內皮素受體A在不同毛色羊駝皮膚中的分布

穆曉麗，孫樂天，耿建軍，張 杰

（1.山西農業大學動物科技學院，山西太谷030801；2.太原動物園獸醫院，山西太原030009）

羊駝（alpaca）作為一種毛用型特種經濟動物，毛色是該物種最主要的經濟性狀[1]。內皮素（endothelin，ET）是 1988 年 Yanagisawa等[2]從豬主動脈內皮細胞培養液中分離到的一種血管活性多肽，是目前所知體內最強的縮血管物質。研究表明，動物體內有3種內皮素基因，分別編碼3種ET異構肽：ET-1，ET-2和ET-3。哺乳動物體內的內皮素受體（Endothelin receptor）有 A，B這2種類型，均屬于G蛋白偶聯受體。其中，內皮素受體A（EDNRA）對ET-1，ET-2親和力強，而受體 B（EDNRB）對 ET-1，ET-2，ET-3 的親和力相同[3]。研究不同毛色羊駝皮膚中EDNRA的表達對羊駝毛色形成的影響，有助于深入了解內皮素系統參與毛色形成的機理。

本研究擬從蛋白水平探討不同毛色中ED-NRA的表達差異，為研究EDNRA對羊駝皮膚黑色素生成及毛色形成的影響奠定理論基礎。

1 材料和方法

1.1 實驗樣本

選用毛色為白色和棕色的3歲雄性羊駝各3只（由山西農業大學羊駝養殖基地提供），取每只羊駝體側皮膚，剃毛刮凈后再用取皮器取直徑8mm羊駝皮膚組織各1塊，放置于4%的中性甲醛溶液中固定，以進行免疫組織化學研究。

1.2 實驗試劑、耗材及儀器

實驗試劑為無水乙醇、二甲苯、苦味酸、甲醛、冰醋酸、APES黏片劑、0.01mol/LPBS緩沖液（pH 7.2～7.4）、丙酮、蘇木精、伊紅、中性樹膠、EDNRA多克隆兔抗人一抗（Boster，武漢）、單克隆小鼠抗兔二抗SABC試劑盒、DAB顯色液、5%BSA封閉液（Boster，武漢）等。

實驗用耗材有石蠟塊、載玻片、蓋玻片、取皮器、紗布、切片刀等。

實驗用儀器包括KD-BM生物組織包埋機、YD-335電腦切片機（浙江金華益迪醫療設備廠）、YD-A生物組織攤片機（浙江金華益迪醫療設備廠）、HPP-9160電熱恒溫培養箱、HH-6數顯恒溫水浴鍋、DMLB型顯微鏡（LeiCa，德國）等。……