HPLC法測定乙肝解毒膠囊中黃芩苷的含量

宮淑枝 貢慶欣

1 吉林省通化市人民醫院（134000）

2 吉林省通化市食品藥品檢驗所（134000）

乙肝解毒膠囊[1]是由黃柏、拳參、黃芩、大黃、胡黃連、土茯苓、綿馬貫眾、黑礬等8味中藥組成的復方制劑，用于乙型肝炎，辨證屬于肝膽濕熱內蘊等癥[1]。該品種為中復方制劑，已在衛生部藥品標準中藥成方制劑第一冊收載，但原標準中無定量指標。本文采用HPLC法對該品種黃芩中的黃芩苷進行了含量測定，結果操作簡便、方法準確、重現性好，可用于該制劑的質量控制。

1 儀器與試藥

日本島津LC-2010AHT型高效液相色譜儀；日本島津UV-1700型紫外分光光度計。黃芩苷對照品（由中國藥品生物制品檢驗所提供）批號：110715-200514，規格：供含量測定用；甲醇為色譜純，水為純化水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱：大連依利特C18（4.6×250mm，5μm）；流動相：甲醇-0.5%磷酸溶液（47∶53）為流動相[2]；檢測波長為280nm；流速：0.8mL/min；柱溫：室溫。理論板數按黃芩苷峰計算應不低于5000。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品溶液的制備

精密稱取黃芩苷對照品適量，加稀乙醇制成每1mL含55μg的溶液，即得。

2.2.2 供試品溶液的制備

取本品裝量差異項下的內容物，混勻，研細，取約1g，精密稱定，置錐形瓶中，精密加入稀乙醇50mL，稱定重量，加熱回流3h，放冷，再稱定重量，用稀乙醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液，即得。

2.3 陰性對照試驗

為進一步考察試驗的合理性，取不含黃芩的陰性對照樣品。依正文所述方法進行測定。結果，陰性樣品色譜在與黃芩苷峰相應的保留時間附近無干擾峰檢出，從而證明本方法是合理可行的。

2.4 線性關系考察

精密稱取黃芩苷對照品適量，加稀乙醇溶解并稀釋，制得濃度為54.0μg/mL的對照品溶液，分別精密吸取2、6、10、14、18μL測定（平行兩次），以對照品進樣量為橫坐標，以峰面積為縱坐標，繪制標準曲線，結果黃芩苷在0.1080～0.9720μg范圍內，呈良好的線性關系，回歸方程：Y=4054030.556 x＋8000.700 (r=1.0000) 。

2.5 精密度試驗

精密吸取同一供試品溶液10μL，注入液相色譜儀，連續進樣6次，黃芩苷峰面積的平均值為2226028，其RSD=0.45%。

2.6 穩定性試驗

分別精密吸取同一供試品溶液10μL，于0、2、4、8、12h注入液相色譜儀，黃芩苷峰面積的平均值為2227671，其RSD=0.39%。

2.7 重復性試驗

取同一供試品（040603）6份，按2.2.2的方法制備成供試品溶液，分別測定，結果黃芩苷的平均含量為0.59mg/粒，其RSD=0.46%。

2.8 回收率試驗

精密稱取已知含量的供試品（長春晨光，批號：040603，含量為0.59mg/粒）6份，分別精密加入對照品1.431mg，依法測定結果見表1。

表1 回收率試驗結果

2.9 樣品含量測定

取3批樣品，按2.2.2方法制備供試品溶液，依上述色譜條件測定含量，結果見表2。

3 討 論

3.1 測定波長的選擇

表2 樣品中黃芩苷含量測定結果（n=4）

取黃芩苷對照品的甲醇溶液，經UV-260紫外分光光度計200～400nm范圍內測定黃芩苷在278.5nm波長處，有最大吸收，參照《中國藥典》2005年版一部“黃芩”含量測定項下測定黃芩苷所采用的波長，故選擇280nm為本實驗的測試波長。

3.2 提取方法的考察

取本品裝量差異項下的內容物，混勻，研細，取兩份，每份約0.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入70%乙醇50mL，稱定重量，一份超聲處理30min，另一份加熱回流30min，放冷，再稱定重量，用70%乙醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液，即得，按正文測定法測定，結果見表3。

表3 提取方法考察表

根據上表中黃芩苷含量的檢測結果，確定樣品的提取方法為加熱回流。

3.3 提取時間的考察

取本品裝量差異項下的內容物，混勻，研細，取4份，每份約1g，精密稱定，置錐形瓶中，精密加入稀乙醇50mL，稱定重量，分別加熱回流1、2、3、4h，放冷，再稱定重量，用稀乙醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液，即得，按正文的方法測定，結果見表5。

表4 提取時間考察表

根據上表中黃芩苷含量的檢測結果，確定樣品的提取時間為3h。

[1]衛生部藥品標準.中藥成方制劑[S].第一冊,1989.

[2]國家藥典委員會.中國藥典[S].一部.北京:化學工業出版社,2005:211-212.