視明合劑的制備及薄層色譜鑒別

王林麗，張 瑤，龍世林，姚云杉

（1.第三軍醫(yī)大學(xué)大坪醫(yī)院藥劑科，重慶 400038； 2.第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)員旅20隊(duì)，重慶 400038）

視明合劑由柴胡、黃芩、女貞子、旱蓮草、桑葉等中藥制成，具有平肝寧絡(luò)、通脈散瘀的功效，臨床用于治療眼底血管淤阻及眼底出血、滲血等癥[1]。筆者對(duì)其制備工藝及方中黃芩等藥材的薄層色譜鑒別進(jìn)行了研究，報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

硅膠G薄層板（青島海洋化工廠分廠）；KQ-500E型醫(yī)用超聲波儀（昆山市超聲儀器有限公司）；Sartorius電子天平（賽多利斯＜北京＞科學(xué)儀器有限公司）；玻璃點(diǎn)樣毛細(xì)管（華西醫(yī)科大學(xué)儀器廠）；CS-15R型低溫離心機(jī)（美國(guó)Beckman公司）。黃芩苷對(duì)照品（批號(hào)為 110715-200212）、芍藥苷對(duì)照品（批號(hào)為110736-200629）、三七皂苷 R1對(duì)照品（批號(hào)為110745-200415）、人參皂苷Rb1對(duì)照品（批號(hào)為 0704-9912）、人參皂苷 Rg1對(duì)照品（批號(hào)為0703-9611）、歐前胡素對(duì)照品（批號(hào)為110826-200712）均由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供；視明合劑（自制，批號(hào)為090218）；水為蒸餾水，所用試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 樣品制備

處方：柴胡 20 g，黃芩 10 g，女貞子 12 g，旱蓮草 10 g，桑葉 5 g，夏枯草 20 g，桃仁 5 g，紅花 3 g，白芍 12 g，三七 5 g，白芷 12 g，生甘草2 g，加水制成1 000 mL。

制備：以上12味藥材中，柴胡用水蒸氣蒸餾法提取芳香水；白芷、黃芩、白芍、三七用65%乙醇回流提取2次，每次1 h，合并乙醇液，濾過(guò)，減壓回收乙醇，得藥液；桃仁用沸水提取；將以上藥渣與其余6味中藥合并，加水煎煮3次，每次1 h，合并煎液，濾過(guò)。濾液濃縮至適量，加入上述芳香水和藥液，混勻，加蒸餾水至規(guī)定量，攪勻，濾過(guò)，灌封，滅菌，即得。

2.2 質(zhì)量控制

2.2.1 性狀

本品為棕色液體，久置有少量沉淀。

2.2.2 薄層色譜鑒別

黃芩：取本品20 mL，加乙醚30 mL，超聲處理10 min，濾過(guò)；取下層液揮去乙醚，加甲醇30 mL，超聲30 min，濾過(guò)，取上層液蒸干，殘?jiān)铀?5 mL使溶解；用HCl調(diào)pH至1～2，用乙酸乙酯振搖提取2次，每次20 mL，合并乙酸乙酯提取液，蒸干，殘?jiān)蛹状? mL溶解，離心取上清液，即得供試品溶液。精密稱取黃芩苷對(duì)照品，加甲醇制成每1 mL含2 mg黃芩苷的溶液，作為對(duì)照品溶液。按處方比例取除黃芩外的其余藥材一定量，照視明合劑制備方法制成一定體積的溶液，取該溶液20 mL，按供試品溶液制備方法制成2 mL缺黃芩的陰性對(duì)照品溶液。照薄層色譜法[2005年版《中國(guó)藥典（一部）》附錄ⅥB]試驗(yàn)，吸取上述溶液各2～5 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水（5∶3∶1∶1）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以2%三氯化鐵乙醇溶液。結(jié)果供試品溶液色譜中，在與對(duì)照品溶液色譜相應(yīng)位置上顯相同顏色的斑點(diǎn)，而陰性對(duì)照品溶液色譜中無(wú)此斑點(diǎn)（圖1 A）。

