益氣活血軟堅(jiān)解毒方對(duì)荷瘤小鼠抑瘤作用及對(duì)生存期影響研究*

李東濤，吳志奎，呂新霞，陳玉英，裴迎霞，祁 鑫，孫桂芝

（1.濟(jì)南軍區(qū)青島第一療養(yǎng)院中醫(yī)科，青島 266071；2.中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院廣安門醫(yī)院腫瘤科，北京 100053）

益氣活血軟堅(jiān)解毒方對(duì)荷瘤小鼠抑瘤作用及對(duì)生存期影響研究*

李東濤1，吳志奎2，呂新霞2，陳玉英2，裴迎霞2，祁 鑫2，孫桂芝2

（1.濟(jì)南軍區(qū)青島第一療養(yǎng)院中醫(yī)科，青島 266071；2.中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院廣安門醫(yī)院腫瘤科，北京 100053）

［目的］研究益氣活血軟堅(jiān)解毒（YHRJ）方對(duì)荷瘤小鼠生存期的影響。［方法］抑瘤作用觀察：荷S180腹水瘤昆明鼠、荷H22昆明鼠與615小鼠，造模后隨機(jī)分成對(duì)照組、CTX（環(huán)磷酰胺）組、YHRJ等效劑量組、YHRJ高劑量組、YHRJ等效劑量組+CTX或順鉑（DDP）組、YHRJ高劑量組+CTX（或DDP）組，第2天開始用藥，于第13天拉頸處死動(dòng)物，取出瘤組織，稱質(zhì)量。生存期觀察：荷H22昆明鼠，截尾期為對(duì)照組出現(xiàn)第1只動(dòng)物死亡為止，記錄小鼠存活時(shí)間。［結(jié)果］1）對(duì)荷S180昆明鼠：各用藥組腫瘤明顯縮小，YHRJ高劑量抑制率為64.22%，與生理鹽水及YHRJ等效劑量組相比，差異顯著；YHRJ高劑量+CTX組抑制率為80.10%，高于YHRJ等效劑量組及CTX組。2）對(duì)荷H22昆明鼠：除YHRJ等效劑量組外，其余各組抑瘤率均超過30%，抑瘤作用明顯（P<0.05），YHRJ高劑量組抑瘤率為51.36%。優(yōu)于其他各組。3）對(duì)荷H22615小鼠腫瘤：YHRJ等效劑量抑瘤率為47.15%，YHRJ高劑量+DDP組抑瘤率為80.60%，說明中藥對(duì)DDP有增效作用。4）對(duì)荷H22昆明鼠生存率影響：YHRJ高劑量組及各加DDP組荷瘤小鼠生存期及中位生存天數(shù)明顯延長(zhǎng)，生存率明顯提高有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。［結(jié)論］益氣活血軟堅(jiān)解毒方對(duì)小鼠S180腹水瘤、H22肝細(xì)胞癌腫瘤生長(zhǎng)有抑制作用，并明顯延長(zhǎng)荷H22昆明鼠生存期。

益氣活血軟堅(jiān)解毒方；肝癌；抑瘤率；生存期；實(shí)驗(yàn)研究

肝癌的治療歷來是中醫(yī)學(xué)研究的重點(diǎn)與難點(diǎn)。孫桂芝教授經(jīng)過數(shù)十年的潛心研究，根據(jù)傳統(tǒng)中醫(yī)理論，從中醫(yī)整體觀出發(fā)，針對(duì)肝癌的病因病機(jī)擬訂了益氣活血軟堅(jiān)解毒(抗癌)方，注重調(diào)動(dòng)機(jī)體的抗病能力，調(diào)理氣血，培補(bǔ)臟器，協(xié)同化療，增效減毒，長(zhǎng)期服用，有穩(wěn)定瘤體及減少腫瘤轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)作用。為了深入研究其作用機(jī)制，本課題從體內(nèi)抑瘤實(shí)驗(yàn)及對(duì)生存期影響兩個(gè)方面研究其作用效果。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物 昆明鼠120只，雄性，體質(zhì)量（20±1）g，二級(jí)動(dòng)物，購自中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究所。615小鼠 60 只，雄性，體質(zhì)量（18±2）g，購自中國(guó)藥物及生制品檢定所，清潔級(jí)。

1.2 瘤株 小鼠S180腹水瘤株與H22肝癌瘤株，由廣安門醫(yī)院腫瘤實(shí)驗(yàn)室提供。

1.3 藥物 益氣活血軟堅(jiān)解毒（YHRJ）方水煎劑：組方為生黃芪、炒白術(shù)、三七、水紅花子、藤梨根、凌霄花、炮山甲、白花蛇舌草等，常規(guī)水提取，生藥濃度3.4 kg/L，4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

