仔豬芽孢桿菌與中草藥聯(lián)合應(yīng)用的研究

邱美珍，杜麗飛，周望平，黎春輝，馮小花，左劍波

（1.湖南省畜牧獸醫(yī)研究所，長(zhǎng)沙 410131；2.湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)，長(zhǎng)沙 410128）

芽孢桿菌在腸道中主要通過(guò)微生物奪氧維持腸道微生態(tài)平衡，其在腸道短時(shí)間定植后，可以消耗大量的氧氣，維持腸道厭氧環(huán)境，增強(qiáng)腸道對(duì)厭氧菌的定植，還能產(chǎn)生維生素、有機(jī)酸等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。很多資料表明，芽孢桿菌對(duì)提高家禽的日增重和飼料轉(zhuǎn)化效率有很好的效果[1]。Cavazzoni等在試驗(yàn)研究中報(bào)道，芽孢桿菌具有促進(jìn)生長(zhǎng)和預(yù)防疾病的作用，可作為抗生素的替代品。中草藥有促生長(zhǎng)、增強(qiáng)免疫力和抗應(yīng)激等功能[2]。本試驗(yàn)主要探討芽孢桿菌與中草藥聯(lián)合應(yīng)用對(duì)斷奶仔豬生產(chǎn)性能和腸道菌群的影響，以期為生產(chǎn)實(shí)踐奠定理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

菌種：8株雞源芽孢桿菌和12株豬源芽孢桿菌（從健康雞、豬的糞便中分離并鑒定）；中草藥：蒲公英、仙鶴草等5種（購(gòu)于湖南省長(zhǎng)沙市養(yǎng)天和大藥房）；試驗(yàn)動(dòng)物：斷乳仔豬（來(lái)源于湖南省畜牧獸醫(yī)研究所原種豬場(chǎng)）。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 抗菌中草藥的制備

將5種抗菌中草藥根據(jù)與芽孢桿菌的適應(yīng)性強(qiáng)弱確定其比例，然后用粉碎機(jī)打成粉末狀，過(guò)160目篩，篩出較細(xì)的粉末，留下較粗的粉末，浸泡2～4 h，煎煮，濾液濃縮。將篩出較細(xì)的粉末和濃縮液混合，80℃烘干。

1.2.2 芽孢桿菌制劑的制備

將芽孢桿菌菌株接種到液體培養(yǎng)基中，37℃培養(yǎng)24 h后備用。稱取玉米粉和豆粕粉，等比例混合，高壓滅菌，將已經(jīng)制備好的芽孢桿菌液體培養(yǎng)液與玉米粉和豆粕粉混合均勻，37℃培養(yǎng)24 h。

1.2.3 試驗(yàn)分組

本試驗(yàn)采用單因子分組設(shè)計(jì)，將60頭豬隨機(jī)分成4組，每組3個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)5頭，試驗(yàn)期28 d，觀察芽孢桿菌和中草藥聯(lián)合應(yīng)用對(duì)斷奶仔豬的飼養(yǎng)效果。其中A1組為對(duì)照組，飼喂基礎(chǔ)日糧；A2組在基礎(chǔ)日糧中添加芽孢桿菌109cfu·g-1；A3組在基礎(chǔ)日糧中添加中草藥 1%；A4組在基礎(chǔ)日糧中添加芽孢桿菌109cfu·g-1和中草藥 1%。按常規(guī)飼養(yǎng)管理。基礎(chǔ)日糧配方及營(yíng)養(yǎng)水平見表 1。于第 5周后的第1天采集新鮮糞便測(cè)定大腸桿菌和芽孢桿菌。

1.2.4 測(cè)定指標(biāo)及方法

分別于試驗(yàn)開始、結(jié)束時(shí)早晨（斷料12 h）稱量，計(jì)算各組的平均日增重。記錄各處理的采食量，計(jì)算出全期平均日采食量（ADFI）、平均日增重（ADG）和料重比（F/G）。

分別對(duì)糞便中大腸桿菌和芽孢桿菌進(jìn)行計(jì)數(shù)。大腸桿菌計(jì)數(shù)：取1 g鮮糞，加入100mL蒸餾水，充分震蕩后，取1 mL稀釋到10－3，吸取0.1 mL糞便稀釋液到伊紅美藍(lán)平板上涂布，每個(gè)樣品2個(gè)重復(fù)，培養(yǎng)12 h后進(jìn)行細(xì)菌計(jì)數(shù)。芽孢桿菌計(jì)數(shù)：取1 g鮮糞，加入100 mL蒸餾水，充分震蕩后，放在80℃ 水浴10 min，取1 mL稀釋到10－3，吸取0.1mL糞便稀釋液到普通平板上涂布，每個(gè)樣品2個(gè)重復(fù)，培養(yǎng)12 h后進(jìn)行細(xì)菌計(jì)數(shù)。

表1 基礎(chǔ)日糧配方及營(yíng)養(yǎng)水平

1.2.5 芽孢桿菌聯(lián)合中草藥治療仔豬腹瀉試驗(yàn)

本試驗(yàn)選取其中拉稀的仔豬30頭作為研究對(duì)象，按常規(guī)方法飼養(yǎng)，每頭豬在飼料中添加中草藥5 g+芽孢桿菌制劑0.5 g，觀察各仔豬的腹瀉的情況。

