Prousion 對氧自由基的清除作用

楊春寶 潘家祜*

1 江西省九江市中國人民解放軍第171醫院藥劑科（332000）

2 上海市復旦大學藥學院藥理室（200032）

Prousion是一類產自日本的多孔狀礦粉，經日本健康促進協會橋本政和博士研究發現具有一定的生物學作用。由橋本政和提供的Prousion-A、B、C (P-A、P-B、P-C)是經3種不同方法處理的這類礦粉。本研究分別采用化學和物理方法對其體外清除羥基自由基和超氧自由基的作用進行測定。

1 材料與方法

1.1 Prousion對羥基自由基（OH·）作用的測定

1.1.1 用脫氧核糖法檢測Prousion對羥基自由基的影響[1,2]

Prousion（Prousion由日本橋本政和博士提供）：用0.2 %羧甲基纖維素鈉（CMC）配成不同濃度的混懸液：0.014、0.007、0.0035、0.00175g/mL。D-脫氧核糖（2'-Deoxy-D-Ribose），AMRESO.Co.Lot:0657；其余試劑均為分析純試劑。其測定原理為：Fe3+- EDTA與抗壞血酸及H2O2產生·OH，使脫氧核糖降解，在酸性環境中，降解產物可與TBA 反應，形成粉紅色物質，在 532nm 處進行比色測定。

1.1.2 用電子自旋共振（Electron Spin Resonance，ESR）直接測定Prousion 對·OH的清除作用[3]

ESR測定儀：ER 200D-SRC，Bruker company.SF = 9.81GHz，SP =20mW，MF = 100kHz，MA = 0.8G； 自旋捕集劑為DMPO，由復旦大學測試中心測定。

表1 Prousion對羥基自由基（·OH）的清除作用 (±s，n = 4)

表1 Prousion對羥基自由基（·OH）的清除作用 (±s，n = 4)

濃度mol/L 甘露醇 OD 抑制率% 濃度g/L P-A OD 抑制率% P-B OD inhibition% P-C OD 抑制率%CMC 0.475±0.007 0 0 0.42±0.022 0 0.561±0.020 0 0.543±0.006 0 0.1953 0.424±0.001 10.74 0.0547 0.335±0.004 20.24 0.471±0.011 16.04 0.421±0.008 22.47 0.3906 0.402±0.019 15.37 0.1094 0.3043±0.007 27.55 0.456±0.005 18.72 0.394±0.009 27.44 0.7813 0.348±0.011 26.74 0.2188 0.233±0.0006 44.64 0.406±0.019 27.54 0.312±0.028 42.54 1.5625 0.296±0.008 37.68 0.4375 0.184±0.003 56.19 0.314±0.008 43.98 0.228±0.016 58.01 IC50 1.172 IC50 0.2209 0.2962 0.2183

表2 ESR檢測 Prousion 清除羥基自由基的作用

表3 Prousion對超氧自由基的清除作用 (±s，n = 4)

表3 Prousion對超氧自由基的清除作用 (±s，n = 4)

（g/L） P-A OD 抑制率% P-B OD 抑制率% P-C OD 抑制率%CMC 0.38±0.002 0 0.375±0.009 0 0.432±0.022 0 0.05645 0.38±0.003 0 0.363±0.005 3.2 0.424±0.005 1.85 0.1129 0.349±0.005 8.2 0.355±0.006 5.33 0.392±0.004 9.26 0.2258 0.29±0.010 23.68 0.329±0.010 12.27 0.345±0.004 20.14 0.4516 0.248±0.006 34.74 0.179±0.017 52.27 0.213±0.003 50.69 IC50 0.4025 0.3854 0.3626

1.2 Prousion對超氧自由基（O2·）作用的測定

1.2.1 用黃嘌呤氧化酶法[4]檢測Prousion對超氧自由基的影響

黃嘌呤氧化酶（Xanthine Oxidase），Sigma，Lot: 9904；次黃嘌呤 Hypoxanthine，Sigma，Lot:9712；其余試劑均為分析純試劑。其測定原理為：次黃嘌呤通過黃嘌呤氧化酶反應系統產生超氧陰離子自由基(O-2·)，后者氧化羥胺形成亞硝酸鹽，在顯色劑-對氨基苯磺酸與萘乙二胺的作用下生成紅色重氮化物，在550nm進行比色測定。

1.2.2 用電子自旋共振（Electron Spin Resonance，ESR）直接測定Prousion 對O2·的清除作用

ESR測定儀：ER 200D-SRC，Bruker company.SF = 9.81GHz，SP =20mW，MF = 100kHz，MA = 0.8G；由復旦大學測試中心測定。

1.3 數據處理

2 結 果

2.1 Prousion對羥基自由基（·OH）的清除作用

2.1.1 脫氧核糖法測定Prousion清除羥基自由基的作用，見表1。

上述結果表明，Prousion-A、B、C對羥基自由基（·OH）的IC50分別為0.2209、0.2962和0.2183 g/L，其作用強弱順序為P-C＞P-A＞P-B。

2.1.2 ESR的測定結果，見表2和圖1。

經ESR測定Prousion對羥基自由基（OH·）的清除作用的強弱順序為P-C＞P-B～P-A。本結果佐證了上述脫氧核糖法的測定結果。

2.2 Prousion對超氧自由基（O2·）的清除作用

2.2.1 黃嘌呤氧化酶法測定Prousion清除超氧自由基的作用，見表3。

圖1 ESR檢測 Prousion 清除.羥基自由基作用的圖譜

圖2 ESR檢測 Prousion 清除.羥基自由基作用的圖譜

表4 ESR檢測 Prousion 清除超氧自由基的作用.

上述結果表明，Prousion-A、B、C對超氧自由基（O2·）的IC50分別為0.4025、0.3854和0.3626g/L，其作用強弱順序為P-C＞P-B＞P-A。

2.2.2 ESR的測定結果，見表4和圖2。

經ESR測定，Prousion對超氧自由基（O2·）的清除作用強弱順序為P-C＞P-B＞P-A。本結果也證實了上述黃嘌呤氧化酶法的測定結果。

3 討 論

為了解Prousion原料的理化性質，我們在復旦大學國家微分析中心采用XL30FEG掃描電鏡和能譜分析儀對Prousion原料進行了觀察與分析。結果表明：Prousion原料粉末有較好的細度，粒徑≤5μm。所含的大多為常量元素，如C、O、Na、Al、Si、K、Ca、Fe等，其中含有一些多孔的微粉。

我們機體在代謝過程中因多種原因產生的氧自由基劇增會對機體細胞產生氧化應激損傷。這種氧化應激損傷以超氧陰離子自由基和羥基自由基為甚。它們也是腫瘤、心血管疾病等許多疾病以及衰老的重要原因。這類氧自由基的檢測有多種方法[5-8]。

為探討Prousion對氧自由基的清除作用，本研究分別采用化學和物理方法對危害較大的超氧自由基和羥基自由基進行檢測，即分別采用黃嘌呤氧化酶法和D-脫氧核糖法檢測Prousion對這兩個氧自由基的清除作用，采用電子自旋共振（ESR）測定儀進行驗證。檢測結果不僅證明了Prousion對這兩種氧自由基的清除作用，而且，通過化學測定，獲得了Prousion清除作用IC50的重要參數，ESR測定又為這些重要參數提供了較為一致的佐證。

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