膀胱尿路上皮癌中CD44v6和p63蛋白的表達及其意義

谷化平

(中國人民解放軍第251醫院 病理科,河北 張家口 075000)

膀胱尿路上皮癌(uroepithelium carcinoma of bladder,BUC)是最常見的泌尿系統惡性腫瘤,發病率在我國的泌尿系惡性腫瘤中占首位。近年來研究證明,BUC的發生、發展是一種復雜過程,與多個基因和多種分子水平變化密切相關。CD44v6是在細胞惡性轉移過程中通過其結構和功能均發生顯著變化而影響腫瘤細胞侵襲、轉移行為的典型的細胞表面黏附分子[1-4];p63是p53基因內家族中的一員,廣泛分布于復層上皮細胞的基底層和單層上皮組織的基底細胞中,被認為是可能參與上皮組織的正常發生和分化以及形態學的發生,并可以促進腫瘤的生長[4-8]。我們應用免疫組織化學方法檢測BUC和正常膀胱黏膜組織中CD44v6和p63蛋白表達情況,旨在探討這兩種基因蛋白表達與BUC的發生、發展的關系及其生物學意義。

1 材料與方法

1.1 標本來源

取我院2005年1月至2009年3月間手術切除并經病理診斷為BUC標本60例。其中男51例,女9例;年齡30～78歲,平均(63.89±7.45)歲。病理分級按WHO標準:G1～G239例,G321例;臨床分期按TNM標準:淺表性腫瘤Tis～T125例,浸潤性腫瘤T2～T435例;原發癌34例,復發癌26例;有淋巴結轉移和遠處轉移者20例,無轉移者40例。取同期距腫物1 cm以外的正常膀胱黏膜組織20例作為對照觀察,標本經40 g?L-1甲醛固定,石蠟包埋,4μm厚連續切片。

1.2 試劑

鼠抗人CD44v6、p63單克隆抗體和LSAB試劑盒均為丹麥Dako公司產品(均為即用型)。

1.3 方法

免疫組織化學染色采用微波-鏈霉親和素-生物素(microwave-labelledstrept-avidin biotin,MW-LSAB)技術,即將切片常規脫蠟水化后,放入枸櫞酸緩沖液(10 mmol?L-1,pH 6.0)內,用微波儀170 W輻射5 min,冷卻后水洗.其他操作流程同常規LSAB法,所不同的是3步抗原孵育和正常血清封閉用微波儀130 W分別輻射5 min,然后保溫2 min。實驗用已知CD44v6和p63陽性宮頸癌組織作為陽性對照,用磷酸鹽緩沖液(PBS)代替一抗作為陰性對照。H2O2-DAB顯色。

1.4 結果判斷

免疫組織化學染色呈棕黃色為陽性。CD44v6蛋白以細胞質和細胞膜、p63蛋白以細胞核顯示棕黃色顆粒為陽性。采用單盲法,每張切片在400倍顯微鏡下選10個視野,計算陽性細胞的百分數。未見棕黃色顆粒為陰性(-),陽性細胞數 ＜25%為弱陽性,25%～75%為陽性,＞75%為強陽性。

1.5 統計學處理

CD44v6和p63蛋白表達陽性率比較采用 χ2檢驗,P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 CD44v6和P63蛋白在正常膀胱黏膜和BUC中的表達

CD44v6蛋白陽性細胞的棕黃色染色定位于細胞質和細胞膜,背景清晰。CD44v6蛋白在正常膀胱黏膜組織中陽性細胞主要局限于黏膜上皮的基底細胞層及上基層細胞,表層細胞無表達(圖1);在BUC中陽性呈彌漫性分布,且細胞分化越低,CD44v6蛋白表達強度越強,分化高的腫瘤細胞呈弱陽性或陰性(圖2);BUC組織中CD44v6蛋白陽性表達率和強陽性表達率顯著高于正常膀胱黏膜組織(χ2=6.73或 χ2=14.24,P＜0.05)。

圖1 正常膀胱黏膜基底細胞質和細胞膜CD44v6陽性染色微波-LSAB法×200Fig 1 Immunohistochemistry,positive CD44v 6 expression in cytoplasm and cellular membrane of normal epithelium tissues WM-LSAB×200

圖2 BUC細胞質和細胞膜CD 44v6陽性染色 微波-LSAB法×200Fig 2 Immunohistochemistry,positive CD44v 6 expression in cytoplasm and cellular membrane of BUC WM-LSAB×200

p63蛋白陽性細胞的棕黃色染色定位于細胞核,背景清晰,所有切片細胞均呈不同程度陽性反應。在正常膀胱黏膜組織中,p63蛋白陽性細胞主要局限于黏膜上皮的基底細胞層及上基層細胞(圖3);在BUC組織中p63蛋白主要呈強陽性表達(圖4),且細胞分化越低,p63蛋白表達強度越強,分化高的腫瘤細胞呈弱陽性或陰性;BUC組織中p63蛋白強陽性表達率顯著高于正常膀胱黏膜組織(χ2=18.11,P＜0.05)。CD44v6和p63蛋白在正常膀胱黏膜和BUC組織中的表達見表1。