1.2.6 試驗(yàn)數(shù)據(jù)處理

試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用EXCEL軟件對(duì)數(shù)據(jù)整理，采用t檢驗(yàn)對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行顯著性分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 仔豬生產(chǎn)性能變化

各處理仔豬的日增重、日耗料及料重比見表2。

由表2可以看出，A4組日增重、平均日耗料量均比A1組、A2組和A3組高，日增重分別提高了16.13%、16.13%和12.5%，料重比均比 A1組、A2組和 A3組低，分別降低了5.63%、4.15%和3.36%。在本試驗(yàn)中，添加芽孢桿菌和中草藥聯(lián)合應(yīng)用效果最好。

表2 早期斷奶乳豬生產(chǎn)性能

2.2 糞便中大腸桿菌和芽孢桿菌計(jì)數(shù)

糞便中大腸桿菌和芽孢桿菌計(jì)數(shù)結(jié)果見表3。

表3 大腸桿菌和芽孢桿菌計(jì)數(shù)情況

從表3可以看出，和A1組相比，A2組的大腸桿菌數(shù)差異顯著（P＜0.05），A3組、A4組的大腸桿菌數(shù)量差異極顯著（P＜0.01）。芽孢桿菌的數(shù)量在各組間也有差別，和A1組相比，A2組的芽孢桿菌數(shù)差異顯著（P＜0.05），A3組、A4組的芽孢桿菌數(shù)差異極顯著（P＜0.01）。在同一個(gè)試驗(yàn)組，大腸桿菌和芽孢桿菌的數(shù)量也有差別。除了A1組大腸桿菌的數(shù)量要比芽孢桿菌的數(shù)量多外，其他各組，芽孢桿菌的數(shù)量均要比大腸桿菌的數(shù)量多。

2.3 芽孢桿菌聯(lián)合抗菌中草藥治療仔豬腹瀉效果

芽孢桿菌聯(lián)合抗菌中草藥治療仔豬腹瀉效果見表4。

從表4可知，中草藥聯(lián)合芽孢桿菌制劑飼喂動(dòng)物，連續(xù)用藥3 d，治愈腹瀉仔豬27頭，治愈率達(dá)90%，比用痢菌凈治療效果好。

表4 芽孢桿菌與中草藥聯(lián)合治療仔豬腹瀉效果

3 討論

中草藥作為飼料添加劑在動(dòng)物生產(chǎn)中有很廣泛的應(yīng)用并且取得了很好的效果。東彥新等研究表明，中草藥復(fù)方制劑可不同程度地提高肉雞生長(zhǎng)速度，降低料重比、GH水平，并提高T3、T4水平[3]。目前，雖然對(duì)益生菌與中草藥的聯(lián)合應(yīng)用有一些研究，但對(duì)益生菌和中草藥協(xié)同作用的機(jī)制還不清楚。本試驗(yàn)將芽孢桿菌和具有一定抗菌作用的中草藥聯(lián)合起來(lái)飼喂動(dòng)物，結(jié)果表明，同時(shí)添加芽孢桿菌和中草藥組比單獨(dú)添加芽孢桿菌組和中草藥組日增重和飼料轉(zhuǎn)化率都有所提高，說(shuō)明兩者聯(lián)合應(yīng)用具有協(xié)同作用。

試驗(yàn)結(jié)果表明，同時(shí)添加芽孢桿菌和中草藥可提高腸道芽孢桿菌的數(shù)量，降低大腸桿菌的數(shù)量。主要原因可能是芽孢桿菌進(jìn)入腸道后生長(zhǎng)繁殖，消耗腸道內(nèi)的氧氣，造成了腸內(nèi)的厭氧環(huán)境，從而有利于乳酸桿菌等厭氧菌群的定植和生長(zhǎng)繁殖，抑制大腸桿菌等病原微生物的生長(zhǎng)。許多學(xué)者也曾有微生物添加劑對(duì)豬腸道菌群的影響的報(bào)道，Gilliland等發(fā)現(xiàn)，將芽孢桿菌的孢子加到母豬飼料中，母豬糞便中大腸桿菌的含量減少到原來(lái)的2%[4]。芽孢桿菌和抗菌中草藥聯(lián)合應(yīng)用可以更好的調(diào)節(jié)微生態(tài)平衡，幫助腸道益生菌菌群建立優(yōu)勢(shì)菌群，以達(dá)到預(yù)防和治療疾病的目的，具體調(diào)節(jié)機(jī)制還有待進(jìn)一步探討[5－6]。

斷奶仔豬腹瀉一直困擾養(yǎng)豬業(yè)，使用抗生素藥物可治愈，但由于腸道菌群失調(diào)，癥狀容易復(fù)發(fā)，仔豬生長(zhǎng)緩慢。本試驗(yàn)選取中草藥+芽孢桿菌制劑混合飼喂動(dòng)物。3 d治愈仔豬27頭，仔豬腹瀉治愈率達(dá)90%。這一結(jié)果表明，中草藥和芽孢桿菌聯(lián)合應(yīng)用對(duì)仔豬腹瀉的療效具有互補(bǔ)性和加成性，這可能是因?yàn)橛幸嫖⑸锞哂幸种撇≡驼{(diào)節(jié)腸道微生物菌群平衡的作用，而中草藥亦有抑制病原微生物、清熱去濕、調(diào)理胃腸、增強(qiáng)機(jī)體抵抗力的作用，兩類作用加成能夠達(dá)到良好的治療效果[7]。

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