陽性對(duì)照藥環(huán)磷酰胺（CTX）：南通精華制藥有限公司產(chǎn)品，用生理鹽水配成4 g/L的溶液，遮光保存。

陽性對(duì)照藥順鉑（DDP）：山東齊魯制藥廠產(chǎn)品，用生理鹽水配成0.1 g/L的溶液，遮光保存。

1.4 動(dòng)物模型制備 S180腹水瘤：取生長(zhǎng)狀態(tài)良好接種第7天的荷S180腹水瘤源小鼠，拉頸處死，在嚴(yán)格無菌條件下吸出腹水，生理鹽水洗滌，配成1×1010個(gè)/L單細(xì)胞懸液，在每只昆明鼠右腋部皮下接種0.2mL。H22肝癌：取生長(zhǎng)狀態(tài)良好接種第7天的荷H22肝癌源小鼠，拉頸處死，在嚴(yán)格無菌條件下取出瘤組織，除去血塊及壞死組織，用機(jī)械剪碎法做成1×1010/L單細(xì)胞懸液，在每只昆明鼠或615小鼠右腋部皮下接種0.2mL。

1.5 分組及用藥 對(duì)荷S180昆明鼠腫瘤生長(zhǎng)抑制作用觀察分組及用藥方法：造模后隨機(jī)分成6組，每組10只。1）對(duì)照組：每日灌服生理鹽水0.2mL。2）CTX組：按照80mg/kg劑量給小鼠腹腔注射，分2次，1周用完，以下各加用CTX者用法與此同。3）YHRJ等效劑量組（29.67 g/k g，約為人用量的10倍劑量）。4）YHRJ高劑量組（約為人用量的20倍劑量）。5）YHRJ等效劑量組+CTX組。6）YHRJ高劑量組+CTX組。

對(duì)荷H22昆明鼠與615小鼠腫瘤生長(zhǎng)抑制作用觀察分組與用藥方法：造模后隨機(jī)分成6組，每組10 只。1）對(duì)照組：每日灌服生理鹽水 0.2mL。2）DDP組：按照lmg/kg劑量給小鼠腹腔注射0.2mLDDP，1 次/d，連用7 d。3）YHRJ等效劑量組（29.67 g/k g，約為人用量的10倍劑量）。4）YHRJ高劑量組（人用量的20倍劑量）。5）YHRJ等效劑量組+DDP組。6）YHRJ高劑量組+DDP組。

對(duì)生存期影響分組與用藥方法：與荷H22昆明鼠腫瘤生長(zhǎng)抑制作用觀察同。

1.6 實(shí)驗(yàn)周期 抑瘤率觀察：造模第2天開始用藥，于第13天拉頸處死動(dòng)物，取出瘤組織，稱質(zhì)量。

生存期觀察：造模第2天開始用藥，模型組和YHRJ組給藥直至對(duì)照組出現(xiàn)第一只動(dòng)物死亡為止。記錄小鼠存活時(shí)間，計(jì)算各組平均生存時(shí)間和中位生存時(shí)間，按下列公式計(jì)算生命延長(zhǎng)率：生命延長(zhǎng)率=（治療組平均生存天數(shù)-模型組平均生存天數(shù)）/模型組平均生存天數(shù)×100%

1.7 統(tǒng)計(jì)方法 抑瘤率統(tǒng)計(jì)用SPSS10.0軟件對(duì)不同組別的數(shù)據(jù)進(jìn)行多組之間比較方差分析。生存期統(tǒng)計(jì)用SPSS10.0進(jìn)行Kaplan-Meier生存分析。

2 結(jié)果

2.1 益氣活血軟堅(jiān)解毒方對(duì)荷S180昆明鼠腫瘤生長(zhǎng)抑制作用觀察 見表1。

表1 益氣活血軟堅(jiān)解毒方對(duì)荷S180昆明鼠腫瘤生長(zhǎng)抑制作用觀察(±s)Tab.1 Inhibitory effecton tumor grow th in S180-bearingm ice(S180)(±s)

表1 益氣活血軟堅(jiān)解毒方對(duì)荷S180昆明鼠腫瘤生長(zhǎng)抑制作用觀察(±s)Tab.1 Inhibitory effecton tumor grow th in S180-bearingm ice(S180)(±s)

注：與生理鹽水組比較，*P<0.001;與YHRJ等效劑量組比較，▲P<0.05，#P<0.001。

組別生理鹽水組YHRJ等效劑量組YHRJ高劑量組YHRJ等效劑量+CTX組YHRJ高劑量+CTX組CTX組n 抑瘤率(%)42.31 64.22 79.82 80.10 71.75 10 10 10 10 10 10瘤質(zhì)量（g）2.421±0.923 1.397±0.457*0.865±0.542*▲0.489±0.185*#0.482±0.186*#0.682±0.294*▲

