天的致死中濃度(LC50)分別為3.467×108、2.853×107、2.841 ×106個/mL 和3.082×105個/mL,隨時間推移,致死中濃度逐漸減小。隨著分生孢子濃度的增加,平菇厲眼蕈蚊幼蟲致死中時間 LT50逐漸減小,3.6×105～3.6×108個/mL濃度下的LT50依次為8.09、6.03、4.96d和4.53d。

表4 球孢白僵菌MZ041016菌株分生孢子不同濃度對平菇厲眼蕈蚊幼蟲的毒力

表5 球孢白僵菌MZ041016菌株分生孢子對平菇厲眼蕈蚊幼蟲的致死中濃度

表6 球孢白僵菌MZ041016菌株分生孢子對平菇厲眼蕈蚊幼蟲的致死中時

3 討論

利用昆蟲病原真菌防治平菇厲眼蕈蚊的報道很少,試驗應用球孢白僵菌MZ041016菌株不同濃度分生孢子液對平菇厲眼蕈蚊成蟲和幼蟲進行毒力測定,結果表明,兩個蟲態均能感病,其中幼蟲較成蟲敏感,這可能與低齡幼蟲的各種防御功能發育不完善,因而抵抗力較差有關。使用不同孢子濃度處理平菇厲眼蕈蚊成蟲和幼蟲的結果表明,3.6×108個/mL是較為理想的濃度。環境條件對該菌的毒力影響很大,其中溫度和濕度是兩個非常重要的因素,適當的溫度和濕度是該菌防治平菇厲眼蕈蚊的關鍵因素,在菇房中應用還待進一步深入研究。

[1]李濤,劉映紅,張永軍.球孢白僵菌對煙蚜繭蜂寄生行為的影響[J].植物保護學報,2007,34(4)：401-404.

[2]李榮森,羅紹彬.微生物防治害蟲[M].北京：科學出版社,1983.

[3]何嘉,張陶,李正躍.平菇眼蕈蚊的生物學特性及其防治[J].中國食用菌,2004,24(4)：52-54.

[4]沈登榮,張宏瑞,張陶.我國食用菌眼蕈蚊的研究現狀[J].中國食用菌,2008,27(1)：48-50.