白芷：取本品30 mL，分別用50，20，20 mL的乙醚提取3次，合并乙醚液，蒸干，殘?jiān)右宜嵋阴? mL溶解，離心取上清液，即得供試品溶液。稱取2 g白芷對(duì)照藥材，加入95%的乙醇20 mL，超聲處理20 min，濾過(guò)，濾液蒸干，加入95%的乙醇1 mL溶解，作為對(duì)照藥材溶液。精密稱取歐前胡素對(duì)照品1 mg，加甲醇制成每1 mL含歐前胡素1 mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。按處方比例取除白芷外的其余藥材一定量，照視明合劑制備方法制成一定體積的溶液，取該溶液30 mL，按供試品溶液制備方法制成2 mL缺白芷的陰性對(duì)照品溶液。照薄層色譜法[2005年版《中國(guó)藥典（一部）》附錄ⅥB]試驗(yàn)，吸取上述溶液各2～5 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以氯仿-甲醇（9∶1）為展開劑，置氨蒸氣飽和的展開缸中，展開，取出，晾干，置紫外燈下檢視。結(jié)果供試品溶液色譜中，在與對(duì)照品溶液色譜相應(yīng)位置上顯相同顏色的斑點(diǎn)，而陰性對(duì)照品溶液色譜中無(wú)此斑點(diǎn)（圖1 B）。

白芍：取本品10 mL及95%的乙醇40 mL于錐形瓶中，超聲20 min，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)铀?0 mL使溶解，用乙醚提取2次，每次20 mL，分取水層，加水飽和的正丁醇提取2次，每次20 mL，合并正丁醇液，蒸干，殘?jiān)右掖? mL溶解，離心取上清液，即得供試品溶液。另取芍藥苷對(duì)照品，加甲醇制成每1 mL含1 mg芍藥苷的溶液，作為對(duì)照品溶液。按處方比例取除白芍外的其余藥材一定量，照視明合劑制備方法制成一定體積的溶液，取該溶液10 mL，按供試品溶液制備方法制成1 mL缺白芍的陰性對(duì)照品溶液。照薄層色譜法[2005年版《中國(guó)藥典（一部）》附錄ⅥB]試驗(yàn)，吸取上述溶液各2～5 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以氯仿-乙酸乙酯 -甲醇 -濃氨試液（8∶1∶4∶1）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%香草醛硫酸溶液，置105℃烘箱中加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。結(jié)果供試品溶液色譜中，在與對(duì)照品溶液色譜相應(yīng)位置上顯相同顏色的斑點(diǎn)，而陰性對(duì)照品溶液色譜中無(wú)此斑點(diǎn)（圖1 C）。

三七：取本品20 mL，加乙醚提取2次，每次20 mL，棄去乙醚層，藥液層用水飽和的正丁醇提取2次，每次20 mL，合并正丁醇液，蒸干，殘?jiān)? mL甲醇溶解，離心取上清液，即得供試品溶液。取三七對(duì)照藥材30 g，用65%的乙醇回流提取30 min，揮去乙醇，滅菌后按供試品溶液制備方法制得對(duì)照藥材溶液。取三七皂苷R1、人參皂苷Rb1，人參皂苷Rg1各1 mg，加甲醇分別制成質(zhì)量濃度為1 g/L的三七皂苷R1對(duì)照品溶液、人參皂苷Rb1對(duì)照品溶液和人參皂苷Rg1對(duì)照品溶液。按處方比例取除三七外的其余藥材一定量，照視明合劑制備方法制成一定體積的溶液，取該溶液20 mL，按供試品溶液制備方法制成1 mL缺三七的陰性對(duì)照品溶液。照薄層色譜法[2005年版《中國(guó)藥典（一部）》版附錄ⅥB]試驗(yàn)，吸取上述溶液各2～5 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以氯仿 -甲醇 -水（13∶7∶2）于10℃以下放置分層的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，置105℃烘箱中加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。結(jié)果供試品溶液色譜中，在與對(duì)照品溶液色譜相應(yīng)位置上顯相同顏色的斑點(diǎn)，而陰性對(duì)照品溶液色譜中無(wú)此斑點(diǎn)（圖 2）。

3 討論

柴胡含有揮發(fā)性成分，故用水蒸氣蒸餾法制備芳香水；三七、黃芩、白芍主要含皂苷類成分，分別用65%的乙醇為溶劑提取；桃仁主要含有苦杏仁苷，通過(guò)高溫處理可使苦杏仁苷酶滅活，因此在提取開始時(shí)即加入沸水，以利于苦杏仁苷成分的保留。本研究結(jié)果表明，薄層色譜法鑒別視明合劑中的黃芩、白芷、白芍、三七，專屬性強(qiáng)，靈敏度高，重現(xiàn)性好，檢出斑點(diǎn)清楚，為視明合劑的質(zhì)量控制提供了可靠的實(shí)驗(yàn)室依據(jù)。

[1]王林麗，孟德勝，陳 蕓.視明口服液的制備及薄層色譜鑒別[J].中國(guó)藥業(yè)，2005，14（11）:47-48.