六胺銀套染馬松三色染色在腎小球腎炎和腎小球病診斷中的應用

董愉 楊詩聰 陳文芳 吳惠群

免疫復合物在腎小球基底膜中沉積的形態和定位在各種腎小球腎炎和腎小球病的鑒別診斷中很重要，傳統的六胺銀染色是用HE染色復染的，不利于觀察腎小球中的免疫復合物的形態和定位，我們使用六胺銀套染馬松三色染色，結果較為滿意，現將方法介紹如下。

1 材料與方法

1.1 本院送檢腎穿或移植腎組織。所有腎組織均用10%緩沖中性甲醛固定，Bousin氏液、常規脫水、透明、浸蠟和包埋，切片均厚約2u。

1.2 染色方法

1.2.1 切片脫蠟至水，蒸餾水洗。

1.2.2 1%高碘酸氧化15 min，水洗，蒸餾水洗。

1.2.3 8%鉻酸加強氧化30 min，水洗，蒸餾水洗。

1.2.4 1%偏重亞硫酸鈉1 min，水洗，蒸餾水洗。

1.2.5 新鮮配制六胺銀溶液(六胺銀貯備液10 ml、四硼酸鈉2 ml、蒸餾水20 ml)，預熱至60℃，切片放入六胺銀溶液中15～20 min。

1.2.6 取出切片，蒸餾水洗，0.1%氯化金調色2 min，顯微鏡下控制，蒸餾水洗。

1.2.7 3%硫代硫酸鈉處理2 min，水洗。

1.2.8 天青石蘭媒染5 min，水洗。

1.2.9 May’s蘇木素 5 min，水洗。

1.2.10 促藍液返藍1 min，水洗。

1.2.11 蒸餾水洗，麗春紅約30 s，蒸餾水洗。

1.2.12 1%磷鉬酸處理5 min。

1.2.13 各級酒精脫水，二甲苯透明，中性樹膠封片。

2 結果

腎小球基底膜呈黑色細絲狀，免疫復合物呈紅色，胞核紫藍色，胞質和紅細胞呈紅色(如下圖)。

3 討論

病理診斷是疾病和病變的最后診斷，診斷的準確性有賴于制作良好的組織切片，包括常規的HE染色、特殊染色和免疫組化。通過光鏡檢查可以顯示腎組織的各種細胞基底膜間質、血管、特殊蛋白的沉積和各種病變。在腎臟病理診斷中，特殊染色是必不可缺少的輔助診斷方涉。

免疫復合物是腎炎抗原刺激身體產生抗體，抗原和抗體在血循環中形成循環免疫復合物，在短時間內形成大量小分子量免疫復合物。在六胺銀和馬松三色混合染色里免疫復合物又稱嗜復紅蛋白，可呈現團塊狀、條帶狀、顆粒狀，可沉積于腎小球的系膜區、基底膜的內皮上和上皮下。免疫復合物的形態和沉積部位對區分各種腎小球腎炎和腎小球病有重要考價值。

①膜性腎小球腎炎:可見上皮下多數嗜復紅蛋白沉積;②系膜增生性腎小球腎炎:可見增寬的系膜區有嗜復紅蛋白沉積;③毛細血管內增生性腎小球腎炎:可見基底膜外側或上皮細胞下有稀疏的團塊狀嗜復紅蛋白沉積;④膜增生性腎小球腎炎:可見系膜區和基底膜的內皮細胞下嗜復紅蛋白沉積(Ⅰ型)，有時系膜區、內皮下和上皮下均可見嗜復紅蛋白沉積，導致基底膜呈釘突狀改變(Ⅲ型);⑤狼瘡性腎炎:可見大量嗜復紅蛋白在毛細血管內皮下的條帶狀沉積，導致基底膜嚴重增厚和僵直，有如鐵絲環或白金耳樣改變;⑥IgA腎病:在系膜區出現大塊狀、凸向腎小囊腔的嗜復紅蛋白沉積。

傳統的六胺銀染色是用HE染色復染的。不利于觀察腎小球中的免疫復合物，而改良的六胺銀和馬松三色混合染色，由于基底膜的釘突形成、睫毛狀改變、雙軌和多軌改變可精確顯現，所以有否免疫復合物的沉積以及免疫復合物的定位更為精確，而且對腎小球內增生膠原成分可區分Ⅲ型和Ⅳ型。病變部位亦易于被識別。故在腎臟病理診斷以及科研工作上具有一定的實用價值。

［1］鄒萬忠.腎活檢病理學.北京大學醫學出版社，2006:249-253.

［2］病理學技術.人民衛生出版社，168-170.

［3］凌啟波.實用病理特殊染色和組化技術，廣東高等教育出版社，1989:238-241.