反相離子對高效液相色譜法同時測定非索偽麻緩釋片中兩組分含量

李 穎

（安徽省中醫院，安徽 合肥 230031）

非索偽麻緩釋片是鹽酸非索非那定與鹽酸偽麻黃堿的復方制劑。鹽酸非索非那定是組胺H1受體拮抗劑，屬無鎮靜作用的抗組胺藥物，用于季節性過敏性鼻炎及慢性特發性蕁麻疹，具有很好的臨床治療效果[1-2]。鹽酸偽麻黃堿具有選擇性收縮血管作用，可收縮鼻腔、鼻竇及上呼吸道黏膜血管，消除組織水腫和充血，使呼吸道暢通。二者合用，可有效治療慢性特發性蕁麻疹和季節性過敏性鼻炎。兩者的復方緩釋制劑國外已上市，筆者參考了相關文獻[3]，建立了反相離子對高效液相色譜法，用于同時測定鹽酸非索非那定和鹽酸偽麻黃堿含量，現報道如下。

1 儀器與試藥

Shimadzu LC-10AT高效液相色譜儀（日本島津），Shimadzu SPD-10AVP檢測器（日本島津）。非索偽麻緩釋片（研制時自制）；非索非那定對照品（批號為100852-200601）、鹽酸偽麻黃堿對照品（批號為171237-200304）均由中國藥品生物制品檢定所提供；甲醇為色譜純，其他試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件與系統適用性試驗

色譜柱：Shim-pack VP-ODS 柱（150 mm ×4.6 mm，5 μm）；流動相：甲醇-0.05 mol/L磷酸二氫鉀-十二烷基硫酸鈉（70∶30∶0.03，用磷酸調 pH 至 3.0）；檢測波長：210 nm；柱溫：30 ℃；流速：1.0 mL/min；進樣量：20 μL；靈敏度：0.100 0 AUFS。在此色譜條件下，各組分的分離效果良好，分離度大于10.0，理論塔板數以鹽酸偽麻黃堿計不低于3 000，色譜圖見圖1。

圖1 高效液相色譜圖

2.2 溶液制備

精密稱取鹽酸非索非那定對照品30.0 mg，鹽酸偽麻黃堿對照品60.0 mg，置50 mL量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對照品貯備液。精密稱取樣品細粉適量（約相當于鹽酸偽麻黃堿120 mg、鹽酸非索非那定60 mg），置乳缽中，加流動相適量，研磨，并用流動相分次轉移至100 mL量瓶中，超聲處理使鹽酸偽麻黃堿與鹽酸非索非那定溶解，放冷至室溫，加流動相稀釋至刻度，搖勻，濾過，精密量取續濾液5 mL，置25 mL量瓶中，加流動相稀釋至刻度，作為供試品溶液。

2.3 方法學考察

線性關系考察：分別精密量取對照品貯備液0.1，0.2，0.5，1.0，2.0 mL置10 mL量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，即得系列質量濃度的對照品溶液，精密量取20 μL，進樣測定。以質量濃度為橫坐標、峰面積為縱坐標繪制標準曲線，得非索非那定的回歸方程Y=55 942.78 X+86 409.14，r=0.999 9（ n=5）；鹽酸偽麻黃堿的線性方程 Y=34 848.78 X+187 045.70，r=0.999 9（n=5）。結果表明，鹽酸非索非那定和鹽酸偽麻黃堿質量濃度分別在6.01～120.20 mg/L和12.08～241.68 mg/L內與峰面積呈良好的線性關系。

精密度試驗：取對照品溶液，重復進樣6次，記錄峰面積。結果鹽酸非索非那定和鹽酸偽麻黃堿峰面積的 RSD分別為0.76%和0.52%（n=6）。

穩定性試驗：取同一供試品溶液，分別于 0，2，4，6，8 h 時進樣測定，記錄峰面積。結果鹽酸非索非那定和鹽酸偽麻黃堿的 RSD分別為0.89%和0.82%（n=5），表明供試品溶液在8 h內穩定。

重現性試驗：取同一批樣品，按含量測定項下方法配制供試品溶液，依法測定含量。結果非索非那定的平均標示含量為99.77%，RSD為0.50%（n=6）；鹽酸偽麻黃堿的平均標示含量為99.99%，RSD 為 0.38%（n=6）。

加樣回收試驗：按照模擬處方比例分別精密加入對照品及輔料適量，按含量測定項下方法制成低、中、高濃度各3份共9份的溶液，取樣測定含量并計算回收率[4]。結果見表1。

表1 加樣回收試驗結果（n=9）

2.4 樣品含量測定

取供試品溶液20 μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖。另取經105℃干燥至恒重的鹽酸偽麻黃堿與鹽酸非索非那定對照品適量，同法測定，按外標法用峰面積計算供試品中鹽酸非索非那定與鹽酸偽麻黃堿的標示百分含量。結果批號為20060224，20060325，20060417的3批樣品中，鹽酸非索非那定的標示百分含量分別為100.34%，99.75%，100.32%，鹽酸偽麻黃堿的標示百分含量分別為99.93%，99.77%，98.81%。

3 討論

曾取非索非那定對照品與鹽酸偽麻黃堿對照品適量，分別用流動相溶解，并制成每1 mL分別含非索非那定30 μg和鹽酸偽麻黃堿15 μg的溶液，在200～400 nm波長范圍內測定吸收光譜。結果顯示鹽酸偽麻黃堿紫外吸收較弱，僅在210 nm波長附近有最大吸收，而非索非那定的最大吸收波長在220 nm附近。為了能同時檢測非索非那定與鹽酸偽麻黃堿，故選用210 nm作為本品的檢測波長。

考察0.05 mol/L磷酸二氫鉀-甲醇（30∶70）作為流動相時，對比了加與不加離子對試劑十二烷基硫酸鈉對色譜分離的影響，以選擇最佳流動相條件。結果顯示不加離子對試劑，非索非那定的出峰時間和溶劑峰接近，且兩者不能有效分離，影響準確定量；加入十二烷基硫酸鈉，則可增加非索非那定的保留性，使樣品不至于過快洗脫，與溶劑峰達到有效分離。

本試驗結果表明，反相離子對高效液相色譜法可以同時測定非索偽麻緩釋片中鹽酸非索非那定和鹽酸偽麻黃堿的含量，且快速、簡便、靈敏、準確。

[1]Bunnag C，Jareoncharsri P，Tunsuriyawong P，et al.A non-comparative trial of the efficacy and safety of fexofenadine for treatment of perennial allergic rhinitis[J].Asian Pac J Allergy Immunol，2000，18（3）：127-133.

[2]Nelson HS，Reynolds R，Mason J.Fexofenadine HCl is safe and effective for treatment of chronic idiopathic urticaris[J].Ann Allergy Astma Immunol，2000，84（5）：517-522.

[3]王 琳，張天虹，江榮高.HPLC法同時測定非索偽麻緩釋雙層片中鹽酸非索非那定與鹽酸偽麻黃堿的含量[J].沈陽藥科大學學報，2003，20（4）：266-271.

[4]Maggio RM，Castellano PM，Vignaduzzo SE，et al.Alternative and improved method for the simultaneous determination of fexofenadine and pseudoephedrine in their combined tablet formulation[J].J Pharm Biomed Anal，2007，45（5）:804-810.