乳腺癌外周血微轉移的臨床病理意義

李秀娟,李 彤,孫中華

(1.吉林省醫學期刊社,吉林長春130061;2.吉林大學第二醫院;3.吉林大學第一醫院)

目前很多學者認為乳腺癌早期就是一種全身性疾病,血行轉移可以發生在疾病的早期階段[1]。本研究采用流式細胞術檢測乳腺癌患者外周血中的腫瘤細胞含量(Peripheral blood cancer cell,PBCC),以了解腫瘤微小轉移情況。

1 材料與方法

1.1 研究對象 均為女性。住院患者77例,年齡23-75歲,中位年齡48歲,其中浸潤性導管癌41例,低分化腺癌9例,單純癌6例,髓樣癌5例,浸潤性小葉癌16例;乳腺良性腫瘤18例,年齡20-69歲,中位年齡45歲;健康體檢者 20例,年齡21-65歲,中位年齡39歲。所有患者均經細胞學或組織病理學證實,并且均未接受任何治療。

1.2 試劑與儀器

CD45-PE購于 Immunotech公司,Anti-Cytok-eratin-FITC購于 Dako公司。FASCalibur流式細胞儀(美國BD公司)。

1.3 方法

采集各組外周血樣本 1 ml,抗凝,加入 30 μ l CD45-PE,震蕩混勻后,室溫放置30 min,加入OptilyseC裂解液2 ml,裂解至透明,300 rpm/min,離心5 min,將分離出的白細胞懸浮于0.025%Triton X-100溶液5 min,緩沖液洗 1 次 ,懸浮于100 μ l Anti-Cytokeratin-FITC,室溫30 min后加入緩沖液洗滌2次,最后加入0.5 ml的1%多聚甲醛固定,上機測定,每例樣本檢測1×106-3×106個細胞,結果用每1/106個細胞中CK+/CD45-細胞數來表示外周血腫瘤細胞含量,未檢測到腫瘤細胞為陰性。正常對照組、乳腺良性腫瘤組樣本作對照,乳腺癌手術標本用機械法制成單細胞,稀釋后摻入正常外周血中作為陽性對照。

1.4 統計學分析

應用SPSS10.0軟件包進行統計學分析,兩樣本率的比較用 χ2檢驗,兩樣本均數的比較采用 t檢驗,P＜0.05有統計學意義。

2 結果

2.1 乳腺癌外周血腫瘤細胞含量與年齡和腫瘤大小的關系

正常對照組和乳腺良性腫瘤組外周血均未發現腫瘤細胞,在100 μ l健康人外周血中摻入20個腫瘤細胞的陽性對照,共檢測出1.7×105個細胞,其中CK+/CD45-的腫瘤細胞為17個。各組年齡和腫瘤大小的乳腺癌外周血腫瘤細胞含量差異無統計學意義,結果見表1。

表1 乳腺癌外周血中腫瘤細胞含量與年齡、腫瘤大小的關系

2.2 乳腺癌外周血腫瘤細胞含量與TNM分期、病理類型和有無淋巴結轉移的關系

由于病理類型中低分化腺癌、單純癌、髓樣癌例數較少,未進行與病理類型的相關性統計分析,只進行了浸潤性導管癌和浸潤性小葉癌的分析,這也是臨床較常見的病理類型。Ⅲ+Ⅳ期腫瘤細胞含量和陽性例數均高于Ⅰ+Ⅱ期,差異有統計學意義;N1高于N0,差異有統計學意義;而浸潤性導管癌和浸潤型小葉癌之間無統計學差異。結果見表2。

表2 乳腺癌外周血中腫瘤細胞含量與TNM分期和病理類型的關系

3 討論

微轉移是指常規病理學檢查不能檢測到的存在于非血液系統惡性腫瘤患者體內的微小轉移灶。常規的病理檢查無法發現外周血的微轉移,尚不能滿足乳腺癌個體化治療的需要。有報道[2]采用免疫組化RT-PCR定量PCR等方法檢測腫瘤患者外周血微轉移,存在著易污染、特異性低無法精確定量等問題,限制了其在臨床中的應用[3]。流式細胞術可以對單細胞進行分析和分選,可以快速定量檢測[4、5]。本研究采用細胞角蛋白和CD45雙色免疫標記技術,多參數流式細胞儀檢測外周血孤立腫瘤細胞含量。Ⅲ+Ⅳ期陽性率和腫瘤細胞含量高于Ⅰ+Ⅱ期,差異有統計學意義(P＜0.05),能夠反映腫瘤負荷。有淋巴結轉移的陽性率和腫瘤細胞含量高于無淋巴結轉移,差異有統計學意義(P＜0.05),值得注意的是34.3%的腋窩淋巴結陰性患者外周血中仍發現大量腫瘤細胞,可見腫瘤細胞血行微轉移為判斷病情、指導治療、動態監測復發提供了更準確的依據,較腋淋巴結更能反映腫瘤細胞的全身播散狀況。據報道有近30%腋淋巴結陰性患者于術后5年內復發、轉移而導致死亡[6],這是否意味著本研究中腋窩淋巴結陰性但發生外周血微轉移的這部分患者,會在幾年后復發或轉移,仍有待進一步隨訪研究。

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