圖3 正常膀胱黏膜基底細胞核p 63蛋白陽性染色 微波-LSAB法 ×400Fig 3 Immunohistochemistry,positive p 63 protein expression in cellular nucleus membrane of normal epithelium tissues WMLSAB×200

圖4 BUC細胞核p 63蛋白陽性染色 微波-LSAB法×200Fig 4 Immunohistochemistry,positive p 63 protein expression in cellular nucleus of BUC WM-LSAB×200

表1 CD44v6和p63蛋白在正常膀胱黏膜和BUC中的表達Tab 1 Expression of CD44v6 and p63 protein in normal epithelium tissues and BUC

2.2 CD44v6和p63表達與BUC臨床病理特征的關系

隨著BUC病理分級和臨床分期的增高及術后復發和淋巴結或遠處轉移,CD44v6表達的陽性率和強陽性率、p63表達的強陽性率均顯著增高(P＜0.05),見表2。

表2 CD44v6和p63表達與BUC臨床病理指標的關系Tab 2 Relationship between expression of CD44v6 and p63 protein in BUC and clinicopathologic characteristics

3 討 論

腫瘤的發生、發展和轉移是一個多階段,受多因素、多種基因及因子調控的復雜過程,其中任何一種基因或因子的異常表達均可導致惡性腫瘤的發生或轉移。CD44屬Ⅰ類膜蛋白,是一類介導細胞與細胞或細胞與細胞外基質之間產生相互黏附作用的細胞黏附分子。其在人體組織中分布極為廣泛,主要參與細胞與細胞、細胞于基質之間的特異性粘連過程,從而維持組織與器官的基本結構。CD44分為2種類型,即標準型CD44(CD44s)和變異型CD44(CD44v)。基因組分析表明,變異型CD44包括CD44v1～v10,其中與腫瘤轉移較為密切的是CD44v6。其促進轉移作用機制可能是表達CD44v6蛋白的腫瘤細胞與淋巴管或血管內某一配體結合,使轉移至那里的腫瘤細胞更加穩定地寄宿與生長,由此形成轉移瘤。近年研究[1-4]證實,CD44v6蛋白和轉錄分子水平的過量表達與許多腫瘤的發生發展、侵襲和轉移密切相關。p63基因是1998年在人類及大鼠基因組中發現的一個與p53同源的基因家族新成員,定位于3q27-3q29,其與p53具有十分相似的結構和功能。p63正常主要表達于許多上皮組織的基底層,對各上皮和間葉組織正常發生、分化以及形態學的發生具有重要作用,被視為可能是與生長發育相關的基因。p63基因在腫瘤中的高表達,可以抑制野生型p53的活性,阻止野生型p53誘導的細胞凋亡,以促進腫瘤的生長和發展。近年來研究發現,p63蛋白主要表達于肺鱗癌、宮頸鱗癌、皮膚鱗癌、食管癌和鼻咽癌等鱗狀上皮起源的腫瘤組織中,且隨著分化程度的升高而減低,并與其惡性腫瘤的侵襲轉移等預后不良的生物學行為密切相關[4-7]。由于p63蛋白在腺癌組織中的表達極低或不表達,因此認為,p63蛋白的表達可能與某種程度的鱗狀上皮相關性基因的表達潛能有關。近年來,有關p63蛋白在膀胱癌中的研究已見少數報道,結果提示,p63蛋白在尿路上皮的分化、細胞增殖中起一定作用,可能參與膀胱癌的發生發展,促成腫瘤的進展,p63蛋白高表達與其腫瘤的病理分級和臨床分期密切相關,因此認為,p63蛋白是評估膀胱癌預后的潛在因素之一[8]。本研究結果顯示,在正常膀胱黏膜組織中CD44v6和p63蛋白僅表達于基底層及上基層細胞;在BUC組織中CD44v6和p63蛋白表達陽性率分別為63.3%和100%,陽性細胞呈彌漫性分布,且主要為強陽性表達。表明CD44v6和p63蛋白主要存在于正在增殖或具有增殖能力的膀胱尿路上皮細胞中,與BUC細胞的增殖、惡性轉化以及癌細胞的惡性程度密切相關,可能是BUC的早期事件。本研究將BUC病理分級、臨床分期、原發癌與復發癌以及有無淋巴結和遠處轉移組進行了觀察比較,發現隨著BUC的病理分級和臨床分期增高、腫瘤復發以及有淋巴結轉移和遠處淋巴結轉移,CD44v6蛋白表達的陽性率和強陽性率及p63蛋白表達的強陽性率均隨之顯著性增高(P＜0.05),提示CD44v6和p63蛋白表達越強,腫瘤細胞越具有較強的惡性增殖活性和轉移能力,預示患者臨床預后不良。我們認為,在臨床病理活檢中,檢測BUC組織中CD44v6和p63蛋白表達,不僅對研究BUC的發生發展是一個較可靠的重要標志物,而且在判斷腫瘤生物學行為及預測患者預后方面也是一個較可靠的、具有較大價值的參考指標。

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