重組禽流感病毒H5亞型二價滅活疫苗(H5N1,Re-5+Re-4)免疫雞和鴨后抗體消長規律

陳永忠,李俊平,李啟紅,楊承槐,汪 洋,夏業才

(1.青海省西寧市畜牧獸醫站,青海西寧810003;2.中國獸醫藥品監察所,北京海淀100081)

禽流感(AI)是由A型流感病毒引起的一種禽類傳染病。根據致病性的不同將禽流感分為高致病性禽流感(HPAI)和低致病性禽流感(IPAI),HPAI被世界動物衛生組織(OIE)列為A類傳染病,我國將其列為一類動物疫病[1]。近幾年來,禽流感在世界各地反復出現,2004年亞洲發生了高致病性禽流感,2006年底和2007年初東南亞又出現疫情,并發現了人感染禽流感。我國養禽業也一直受到禽流感的威脅。因此,它不僅給畜牧業造成了巨大的損失,而且給人們的公共衛生安全帶來了嚴重的威脅。

疫苗免疫仍是預防禽流感的有效手段之一,被一些國家和地區采用[2-4]。有關禽流感疫苗的免疫效果及抗體消長規律國內學者做了一些研究工作[5-8],但作為我國現階段使用的主要疫苗,重組禽流感病毒H5亞型二價滅活疫苗(H5N1,Re-5株+Re-4株。以下簡稱禽流感二價苗)免疫雞、鴨的抗體動態變化尚未見報道。本試驗取該疫苗3批,按H5N1的免疫方法和程序免疫商品雞、鴨,定期采血測定血清HI抗體效價,研究禽流感二價苗免疫雞、鴨后HI抗體消長規律及其差異,以期為該疫苗的推廣使用提供科學的試驗依據。

1 材料與方法

1.1 試驗動物 1周齡海藍褐雞,購自北京平谷種雞場;1周齡北京麻鴨,購自北京平谷種鴨場。

1.2 疫苗 重組禽流感病毒H5亞型二價滅活疫苗(H5N1,Re-5株+Re-4株)三批,批號分別為200807、200808 、200809,哈藥集團生物疫苗有限公司生產。

1.3 血凝抑制(HI)試驗用抗原 禽流感病毒H5亞型HI試驗抗原(H5,Re-4),批號:200702,哈爾濱維科生物技術開發公司生產;禽流感病毒H5亞型HI試驗抗原(H5Re-5),批號:200801,哈爾濱維科生物技術開發公司生產。

1.4 標準陽性血清 哈爾濱維科生物技術開發公司生產。

1.5 儀器 一次性V型血凝板,微量移液器,微量振蕩器,離心機。

1.6 主要試劑 0.1 mol/L PBS(pH 7.2),阿氏液,1%雞紅細胞懸液(現用現配)。

1.7 分組和接種 將新購進的1周齡海藍褐雞和北京麻鴨分別隨機分成4組,每組10只。待雞和鴨禽流感母源抗體消失后,將禽流感二價苗免疫接種,每批次一組對應頸部皮下注射0.5 mL/只,鴨首免3周后加強免疫1次,劑量 0.5 mL/只。

1.8 采血 雞鴨免疫后每2周翅靜脈采血(1 mL/只)并分離血清。

1.9 HI抗體效價測定 按照“重組禽流感病毒H5亞型雙價滅活疫苗(H5N1,Re-5株+Re-4株)制造及檢驗試行規程”中血凝抑制試驗(HI)操作技術進行。

2 結果

2.1 疫苗免疫雞后的HI抗體消長情況 禽流感二價苗可有效刺激產生HI抗體,而且不同批次的疫苗所致的HI抗體效價的消長規律基本一致。免疫后2周,HI抗體效價達到4.1 log2～4.7 log2,第4周各組 HI抗體效價均達到最高值 8.8 log2～10.1 log2。各組HI抗體效價從第6周開始下降,第8周以后下降相對較緩慢。第16周內能夠維持較高的抗體水平,第20周以后抗體水平衰減到4 log2以下。不同批次的疫苗免疫組各個采樣點的抗體效價t檢驗差異不顯著(P＞0.05)。

2.2 疫苗免疫鴨后HI抗體消長情況 不同批次的禽流感二價苗均能有效地刺激鴨產生HI抗體,而且HI抗體效價的消長規律一致。免疫后第2周HI抗體效價達到 2.7 log2～4.0 log2,第 4周達到4.0 log2～5.6 log2,加強免疫(首次免疫后第3周)后,各免疫組鴨HI抗體效價迅速升高,在加強免疫后第3周(首次免疫后第6周)達到最高值9.9 log2～11.0 log2。HI抗體效價在第8周以后開始下降。首次免疫后第16周抗體水平5.2 log2～5.9 log2之間,首次免疫后第20周以后抗體水平均在4log2以下。不同批次的疫苗免疫組各個采樣點的抗體效價t檢驗差異不顯著(P＞0.05)。

