內(nèi)皮素受體A在不同毛色羊駝皮膚中的分布

穆曉麗，孫樂天，耿建軍，張 杰

（1.山西農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，山西太谷030801；2.太原動(dòng)物園獸醫(yī)院，山西太原030009）

羊駝（alpaca）作為一種毛用型特種經(jīng)濟(jì)動(dòng)物，毛色是該物種最主要的經(jīng)濟(jì)性狀[1]。內(nèi)皮素（endothelin，ET）是 1988 年 Yanagisawa等[2]從豬主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)液中分離到的一種血管活性多肽，是目前所知體內(nèi)最強(qiáng)的縮血管物質(zhì)。研究表明，動(dòng)物體內(nèi)有3種內(nèi)皮素基因，分別編碼3種ET異構(gòu)肽：ET-1，ET-2和ET-3。哺乳動(dòng)物體內(nèi)的內(nèi)皮素受體（Endothelin receptor）有 A，B這2種類型，均屬于G蛋白偶聯(lián)受體。其中，內(nèi)皮素受體A（EDNRA）對(duì)ET-1，ET-2親和力強(qiáng)，而受體 B（EDNRB）對(duì) ET-1，ET-2，ET-3 的親和力相同[3]。研究不同毛色羊駝皮膚中EDNRA的表達(dá)對(duì)羊駝毛色形成的影響，有助于深入了解內(nèi)皮素系統(tǒng)參與毛色形成的機(jī)理。

本研究擬從蛋白水平探討不同毛色中ED-NRA的表達(dá)差異，為研究EDNRA對(duì)羊駝皮膚黑色素生成及毛色形成的影響奠定理論基礎(chǔ)。

1 材料和方法

1.1 實(shí)驗(yàn)樣本

選用毛色為白色和棕色的3歲雄性羊駝各3只（由山西農(nóng)業(yè)大學(xué)羊駝養(yǎng)殖基地提供），取每只羊駝體側(cè)皮膚，剃毛刮凈后再用取皮器取直徑8mm羊駝皮膚組織各1塊，放置于4%的中性甲醛溶液中固定，以進(jìn)行免疫組織化學(xué)研究。

1.2 實(shí)驗(yàn)試劑、耗材及儀器

實(shí)驗(yàn)試劑為無水乙醇、二甲苯、苦味酸、甲醛、冰醋酸、APES黏片劑、0.01mol/LPBS緩沖液（pH 7.2～7.4）、丙酮、蘇木精、伊紅、中性樹膠、EDNRA多克隆兔抗人一抗（Boster，武漢）、單克隆小鼠抗兔二抗SABC試劑盒、DAB顯色液、5%BSA封閉液（Boster，武漢）等。

實(shí)驗(yàn)用耗材有石蠟塊、載玻片、蓋玻片、取皮器、紗布、切片刀等。

實(shí)驗(yàn)用儀器包括KD-BM生物組織包埋機(jī)、YD-335電腦切片機(jī)（浙江金華益迪醫(yī)療設(shè)備廠）、YD-A生物組織攤片機(jī)（浙江金華益迪醫(yī)療設(shè)備廠）、HPP-9160電熱恒溫培養(yǎng)箱、HH-6數(shù)顯恒溫水浴鍋、DMLB型顯微鏡（LeiCa，德國(guó)）等。……