結(jié)果顯示，與生理鹽水組比較，各用藥組腫瘤明顯縮小，YHRJ高劑量抑制率為64.22%，與生理鹽水及YHRJ等效劑量組相比，差異顯著YHRJ高劑量+CTX組抑制率為80.10%，高于YHRJ等效劑量組及CTX組。說明益氣活血軟堅(jiān)解毒方有抑制荷S180昆明鼠腫瘤生長(zhǎng)作用。

2.2 益氣活血軟堅(jiān)解毒方對(duì)荷H22昆明鼠腫瘤生長(zhǎng)抑制作用觀察 見表2。

表2 益氣活血軟堅(jiān)解毒方對(duì)荷H22昆明鼠腫瘤生長(zhǎng)抑制作用觀察(±s)Tab.2 Inhibitory effecton tumor grow th in H22-bearingm ice(H22)(±s)

表2 益氣活血軟堅(jiān)解毒方對(duì)荷H22昆明鼠腫瘤生長(zhǎng)抑制作用觀察(±s)Tab.2 Inhibitory effecton tumor grow th in H22-bearingm ice(H22)(±s)

注：與對(duì)照組比較，*P＜0.05；＃P＜0.01。

組別生理鹽水組YHRJ等效劑量組YHRJ等效劑量組+DDP組YHRJ高劑量組YHRJ高劑量組+DDP組DDP組n 抑瘤率(%)13.83 34.34 51.36 38.19 41.86 10 10 10 10 10 10瘤質(zhì)量（g）1.063±0.394 0.916±0.442 0.698±0.371*0.571±0.340#0.724±0.393*0.685±0.375*

結(jié)果顯示，除YHRJ等效劑量組外，其余各組抑瘤率均超過30%，抑瘤作用明顯，差顯顯著（P<0.05），YHRJ高劑量組抑瘤率為51.36%，優(yōu)于其他各組。說明益氣活血軟堅(jiān)解毒中藥有抑制荷H22昆明鼠腫瘤生長(zhǎng)抑制作用。

2.3 益氣活血軟堅(jiān)解毒方對(duì)荷H22615小鼠腫瘤生長(zhǎng)抑制作用觀察 見表3。

表3 益氣活血軟堅(jiān)解毒方對(duì)荷H22 615小鼠腫瘤生長(zhǎng)抑制作用觀察(±s)Tab.3 Inhibitory effecton tumor grow th in H22-bearingm ice(H22615)(±s)

表3 益氣活血軟堅(jiān)解毒方對(duì)荷H22 615小鼠腫瘤生長(zhǎng)抑制作用觀察(±s)Tab.3 Inhibitory effecton tumor grow th in H22-bearingm ice(H22615)(±s)

注：與對(duì)照組比較，*P<0.001。

組別NS組YHRJ等效劑量組YHRJ等效劑量組+DDP組YHRJ高劑量組YHRJ高劑量組+DDP組DDP組n 抑瘤率(%)42.31 64.22 79.82 80.10 71.75 10 10 10 10 10 10瘤質(zhì)量（g）1.035±0.221 0.547±0.311*0.355±0.250*▲0.596±0.235*#0.237±0.206*#0.413±0.202*▲

結(jié)果顯示：與對(duì)照組比較，各用藥組均有明顯抑制腫瘤生長(zhǎng)作用，差異顯著（P<0.001），YHRJ等效劑量抑瘤率為47.15%，YHRJ高劑量+DDP組抑瘤率80.60%，說明中藥對(duì)DDP有增效作用。

2.4 益氣活血軟堅(jiān)解毒方對(duì)荷H22昆明鼠生存期影響 見表4。結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比，YHRJ高劑量組與各加DDP組荷瘤小鼠生存期及中位生存天數(shù)明顯延長(zhǎng)，生存率明顯提高，以YHRJ高劑量+DDP組效果最為明顯，經(jīng)統(tǒng)計(jì)分析具有顯著差異。