3 分析和討論

3.1 雞免疫禽流感二價苗后4周HI抗體效價均達到最高值8.8 log2～10.1 log2。各組HI抗體效價從第6周開始緩慢下降,第20周以后抗體水平衰減到4 log2以下,此時不足以抵御外界病毒侵襲[6],所以對于受威脅地區的雞,建議每4個月應免疫1次。這與陳坤永等[7]種鴿免疫禽流感疫苗后抗體維持在保護水平的持續時間相同。

3.2 鴨首次免疫后第2周 HI抗體效價達到2.7 log2～4.0 log2,第 4周達到 4.0 log2～5.6 log2,低于同期免疫雞的抗體效價。加強免疫后,免疫組鴨HI抗體效價迅速升高,首次免疫后第6周(加強免疫后3周)達到最高值9.9 log2～11.0 log2。HI抗體效價在首次免疫后第8周開始下降,第20周后抗體水平均降至4 log2以下,此時不足以抵御外界病毒侵襲[6]。所以,鴨加強免疫后才能達到較高的抗體水平,而且可靠保護期為4個月。

3.3 同時期內相應免疫組的HI抗體效價Re-4株均稍高于Re-5株,這可能與疫苗在制備過程中的抗原量配比有關。由于禽流感二價苗對雞和鴨的免疫程序不同,雞免疫該疫苗4周后抗體水平達到高峰(8.8 log2～10.5 log2)。而鴨首免該疫苗4周后抗體水平在4.0 log2～5.6 log2,加強免疫后3周抗體水平達到高峰(8.9 log2～9.4 log2),首次免疫第8周后鴨的免疫抗體水平比雞的下降得稍快,說明雞的免疫效果好于鴨,這與何長生等[8]對重組禽流感滅活疫苗(H5N1亞型,Re-1)免疫雞鴨后所作的調查結果相一致。

3.4 許多人認為禽流感病毒不易引起水禽發病,有一些水禽養殖場對禽流感的防治不太重視,只免疫1次甚至不免疫。劉超男等[9]的研究表明,禽流感病毒不僅對雞具有高致病性,而且對鴨也具有高致病性。因此,水禽養殖場不能忽視對禽流感的防控,加強疫苗免疫注射。本試驗表明,鴨1次免疫禽流感二價苗后,抗體水平難以達到有效保護范圍內,只有加強免疫后,抗體才能保持在較高水平。

3.5 由于受國家有關涉及 HPAI研究要求的限制,本次研究未進一步做攻毒保護試驗,有關重組禽流感病毒H5亞型雙價滅活疫苗(H5N1,Re-5株+Re-4株)對雞和鴨HPAI的攻毒保護情況沒有繼續進行。關于這種疫苗對雞和鴨的攻毒保護情況還有待進一步試驗研究。

[1]世界動物衛生組織.哺乳動物、禽、蜜蜂 A和B類病診斷試驗和疫苗標準手冊[M].農業部畜牧獸醫局,譯.北京:中國農業科學技術出版社,2002:197-206.

[2]Ellis T M,Leung C Y,Chow M K,et al.Vaccination of chickens against H5N1 avian influenza in the face of an outbreak interrupts virus transmission[J].Avian Pathol,2004,33(4):405-412.

[3]Garcia A,Johnson H,Kumar Srivastava D,et al.Efficacy of inactivated H5N2 influenza vaccines against lethal A/chicken/Queretaro/19/95 infection[J].Avian Disease,1998,42,248-256.

[4]Halvorson D A.Strengths and weaknesses of vaccines as a control tool[M]//Proceedings of the Fourth International Symposium on Avian Influenza.Athens Georgia,Swayne D E,Slemons R D,et al.US:Animal Health Association,1998:223-227.

[5]靳月生,姚學軍,見滿振,等.蛋雞重組高致病性禽流感H5N1(Re-1+Re-4)二價滅活疫苗免疫效果的評價[J].中國畜牧獸醫,2008,35(7):92-93.

[6]NY/T769-2004.高致病性禽流感免疫技術規范[S].

[7]陳坤永,翁良樹,張祥解,等.種鴿免疫禽流感疫苗HI抗體水平消長規律的研究[J].養禽與禽病防治,2004(7):12-13.

[8]何長生,朱良強,鄭舉,等.對重組禽流感滅活疫苗(H5N1亞型,Re-1)在家禽免疫效果方面的調研[J].中國獸藥雜志,2008,42(7):30-32.

[9]劉超男,劉明,張云,等.H5N1亞型禽流感病毒的亞致病性研究[J].中國農業科學,2006(2):412-417.