高效液相色譜法測定小兒氨酚烷胺顆粒中咖啡因含量

小兒氨酚烷胺顆粒是由對乙酰氨基酚、咖啡因、撲爾敏、人工牛黃組成的復方制劑，常用于兒童傷風感冒引起的鼻塞、咽喉痛、頭痛、發熱等[1,2]。咖啡因主要限于配制復方制劑，常與對乙酰氨基酚合用，能增強鎮痛作用，用于治療一般性疼痛。咖啡因具有刺激心臟、強心利尿、提神醒腦、興奮中樞神經、擴張血管、增強胃分泌等生物活性，但一次服用過多會產生惡心、嘔吐、煩躁不安、肌肉震顫、抽搐、驚厥等癥狀,已被列入第一類精神藥品管制范圍。對成人感冒藥中咖啡因含量的測定已有報道[3，4]。作者在此建立了一種快速檢測小兒感冒藥中咖啡因含量的高效液相色譜法，并取得滿意效果。

1 實驗

1.1 材料、試劑與儀器

小兒氨酚烷胺顆粒(批號:20100203、600579014100103、 10013153、 0910052)，購自藥店。

咖啡因對照品，純度>99%，TLC檢驗為一單純斑點，由寶雞文理學院化學化工系有機化學實驗室提供。

甲醇，色譜純,美國Methanex公司；娃哈哈純水。

Agilent 1200型高效液相色譜儀、G1328B型二級管陣列檢測器，美國安捷倫公司；KQ5200E型超聲波清洗器，昆山市超聲儀器有限公司；DZF-1型電熱恒溫鼓風干燥箱，上海一恒科學儀器有限公司；ME254S型電子天平，德國Sartorius公司；UV-2550型紫外分光光度計，日本島津公司。

1.2 對照品溶液的制備

精密稱取105℃干燥至恒重的咖啡因對照品0.0507 g，置100 mL容量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，即為對照品溶液。

1.3 樣品溶液的制備

分別取4種批號的小兒氨酚烷胺顆粒6袋，研細，精密稱取1/30袋，置50 mL容量瓶中，用水稀釋至刻度，用微孔濾膜(0.45 μm)過濾，即為樣品溶液。

1.4 色譜條件

色譜條件為：Eclipse XDB-C18色譜柱(150 mm×4.6 mm，5 μm)，流動相為甲醇-水(35∶65)，流速1.0 mL·min-1，進樣量20 μL，檢測波長275 nm。

2 結果與討論

2.1 紫外吸收波長的確定

對咖啡因紫外吸收光譜進行測定，結果顯示樣品溶液在275 nm (圖1)處有最大吸收。因此本實驗選擇275 nm作為檢測波長。

圖1 咖啡因紫外吸收圖譜

2.2 線性關系

分別量取對照品溶液0.75 mL、1.5 mL、3 mL、4 mL、5 mL、6 mL、7 mL，加入25 mL容量瓶中定容，使其定容后的濃度分別為15 mg·L-1、30 mg·L-1、60 mg·L-1、80 mg·L-1、100 mg·L-1、120 mg·L-1、140 mg·L-1，每次進樣20 μL對照品溶液，得到色譜流出曲線。以咖啡因濃度(mg·L-1)為橫坐標、峰面積為縱坐標繪制標準曲線，見圖2。

圖2 咖啡因標準曲線

由圖2可以看出，咖啡因濃度與峰面積在15～140 mg·L-1范圍內有良好的線性關系。對其擬合回歸，得回歸方程為y=64.556x+71.885，R2=0.9991。

2.3 精密度

取同一種對照品溶液(100 mg·L-1)重復進樣6次，每次20 μL。測得其RSD=1.33%(n=6)，說明儀器精密度良好。

2.4 重復性

分別取4 種樣品溶液按色譜條件重復進樣3 次，測得4種樣品溶液中咖啡因色譜峰峰面積的RSD值分別為0.97%、1.05%、0.77%、0.41%(n=3)，表明方法的重復性好。

2.5 穩定性

分別取4種樣品溶液，在不同時間0 h、1 h、2 h、3 h、4 h、5 h按色譜條件進樣，記錄峰面積，計算其RSD值。結果分別為1.85%、3.35%、1.83%、2.98%(n=6),表明樣品在5 h內穩定。

2.6 樣品測定

取處理好的樣品溶液進行測定，每次進樣量為20 μL，得到HPLC色譜圖,見圖3。

圖3 咖啡因對照品(a)與樣品(b)的色譜圖

由圖3可知，咖啡因與其它組分分離較好，保留時間約為3.6 min。含量測定結果見表1。

表1 4種樣品中咖啡因的含量測定結果

2.7 加標回收率測定

取已知含量樣品，加入咖啡因對照品，進行回收率實驗，結果見表2。

表2 咖啡因回收率測定結果

由表2可以看出，該方法平均回收率為106.8%,RSD為2.21%。

2.8 討論

實驗中嘗試用甲醇-三氟乙酸、乙腈-水、甲醇-水體系為流動相，其中甲醇-水(35∶65)體系保留時間合適、分離度高、峰形對稱，故選定甲醇-水(35∶65)為本實驗的流動相。

比較不同柱溫20℃、25℃、30℃，發現柱溫對咖啡因的保留時間影響不大，最終選擇柱溫在25℃下進行測定。

3 結論

利用高效液相色譜法檢測小兒氨酚烷胺顆粒中咖啡因含量，咖啡因濃度在15～140 mg·L-1范圍內線性關系良好，回歸方程為y=64.556x+71.885，R2=0.9991,平均加標回收率為106.8%，RSD=2.21%。該法快速、簡便、結果可靠，適用于小兒氨酚烷胺顆粒中咖啡因的質量控制和監測。

參考文獻：

[1] 姜紅,周希英,賈善學.HPLC法測定小兒速效感冒顆粒中對乙酰氨基酚和咖啡因的含量[J].山東醫藥工業,2002,21(5):9-10.

[2] 孫桂榮，盧華偉，潘舒平.HPLC測定氨咖麻敏膠囊中各組分的含量[J].中國藥學雜志,2004,39(7):524-544.

[3] 尤偉,張娟.HPLC法測定6種感冒藥中咖啡因的含量[J].化學工程與裝備，2009,(3):104-105.

[4] 朱軍,陳中道,趙艷霞,等.7種常用感冒藥中咖啡因的HPLC測定[J].濟寧醫學院學報,2004,27(1):44-45.