3 討論

中藥復(fù)方研究是中藥藥理研究的難點(diǎn)。但中藥復(fù)方的整體協(xié)同作用優(yōu)勢(shì)又是單體所無法替代的。孫桂芝教授臨床常用益氣活血軟堅(jiān)解毒方為主治療肝癌，藥物組成主要有黃芪、白術(shù)、三七、水紅花子、炮山甲、藤梨根、白花蛇舌草等。其中黃芪、白術(shù)健脾益氣。黃芪多糖促進(jìn)免疫細(xì)胞數(shù)量增長(zhǎng)活性增強(qiáng)的藥理作用已為眾多研究實(shí)驗(yàn)所證實(shí)[1]。白術(shù)可提高巨噬細(xì)胞的活性，調(diào)節(jié)淋巴細(xì)胞增殖功能，增強(qiáng)人體非特異性免疫功能,抑制癌細(xì)胞的生長(zhǎng)，促進(jìn)胃腸運(yùn)動(dòng)等作用[2-3]。田三七、水紅花子、炮山甲活血軟堅(jiān)能降低血液黏度與止痛，對(duì)肝癌患者伴有的肝硬化也有較好調(diào)理作用[4-7]。藤梨根、白花舌蛇草解毒抗癌[8]。白花蛇舌草體外誘導(dǎo)人肝癌HEPG2細(xì)胞凋亡的作用[9]。通過實(shí)驗(yàn)證明，以上述藥物組成的益氣活血軟堅(jiān)解毒方對(duì)小鼠S180腹水瘤、H22肝細(xì)胞癌腫瘤生長(zhǎng)有一定的抑制作用，與化療結(jié)合有增效作用，并具有明顯延長(zhǎng)荷H22昆明鼠生存期作用。從實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)看，雖然中藥殺滅腫瘤的效力不及化療藥物，但其多靶點(diǎn)的綜合作用，保證了藥物長(zhǎng)時(shí)間的持續(xù)發(fā)揮效力，延長(zhǎng)帶瘤生存時(shí)間，改善了生存質(zhì)量。從而證實(shí)了益氣活血軟堅(jiān)解毒法在肝癌治療中的正確性與肝癌治療中堅(jiān)持綜合治療的價(jià)值所在。

表4 益氣活血軟堅(jiān)解毒方對(duì)荷H22昆明鼠生存率影響觀察Tab.4 Observation on the influence on survivalperiod

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Effectof YiqiHuoxue Ruanjian and Jiedu prescriptionson inhibition of tumor grow th and survivalperiod in tumor-bearingm ice

LIDong-tao1,Wu Zhi-kui1,LV Xin-xia2,etal
（1.Departmentof TraditionalChineseMedicine， Qingdao FirstSanatorium of Jinan Military Region， Qingdao 266071， China；2.Guanganmen HospitalofChinese Science Academy of TCM，Beijing100053 ，China）

[Objective]To study the inhibitory effecton growth of tumorand observe the influence on survivalperiod by using the decoction of YiqiHuoxue Ruanjian Jiedu(YHRJdecoction)in treating the transplanted carcinoma(S180and H22)inmice.[Methods]Themice transplanted with carcinoma(S180or H22)were random ly divided into six groups,including NScontrolgroup,CTX or DDPgroup,YHRJequivalent-dose group,YHRJhigh-dose group,YHRJequivalent-dose plus CTX(orDDP)group,YHRJhigh-dose plus CTX(or DDP)group.All themice in each group were administered from second day,and killed on the thirteenth day.At the same time the carcinomawas cut down and weighed.Observation of the survival time on KunmingMicewhich was transplanted with H22 carcinomawasended tillany one mice died in controlgroup.[Results]In the kunmingmodelmice(S180)theweightofcarcinoma in allmedication groupswas lower comparedwith NScontrolgroup.The inhibition rateof YHRJhigh-dosegroupwas64.22%,and therewasa significantdifferencewhen comparingwith NScontrolgroup and YHRJequivalent-dose group.The inhibition rate of YHRJhigh-dose plus CTX group was80.10%,better than YHRJequivalent-dose group and CTX(or DDP)group.In kunmingmodelmice(H22)the inhibition rate in allmedications groups washigher than 30%except for YHRJequivalent-dose group.The inhibition rate of YHRJhigh-dose group was 51.36%,whichwashigher than othergroups.In themodelmice(H22615)the inhibition rate of YHRJequivalent-dose group was 47.15%and thatof YHRJhighdose plusDDPgroup was80.60%.It indicated thatChinese herb could reinforce the curative effect.Observation of the influence on survivalperiod showed that the survival time and themean survival time in YHRJhigh-dose group and the groups added by DDPwere prolonged.The survival ratewasenhanced.[Conclusion]Itwasproved that the YHRJdecoction could inhibit the growth of transplanted carcinoma(S180orH22)inmice,and could prolong the survival time ofkunmingmodelmice.

YHRJdecoction;hepatocellular;carcinoma;survival time;experimental research

R285.5

A

1672-1519(2010)02-0141-03

國(guó)家科技計(jì)劃資助項(xiàng)目（C03050402）。

李東濤（1966－），男，博士后，副主任醫(yī)師，主要研究方向?yàn)橹嗅t(yī)腫瘤臨床與基礎(chǔ)。

2009-11-13）