阿奇霉素膠囊人體生物等效性研究

歐明洪，何海霞，賈旭明（1.四川達州市中心醫院藥學部，達州市 65000；2.重慶醫科大學附屬第一醫院臨床藥理研究室，重慶市 400016；.四川達州市食品藥品檢驗所，達州市 65000）

阿奇霉素（Azihromycin）[1]為半合成的十五元大環內酯類抗生素，其游離堿供口服，乳糖酸鹽供注射。本品的抗菌譜與紅霉素相近，作用較強，臨床上用于敏感微生物所致的呼吸道、皮膚和軟組織感染。為評價四川科創制藥有限公司研制的2種規格的阿奇霉素膠囊在健康男性受試者的藥動學特征及與杭州愛大制藥有限公司生產的阿奇霉素膠囊是否等效，本文采用微生物法測定其血藥濃度，并對其藥動學和生物等效性進行了研究，現報道如下。

1 材料

指示菌：藤黃微球菌（編號：28001）；受試制劑1：阿奇霉素膠囊（四川科創制藥有限公司,規格：每粒0.25 g，批號：20030605，含量：99.83%）；受試制劑2：阿奇霉素膠囊（四川科創制藥有限公司,規格：每粒0.125g，批號：20030615，含量：92.8%）；參比制劑：阿奇霉素膠囊（杭州愛大制藥有限公司，規格：每粒0.25g，批號：040611；批準文號：國藥準字H10970148）；阿奇霉素標準品（中國藥品生物制品檢定所出品，購于重慶市藥品檢驗所，批號：130352-200203，規格：946 IU·mg－1）。

2 方法

2.1 研究對象

21名男性健康志愿者，漢族，平均年齡（23.6±2.27）歲（21～30歲）；平均體質量（60.2±5.80）kg（52～75 kg）；平均身高（169.7±5.87）cm（160～182 cm）。試驗前所有受試者肝功、腎功、血壓、心電圖檢查均正常。本試驗經四川達州市中心醫院醫學倫理委員會審批通過，受試者于充分了解試驗內容后志愿簽署知情同意書。

2.2 給藥方案

將21名受試者采用拉丁方設計，隨機分為A、B、C組，每組7人。試驗前禁食12 h后，于次日晨8時，A、B、C組受試者分別交叉空腹吞服500 mg[2]受試制劑1、受試制劑2或參比制劑（200 mL溫開水服藥）。服藥當日統一進標準餐。受試期間禁止大量活動，禁止吸煙、飲酒及含酒精、咖啡因類飲料，試驗期間禁用一切非試驗藥物。

2.3 血樣采集

A、B、C組受試者分別空腹吞服500 mg受試制劑1、受試制劑2或參比制劑（Ⅰ周期）后0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、6.0、8.0、12、24、48、72、96、144 h時抽取前臂靜脈血 3.0 mL，分離血清，低溫保存（－20℃），待測。間隔2周后B、C、A組受試者分別空腹吞服500 mg受試制劑1、受試制劑2或參比制劑（Ⅱ周期），按上述方法采取靜脈血。再間隔2周后，C、A、B組受試者分別空腹吞服500 mg受試制劑1、受試制劑2或參比制劑（Ⅲ周期），按上述方法采取靜脈血（注：文獻報道[2，3]，本品tmax為2 h左右，t1/2為48 h左右，根據《中國藥典》2005年版“藥物制劑生物利用度和生物等效性試驗指導原則”的要求，我們在達峰時間前取樣3～4個點，在峰時間后取樣8～10個點，取樣持續到5個半衰期以上或終末濃度為峰濃度的10－1～20－1）。

2.4 血清樣品檢測（微生物杯碟法）

2.4.1 標準液的配制：準確稱取阿奇霉素標準品，用無水乙醇溶解后加緩沖液（pH7.8）稀釋成1 mg·mL－1標準貯備液，置－40℃儲存備用。

2.4.2 指示菌 ：選用藤黃微球菌（編號28001）[2，3]。

2.4.3 培養基Ⅱ號[4]：蛋白胨6 g，牛肉浸膏1.5 g，酵母浸膏6 g，葡萄糖1 g，瓊脂20 g，蒸餾水1000 mL，調pH 7.8～8.0，在115℃滅菌30 min后備用。

2.4.4 測定方法：參照文獻[5]，將培養基Ⅱ號熔化后冷至約50℃，加入適量藤黃微球菌菌液，混勻，于超凈工作臺上倒入經高壓滅菌的平皿中（12 mL/皿），冷凝后放入不銹鋼小杯，每個血樣分別加入2個小杯，同時另放2個小杯，內加標準液。靜置相同時間后，置37℃孵育14～16 h，取出，以游標卡尺測量抑菌圈直徑，按標準曲線計算血液標本中的藥物濃度。

2.5 方法學研究[6]

2.5.1 標準曲線的制備及最低檢測濃度：以正常人血清配制系列阿奇霉素標準液（濃度為 2.4、1.2、0.6、0.3、0.15、0.075、0.038、0.019、0.009和0.005 μg·mL－1），組間距1∶2，中心濃度為0.1 μg·mL－1，用磷酸鹽緩沖液（pH 7.8）和正常人血清各半作為稀釋液。測定抑菌圈，以血藥濃度的對數為縱座標（Y），菌圈的直徑為橫座標（X）進行直線回歸，得標準曲線方程Y＝0.12657X－0.30464（r＝9988））。結果表明，阿奇霉素檢測濃度在0.005～2.4 μg·mL－1濃度范圍內線性關系良好。本法最低檢測濃度為0.005 μg·mL－1。

