HPLC法測定愈風寧心軟膠囊中葛根素的含量

河北省中醫院 程 杰 劉 姣 楊旭杰 陳 哲 劉文輝 陳品英 （石家莊 050011）

愈風寧心軟膠囊由葛根單味藥材組成,具有解痙止痛,增強腦及冠脈血流量等作用。臨床用于高血壓頭暈,頭痛,頸項疼痛,冠心病,心絞痛,神經性頭痛,早期突發性耳聾等癥的治療。本品為軟膠囊劑,所含輔料成分復雜,干擾大,給含量測定帶來了很大困難,本文采用高效液相色譜法對其所含主要成分葛根素進行了含量測定研究。

1 儀器、試藥

LC-10ATvp高效液相色譜儀 （日本島津）、SPD-10Avp型紫外檢測器 （日本島津）;色譜柱為 C 18柱 （250 mm×4.6mm迪馬公司）、葛根素 （0752-200209）由中國藥品生物制品檢定所提供、愈風寧心軟膠囊、乙腈 （色譜純）、其余試劑均為分析純。

2 實驗方法和結果

2.1 色譜條件 色譜柱:Kromasil-C18（250mm×4.6 mm,5μm）、流動相 ∶乙腈 -0.1%磷酸溶液 （12∶88）、檢測波長:250nm、流速:1m L/m in、進樣量 20μL、理論塔板數以葛根素峰計應不低于 4 000。

2.2 供試品溶液的制備 取本品內容物,混勻,取約0.15g,精密稱定,置具塞錐形瓶中,精密加入 70%甲醇溶液 20mL,精密稱定。加熱回流提取 30 min,放冷,用70%甲醇補足減失的重量,搖勻,過濾,精密量取續濾液1.0mL置10mL量瓶中,加 70%甲醇稀釋至刻度,搖勻,離心 （5 000 r/min,5m in）,取上清液作為供試品溶液。

2.3 對照品溶液的制備 精密稱取葛根素對照品適量,精密稱定,加 70%甲醇溶解并稀釋至刻度,制備成濃度為100μg/m L溶液,作為對照品溶液。

2.4 陰性對照溶液的制備 按軟膠囊工藝要求制備,制成不含葛根的成品,按2.3項下方法操作,制得空白對照溶液。

2.5 方法學考察

2.5.1 線性關系考察:精密量取 2.4項下對照品溶液1.0,2.0,4.0,6.0,8.0,10.0mL,加 70%甲醇定容于10mL量瓶中,搖勻。在上述色譜條件下,依次進樣,每次 20μL。以葛根素對照品濃度為橫坐標,以峰面積積分值為縱坐標,繪制標準曲線,并計算線性回歸方程為Y=74 100.30X+23 402,r=0.999,結果表明葛根素在 0.2～2.0μg范圍內,其峰面積與進樣量有良好的線性關系。

2.5.2 空白試驗:精密吸取對照品溶液、供試品溶液及陰性液各 20μL,注入液相色譜儀,按上述色譜條件測定。結果陰性對照液在與葛根素對照品相同保留時間處未顯色譜峰,故認為無干擾。

2.5.3 精密度試驗:取對照品溶液 （40μg/mL）20 μL,注入液相色譜儀,測定峰面積,連續測定 6次。結果葛根素的 RSD為 1.40%（n=6）,表明儀器精密度良好。

2.5.4 穩定性試驗:取供試品溶液,在 10 h內分別進樣5次 （0,2,4,8,10 h）,結果葛根素進樣的 RSD為1.21%,表明供試品溶液在 10 h內基本穩定。

2.5.5 重復性試驗:按上述方法對批號為 090301的樣品進行提取測定,共測定 6份。結果葛根素平均含量為31.38mg/粒,RSD為 1.52%,表明該方法重現性良好。

2.5.6 回收率試驗:采用加樣回收法,取批號為 090301的樣品 （含量葛根素 62.7mg/g）加入葛根素對照品,按含量測定項下方法進行,計算回收率,結果見表1。

2.6 含量測定 制備 3批樣品的供試品液,吸取對照品溶液、供試品溶液各 20μL,注入液相色譜儀,測定峰面積,按外標法計算樣品中葛根素的含量,結果見表 2。

3 討論

3.1 本實驗供試品溶液制備中對甲醇、50%甲醇、70%甲醇、乙醇、50%乙醇、70%乙醇 6種提取溶劑提取效果進行了比較;并且比較了 3種提取方法:振搖提取、超聲提取和回流提取,同時對不同時間的提取效果進行了比較。因本品為軟膠囊劑,其中輔料較多,對供試品溶液的制備帶來不利影響,通過對以上項目的考察,結果證明以 70%甲醇為提取溶劑,樣品經回流提取30min,葛根素即可提取完全,故樣品采用 70%甲醇為提取溶劑,加熱回流 30 min,制備供試品溶液。

表1 葛根素回收率試驗考察結果

表2 樣品中葛根素的含量 （n=3）

3.2 實驗采用了甲醇 -0.5%磷酸溶液[1]、甲醇 -水[2]、乙腈-水[3]系統作為流動相均不能達到基線分離。本研究采用乙腈-0.1%磷酸溶液為流動相,得到分離效果較好。

3.3 以上試驗結果表明,本文測定方法簡便易行,結果準確,重現性好,可有效地控制該制劑的質量。

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（2010-01-25 收稿）