對乙肝標志物HBeAg、抗HBe雙陽性結果的再分析

吳建華，謝 銀

(江蘇省如皋市博愛醫院，江蘇 如皋 226500)

ELISA檢測乙肝病毒標志物是臨床常規開展的方法，HBeAg常使用雙抗體夾心一步法檢測，以S/C0≥1.0為陽性?？笻Be使用競爭一步法檢測，以抑制率＞50%即S/CO＜1(CO=1/2N)為陽性。理論上，由于HBeAg與抗HBe存在“血清轉換”，即 HBeAg消失而抗 HBe產生，故HBeAg、抗 HBe雙陽性應很少出現，但事實上這種雙陽性并不鮮見。筆者通過對雙陽性樣本的復檢發現造成雙陽性的原因是多方面的，主要有灰區假陽性、HBeAg濃度過高、樣本問題、干擾物質等，本文對此進行了探討。

1 材料與方法

1.1 樣本 本院2009年7月至2010年5月門診、住院作乙肝標志物 HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb 檢測時HBeAg、抗HBe雙陽性的患者樣本57例，其中HBeAg的吸光度A值位于灰區陽性(CO+15%)的樣本4例，抗HBe的吸光度A值位于灰區陽性(CO-15%)的樣本36例?；覅^是指CO值上下一段陽性可疑的吸光度區間，通常為CO±15%。若有標本溶血、脂血、污染等則重新采集標本并及時檢驗。

1.2 儀器與試劑 檢測試劑為上海科華公司生產的ELISA一步法 “兩對半”檢測試劑盒，HBeAg為雙抗體夾心法，抗HBe為競爭一步法(HBeAg包被反應孔)。HBeAg、抗HBe免疫層析法(ICA)復檢試劑為廈門先科英創公司生產。Bio Rad 680型酶標比色計，YT-Wash型洗板機。室內質控物由江蘇省臨床檢驗中心提供，濃度為HBeAg 2ncu/m l，抗HBe 4ncu/m l。類風濕因子使用Beckman-Coulter公司的Immage特種蛋白檢測儀及配套試劑，檢測原理為免疫散射比濁法。

1.3 方法 57例雙陽性樣本的HBeAg使用ICA及ELISA復檢。為避免HBeAg濃度過高導致HOOK效應，HBeAg復檢改用ELISA兩步法檢測，即樣本加入孵育30min、洗板后，再加入酶標抗體孵育、洗板、顯色，結果判斷相同，以HBeAg的S/CO≥1為陽性。若ELISA與ICA檢測結果不一致時，首先檢查標本是否合格，再檢測樣本中的類風濕因子。為避免加樣時差導致的不公平競爭對抗HBe檢測結果的影響，ELISA測定抗HBe時，在樣本加入后隨即加入酶標抗體。

2 結果

57例抗HBe陽性樣本經復檢后轉為陰性的樣本共為45例，其中43例經ICA與ELISA復檢后均為陰性(包括初檢位于灰區陽性的36例樣本)，有2例用ICA檢測陰性而ELISA仍為陽性，疑為HBeAg濃度過高導致的抗HBe假陽性。4例HBeAg初檢陽性的樣本經ICA復檢后均為陰性，但ELISA檢測3例陰性(初檢為灰區樣本，其中1例溶血標本)，1例仍為陽性，檢測該標本類風濕因子為256IU/L。復檢后雙陽性樣本為8例。將復檢結果模式重新組合后HBeAg+、抗HBe-為45例 (78.9%)，HBeAg-、 抗 HBe+的 4例 (7%)， 雙陽性 8例(14%)。3種模式占調查期間HBsAg陽性樣本的比例分別為45/2510(17.9‰)、4/2510(1.59‰)、8/2510(3.18‰)。 見表 1。

表1 57例HBeAg、抗HBe雙陽性模式樣本的復檢結果

3 討論

HBeAg是HBcAg合成時的可溶性蛋白，由前C基因編碼加工后分泌到細胞外，一般僅見于HBsAg陽性血清，急性HBV感染時HBeAg的出現略晚于HBsAg，在病變極期后消失，若HBeAg持續陽性病變趨向慢性。在慢性HBV感染時HBeAg是重要的免疫耐受因子，大部分情況下其存在表示患者處于高感染低應答期。HBeAg消失而抗HBe產生稱為血清轉換(seroconversion)。每年約有10%的患者發生自發的血清轉換。由于基因變異后即表達抗HBe而非HBeAg，故HBeAg、抗HBe雙陽性應很少見，本文僅占HBsAg陽性樣本的1.59‰，而絕大多數雙陽性是由于各種原因導致的抗HBe假陽性。

有作者[1]在對雙陽性結果分析后得到大部分雙陽性結果是由于操作不規范和一步法影響因素所致。本文結果提示導致HBeAg、抗HBe雙陽性模式的主要原因是ELISA檢測結果的灰區假陽性，且第一位的是抗HBe的假陽性，本文占63.2%(36/57)。所謂灰區就是CO值上下一段陽性可疑區域，灰區吸光度范圍為CO±(15～20%)或CO±2s(s為室內質控OCV的s)。由于ELISA檢測時的影響因素眾多且以CO值判斷陰陽性，因而如試劑敏感性、標本因素、加樣、孵育、洗板、比色等均可能導致檢測結果尤其是灰區結果的誤判[2-4]。通常實驗室ELISA檢測乙肝標志物室內質控的CV值均＞15%，對于灰區樣本初檢及復檢結果的不一致是完全可能的，因而《醫院檢驗科建設管理規范》要求對該陽性可疑區域的樣本需重復試驗或更換試劑后重測以確定其陰陽性[5]?？紤]到“血清轉換”時HBeAg、抗HBe雙陽性的模式比較少見，因而筆者認為由于“加樣時差”不公平競爭導致的抗HBe假陽性[6-7]可能性較小。同樣在本文中4例HBeAg初檢陽性的樣本經復檢后為陰性，其中3例為灰區樣本(1例為初檢為溶血標本)，1例為類風濕陽性。類風濕因子為變異的免疫球蛋白，其Fc受體可導致檢測結果的假陽性。

本文有2例HBeAg濃度過高導致抗HBe檢測結果的假陽性。原理是當HBeAg濃度過高時，樣本中過剩的HBeAg與酶標抗體結合使固相HBeAb-HBeAg-HBeAb-HRP生成減少顯色下降產生假陽性。

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