咪達唑侖共軛體系的研究

咪達唑侖(Midazolam)是一種苯二氮卓類藥物，臨床上常用于麻醉誘導的術前用藥和維持、診斷性或治療性操作的鎮靜等。咪達唑侖在強堿條件下不溶，因此臨床應用時注射液采用其鹽酸鹽、口服制劑采用其馬來酸鹽。咪達唑侖鹽酸鹽顯弱酸性，文獻報道其水溶液具有共軛性質，但沒有說明引起共軛現象的具體條件，因此在進行藥物分析、藥物配伍及藥代動力學研究時常誤將咪達唑侖的共軛化物當成其有關物質[1～3]。

作者以高效液相色譜法為分析手段，考察了溶液pH值、放置時間以及溶液稀釋濃度對咪達唑侖共軛體系的影響。

1 實驗

1.1 試劑與儀器

咪達唑侖注射液(批號：090301，090508)，宜昌人福藥業有限責任公司；甲醇為色譜純，其它試劑均為分析純。

高效液相色譜儀(配有Waters e2695進樣系統、Waters 2489紫外可見檢測器、Empower色譜數據處理系統)，美國Waters公司；FE20型pH計，Mettler Toledo公司。

1.2 色譜條件

色譜柱：CPS-2 HYPERSIL(250 mm×4.6 mm，5 μm)，流動相為甲醇-緩沖溶液(0.1 mol·L-1磷酸與0.03 mol·L-1三乙胺等量混合，用0.1 mol·L-1氫氧化鈉溶液調pH值至3.5)=65∶35，流速1.0 mL·min-1，檢測波長220 nm，柱溫40℃，進樣量20 μL。

1.3 方法

(1)取咪達唑侖注射液(規格2 mL∶2 mg)調成不同pH值樣品若干份，均用流動相稀釋到0.5 mg·mL-1，放置3 h后測其pH值，然后采用HPLC法測定咪達唑侖的閉環物及開環物，并用歸一法計算含量。

(2)取咪達唑侖注射液(規格2 mL∶2 mg)，放置不同時間，然后采用HPLC法測定咪達唑侖的閉環物及開環物，并用歸一法計算含量。

(3)取不同規格咪達唑侖注射液，加入不同量的流動相得到不同稀釋濃度(以流動相與樣品體積比表示)樣品(表1)，終濃度均為0.5 mg·mL-1，放置3 h后測其pH值，然后采用HPLC法測定咪達唑侖的閉環物及開環物，并用歸一法計算含量。

表1 不同稀釋濃度樣品的配制

2 結果與討論

2.1 共軛體系的確定

實驗發現，咪達唑侖注射液的液相色譜圖中在相對主峰保留時間為0.6 min的地方出現一未知雜質峰，其峰面積隨著條件的改變發生變化。采用HPLC-MS方法，測定該雜質分子量為343，經確認為化合物Ⅱ，即咪達唑侖的開環物；主峰分子量為325，經確認為化合物Ⅰ，即咪達唑侖閉環物。說明咪達唑侖水溶液中確實存在共軛平衡體系(圖1)。這可能是因為咪達唑侖在酸性溶液中，會在4,5雙鍵處開環，形成相應的開環物，并以開環和閉環的形式均衡存在于溶液中。

(Ⅰ)閉環物 (Ⅱ)開環物

2.2 pH值對共軛體系的影響(圖2)

由圖2可知，咪達唑侖在酸性條件下形成一個開環物與閉環物的動態平衡，pH值越大，開環物的含量越低，反之閉環物的含量越高，但開環物及閉環物的總含量基本不變。pH<2.5時，開環物的含量隨pH值的降低而快速上升；當pH值接近5時，開環物完全轉化成閉環物。

圖2 pH值對共軛體系的影響

2.3 放置時間對共軛體系的影響(圖3)

由圖3可知，隨著放置時間的延長，咪達唑侖共軛體系由開環物向閉環物形式轉化；放置3 h后，開環物基本完全轉化為閉環物。

2.4 稀釋濃度對共軛體系的影響(圖4)

圖4 稀釋濃度對共軛體系pH值(a)和開環物含量(b)的影響

由圖4可知，稀釋濃度可以引起咪達唑侖溶液pH值的微小差異，由于咪達唑侖的共軛體系對pH值敏感，這個微小差異也可以破壞共軛體系的平衡，因此稀釋濃度越小，體系中開環物的含量越高，最高達6.91%，最低約0.14%。

3 結論

采用高效液相色譜法研究了咪達唑侖共軛體系。結果表明，咪達唑侖在水中以開環物和閉環物的共軛體系形式存在；隨著放置時間的延長，咪達唑侖共軛體

共軛體系逐漸由開環物向閉環物轉化,放置3 h后幾乎完全轉化為閉環物；溶液pH值增大時，開環物向閉環物轉化，當pH值接近5時，幾乎都轉化為閉環物；反之溶液pH值降低時，閉環物向開環物轉化，當pH<2.5時，開環物的含量隨pH值的降低而快速上升；不同規格樣品，稀釋濃度越小，共軛體系中開環物的含量越高。

參考文獻：

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