慢性乙型肝炎患者外周血T、B淋巴細胞變化與其HBV-DNA的水平相關性探討

鄭源海，周艷貞，林元峰，周藝華

(福建醫科大學附屬漳州市醫院檢驗科，福建 漳州363000)

乙型肝炎病毒(HBV)是一種非細胞毒性病毒，其所致的肝細胞損壞是由機體針對HBV特異性抗原的免疫反應所引起，HBV感染所致的不同臨床結果與機體不同的免疫狀態密切相關[1]。機體免疫功能及病毒逃逸免疫的能力決定了HBV感染發生，發展和轉歸[2]。本文采用直接免疫熒光法通過流式細胞儀檢測HBV感染者外周血T淋巴細胞亞群(CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+)、B 淋巴細胞 (CD19+)及采用FQ-PCR檢測血清中HBV-DNA載量水平，來評價HBV感染后血清HBV-DNA水平與機體免疫功能變化的關系。

1 材料與方法

1.1 研究對象 91例慢性乙肝病毒(HBV)感染者，男64例，女27例，年齡 17～75歲，平均年齡36.9歲，符合2000第十次全國病毒性肝炎及肝病學術會議修訂的病毒性肝炎診斷標準。正常對照組31例，其中男21例，女10例，年齡22～70歲。平均年齡35.7歲，均為我院體檢中心體檢合格的健康人。

1.2 儀器和試劑 IMMUNO-TROLTMCells標準品、CD19-PE、 CD4-FITC/CD8-PE/CD3-PC5熒光標記抗體及紅細胞裂解液 (Opti Lyse○RC)購自法國Immunotech公司，流式細胞儀為Beckman-Coulter公司生產的Epics-XL型流式細胞儀，HBV核酸熒光定量PCR試劑盒為廈門安普利生物工程有限公司生產，PCR擴增儀為Amplly公司的GeneLight9800熒光定量核酸擴增儀。

1.3 標本收集 抽取靜脈血6ml分三管，一管用EDTA-K2抗凝，用于流式細胞術檢測；另兩管為分離膠管，分離血清后用于HBV及HBV-DNA病毒檢測。

1.4 檢測方法 采用IMMUNO-TROLTMCells標準品進行校正。各取100μl抗凝血于流式專用試管中，分 別 加 入 20μl CD19-PE、CD4-FITC/CD8-PE/CD3-PC5熒光標記抗體，室溫閉光反應20min，加入500μl紅細胞裂解液，溶解紅細胞15min，加入500μl鞘液混勻，1000rpm/min 離心 5min，棄上清，再加入500μl鞘液，混勻后上機檢測并記錄熒光抗體染色陽性 CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+及 CD19+百分率。……