2.5.2 回收率試驗：按照“2.5.1”項下方法，于空白血清中加入0.6、0.075、0.01875、0.005 μg·mL－14種濃度的阿奇霉素標準液，各配制若干份，按“2.4.4”項下方法操作，評價本法測定血清阿奇霉素含量的回收率。結果，4種濃度回收率分別為（109.29±9.44）%、（100.81±6.98）%、（110.06±3.24）%、（99.92±3.72）%。

2.5.3 精密度試驗：按照“2.5.1”項下方法，于空白血清中加入0.6、0.075、0.01875、0.005 μg·mL－14種濃度的阿奇霉素標準液，各配制若干份，同日內按“2.4.4”項下方法分別測定其抑菌圈，得出日內相對標準差（RSD），并于日間按“2.4.4”項下方法測定并計算出日間RSD。精密度試驗結果見表1。

表1 精密度試驗結果（n＝6）Tab 1 Results of precision test（n＝6）

2.5.4 凍融試驗：將含藥血清反復冷凍（－20℃）、溶解，1周內測定4次，結果見表2。

表2 凍融試驗結果（n＝4）Tab 2 The result of frozen-melt test（n＝4）

3 結果

3.1 藥-時曲線

21名受試者交叉口服受試制劑1、受試制劑2或參比制劑各500 mg后的平均藥-時曲線見圖1。

3.2 數據處理

采用三交叉試驗設計生物利用度計算和生物等效性分析程序（BIO3）計算機軟件，計算各個體的藥動學參數，Cmax、tmax以實測值計算，AUC按梯形面積法計算。取值范圍0～144 h。采用各受試者的受試制劑與參比制劑的AUC0～144分別計算相對生物利用度（F），有關藥動學參數見表3。

圖1 受試者口服3種制劑后平均藥-時曲線Fig 1 Mean plasma concentration-time curves of 3 kinds of preparations

3.3 生物等效性評價

對3組的AUC、Cmax數據均經對數轉換后進行方差分析表明，受試制劑1、試制劑2、參比制劑間均無差異；90%置信區間見表4，并作出生物等效性判定。另用非參數統計Krus-kall-Wallis法，判定tmax均無差異。

表3 受試者口服3種制劑后的藥動學參數（n＝21）Tab 3 Comparison of pharmacokinetics parameters of three preparations（n＝21）

由表4判定結果：（1）受試制劑1的AUC0～144、Cmax與參比制劑的 AUC0～144、Cmax均生物等效；（2）受試制劑 2 的AUC0～144、Cmax與參比制劑的AUC0～144、Cmax均生物等效。

4 討論

表4 阿奇霉素膠囊拉丁方設計AUC、Cmax及其90%%置信區間Tab 4 AUC，Cmaxand their 90%%confidence interval of azihromycin capsule in Latin square design

阿奇霉素的體內測定方法已有文獻報道[2，3，6]，有高效液相色譜（HPLC）-紫外法、HPLC-安培電化學檢測法、微生物法等。本文在現有試驗條件下，以《中國藥典》為依據，采用經典微生物法測定血清中阿奇霉素的濃度，經方法學研究驗證，回收率、日內及日間精密度、靈敏度均能滿足臨床藥動學及生物等效性研究的要求。

文獻報道，阿奇霉素因在其配基上的9位引入了一個甲基化的氮原子，使之具有獨特的藥動學特點及廣譜的抗菌活性，即組織選擇性高、半衰期長、對酸穩定、口服比較容易吸收、生物利用度高，因此深受廠家、患者的青睞。本研究結果顯示，21例受試者單劑量口服500 mg阿奇霉素膠囊后，2種規格的阿奇霉素膠囊與參比膠囊在人體內吸收、分布、消除較為一致，受試制劑1、受試制劑2相對于參比制劑的生物利用度分別為（102.73±15.63）%和（103.17±13.64）%，經統計學分析證明，兩兩間均無顯著性差異（P＞0.05），具有生物等效性。本試驗為四川科創制藥有限公司研制的2種規格的阿奇霉素膠囊臨床應用提供了依據。

[1]陳新謙，金有豫，湯 光主編.新編藥物學[M].第15版.北京：人民衛生出版社，2005：1、90.

[2]張 青，郭蓓寧，張嬰元.阿奇霉素臨床藥代動力學研究[J].中國臨床藥理學雜志，1996，12（2）：89.

[3]賈琳靜，喬海靈，張莉蓉，等.阿奇霉素顆粒劑的健康人體藥物動力學和相對生物利用度[J].河南醫科大學學報，2001，36（6）：712.

[4]國家藥典委員會編.中華人民共和國藥典（二部）[S].2005年版.北京：化學工業出版社，2005：79、附錄Ⅺ.

[5]張治錟編著.抗生素藥品檢驗[M].北京：人民衛生出版社，1987：34.

[6]關倩明，李子熊，張秋蓮.HPLC法測定阿奇霉素的含量[J].藥物分析雜志，1998，18（5）:300.