頭頸腫瘤放療后患者牙菌斑中變形鏈球菌的檢測

梁建平 黃磊 林志立 莊慶

變形鏈球菌群是人和動(dòng)物的主要致齲菌，但從人類口腔中檢出的主要是變形鏈球菌(血清型c、e、f)和遠(yuǎn)緣鏈球菌(血清型 d、g)［1，2］，尤其是血清型 c 變鏈菌檢出率最高，可達(dá)80%。本研究擬從正常人群和頭頸腫瘤放療后患者中分離、鑒定變形鏈球菌，尤其是血清型c變鏈菌，分析血清型c變鏈菌與頭頸腫瘤放療后患者齲病發(fā)生的關(guān)系。

1 材料與方法

1.1 材料 MSA培養(yǎng)基，MSBA培養(yǎng)基 ，TPY培養(yǎng)基，50%甘油TPY培養(yǎng)基，微量生化反應(yīng)試劑，生化鑒定管，兔抗變鏈菌血清型c全菌血清。

1.2 病例選擇 年齡40～60歲受試者共20人，分為無齲組(DMFT=0)10人，頭頸腫瘤放療后患者組(DMFT≥6)10人;無齲組近3個(gè)月內(nèi)未服用抗生素，口腔衛(wèi)生良好，無全身系統(tǒng)性疾病，無牙齒結(jié)構(gòu)異常，取樣牙無冠及固定橋等修復(fù)體，無根面暴露及根面齲。頭頸腫瘤放療后患者組放療結(jié)束5年以上，無腫瘤復(fù)發(fā)，近3個(gè)月內(nèi)未服用抗生素。

1.3 方法

1.3.1 菌斑收集及處理 清洗受試者唇或頰側(cè)釉質(zhì)區(qū)，隔濕，干燥，用無菌刮匙刮取釉質(zhì)光滑面菌斑，立即置于預(yù)先消毒滅菌，盛有1 ml硫乙醇鹽轉(zhuǎn)送液和玻珠，上覆液體石蠟的離心管中密封，經(jīng)旋渦混勻儀振蕩1 min，用滅菌生理鹽水作10倍系列稀釋。

1.3.2 細(xì)菌培養(yǎng) 取原液、10-1、10-2、10-3稀釋液各50 μl分別接種于 MSBA 培養(yǎng)平板，80%N2、10%H2、10%CO2，37℃培養(yǎng)48 h，進(jìn)行菌落檢測和鏡檢細(xì)菌形態(tài)學(xué)鑒定。

1.3.3 細(xì)菌生化反應(yīng) 將甘油保種變鏈菌臨床分離株分別接種于TPY培養(yǎng)平板內(nèi)，培養(yǎng)條件同細(xì)菌培養(yǎng)。收集部分菌落用微量生化板法作生化鑒定。

1.3.4 細(xì)菌血清學(xué)鑒定 轉(zhuǎn)種部分復(fù)蘇菌落于50 mlTPY液體培養(yǎng)基，增菌24 h，收集菌落細(xì)胞制備全細(xì)胞抗原。

2 結(jié)果

2.1 菌落檢測及細(xì)菌形態(tài)學(xué)鑒定 肉眼觀可見MSBA平板上典型變鏈菌落為深藍(lán)色嵌頓，質(zhì)硬，表面粗糙，突起，邊緣不齊。典型遠(yuǎn)緣鏈球菌菌落為菌落表面常覆蓋有粘液滴樣蓋帽狀物。經(jīng)革蘭色染色，油鏡(10×100)下可見變鏈菌菌落為G+小球菌，呈長鏈狀或短鏈狀，成隊(duì)或分散排列。遠(yuǎn)緣鏈球菌為G+小球菌，成對(duì)或鏈狀排列，長鏈狀居多。

2.2 細(xì)菌生化反應(yīng) 牙菌斑中檢出的血清型c變鏈菌和血清型g遠(yuǎn)緣鏈球菌主要生化特性鑒定見表1。

表1 臨床分離株微量生化反應(yīng)結(jié)果

2.3 細(xì)菌血清學(xué)鑒定 出現(xiàn)融合沉淀弧，表示為血清c型;出現(xiàn)突刺狀沉淀弧，狀似T形，為血清e(cuò)或f型;其余血清型則無此反應(yīng)。

2.4 變形鏈球菌群檢測 20例被檢菌斑中共分離出29株變形鏈球菌，15株變形鏈球菌合并遠(yuǎn)緣鏈球菌。兩組受試者牙菌斑中變形鏈球菌及血清c型變鏈菌檢出情況見表2、3。由表可見，在兩組中變形鏈球菌群細(xì)菌和變形鏈球菌培養(yǎng)陽性率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。

表2 MS在受試者菌斑中的檢出情況(例，%)

表3 變鏈菌(血清型c)在受試者菌斑中的檢出情況(例)

3 討論

早期學(xué)者使用表型、細(xì)菌素分型方法發(fā)現(xiàn)，同一個(gè)體變鏈菌在完整牙表面和齲壞病損處的定植存在著部位差異性。近代學(xué)者利用分子分型技術(shù)也證實(shí)了這一觀點(diǎn)［1］。不同牙冠部位菌斑微生物組成不同。與鄰近完整表面區(qū)比較，齲壞區(qū)變鏈菌數(shù)明顯增多，尤其在齲壞表層變鏈菌/總鏈球菌的比例最高。因此，為了避免齲壞對(duì)菌斑中MS檢出率的影響，本研究正常人群和頭頸腫瘤放療后患者組均從完整釉面收集菌斑。

本研究結(jié)果表明，變形鏈球菌的檢出率達(dá)28% ，遠(yuǎn)緣鏈球菌的檢出率為27% ，變形鏈球菌+遠(yuǎn)緣鏈球菌的檢出率為27%。分離出的變形鏈球菌以血清c型為主，占92.8%。在兩組中變形鏈球菌群細(xì)菌和變形鏈球菌培養(yǎng)陽性率無差別(P＞0.05)。說明頭頸腫瘤放療后患者易患齲病與口腔內(nèi)血清c型變形鏈球菌無關(guān)，可能與放射治療破壞涎腺，口腔自潔功能降低有關(guān)。這從另一方面說明單純以細(xì)菌數(shù)量這一因素解釋頭頸腫瘤放療后患者易患齲病尚不全面，還應(yīng)與放射治療的其他不良反應(yīng)結(jié)合起來。

［1］Loesche WJ.Role of Streptococcus mutans in human dental decay.Microbiol Rev ，1986 ，50(4)∶353-380.

［2］De Soet JJ ，van Loveren C ，Lammens AJ ，et al.Different cariogenicity between Fresh isolates of S.sobrinus and S.mutans.Caries Res，1991，25(2):116-122.