Sysmex KX-21血液分析系統校準周期的建立及其應用

李劍珉，顏 簫，李南華，涂永紅

(1、江西寄生蟲病防治研究所，江西 南昌 330046；2、江西特康科技有限公司)

校準(Calibration)是指“在規定條件下，為確定測量儀器或測量系統所指示的量值，或實物量具或參考物質所代表的量值，與對應的由標準所復現的量值之間關系的一組操作。是指建立分析物的濃度或活性與檢測方法/檢測系統間相應關系的過程[1]，相當于確定了用來丈量物體的尺子的長度。”因此，分析系統的校準是保證病人檢測結果可靠的基礎。全血細胞分析項目5項，試劑種類為溶血劑、稀釋液兩種。暴露在空氣中的血液分析儀使用試劑，因水分蒸發造成有效組分濃縮，也會影響測定結果。衛生部臨床檢驗中心已實施我國血細胞分析參考系統的建立[2]工作。本文就血細胞分析系統校準周期進行探討，現將結果報告如下。

1 材料與方法

1.1 儀器與材料

日本Sysmex公司生產的KX-21型全自動血液分析儀，具有定期自動清洗與保養功能；校準物為Sysmex SCS-1000血液校準品，批號：990662。遵循《血液分析儀校準要求》，對KX-21血液分析儀校準允許偏差符合 WBC±15%、RBC±5%、Hb±5%、Hct±5%、Plt±15%。伯樂質控品為美國Bio-Rad公司生產的LiquichekTMHematology Control中值水平血液學-21參數控制品，批號：Normal-99122。血液分析儀試劑：KX-21血液分析儀使用特康科技生產的“雪球”牌配套試劑，溶血劑、稀釋液批號分別為：1001002、1002010，供全血質控品作血細胞分析系統校準周期測試試驗；另取五個批次生產留樣試劑稀釋液/溶血劑 ：LOT-1 (0809001/0809004)、LOT-2(0902001/0905002)、LOT-3(0910005/0910005)、LOT-4(1001002/1002010)，LOT-5(1004002/1004005)分 別 對 同 一 全血質控品進行測試。

1.2 所檢測的項目

儀 器 測 定 項 目 WBC、Lymph#、Mid#、Gran#、RBC、HGB、MCV(HCT)、PLT 八項指標，使用軟件計算 參 數 為 ：Lymph% 、Mid% 、Gran% 、MCH、MCHC、RDW、MPV等。

1.3 方法

1.3 .1全血質控品參考值范圍：伯樂中值水平質控品參考值范圍：WBC、RBC、HGB、MCV、PLT 等指標分別為 10.1±0.6×109/L、4.12±0.2×1012/L、128±4.0g/L、94±6fl、273±30×109/L。

1.3 .2首次檢測試驗按說明書要求對血液分析儀進行保養和寶石孔清洗，更換試劑后，參照血液分析儀校準規范化的建議[3]，用全血校準品對KX-21血液分析儀進行校準[4]，，每間隔5d(120h)檢測同一批質控品，重復檢測3次取均值統計分析；美國CLIA’88對血細胞分析的質量要求為：WBC：靶值±15%、RBC 和 MCV 是：靶值±6%、HGB：靶值±7%、PLT：靶值±25%，以累積CV小于CLIA’88允許誤差的1/3作為評價標準[5]，連續監測6個月。從校準完畢后開始計時，至累積CV大于1/3 CLIA’88允許誤差時結束，此間隔時間作為該項目的校準周期。

2 結果

同批號稀釋液、溶血劑在Sysmex公司生產的KX-21血液分析儀上檢測結果歸納如下：

2.1 WBC、RBC、HGB、MCV、PLT 等五項測量指標監測到151d(33次測試)仍然處于允許值范圍，其x、SD及CV見表1。

表1 中值水平質控品監測結果

2.2 監測到111d Mid%為1.1%首次超出允許范圍，往后在允許值范圍上下波動，至161d后均處于允許值范圍之外。

2.3 監測到165d PLT測定值為309×109/L首次超出允許范圍，往后5次測試又處于正常范圍，至181d后超出允許值范圍。

2.4 HGB超出允許值范圍的時間是181d，WBC和RBC監測到191d才超出允許值范圍，而MCV監測到191d仍然處于規定要求。

2.5 各項目判斷標準及校準周期見表2。使用不同批次的稀釋液、溶血劑，用同一全血質控品分別在KX-21血液分析儀上檢測結果見表3。

表2 各參數判斷標準及校準周期

表3 不同批次試劑檢測結果

3 討論

3.1 實驗前對KX-21血液分析儀進行校準，其各項指標百分數誤差均在一列范圍以內[6]，外部校準系數：HGB為100.0、HCT為100.0，內部系數WBC為 98.9、RBC 為 100.0、HGB 為 99.3、PLT 為 98.0等。擁有自動清洗與定期保養功能的血液分析儀定期校準周期較長。

3.2 從表 1可以看出，Mid%不穩定，CV值21.48%，其余指標重復測試結果穩定性好；表2結果顯示，血液分析儀校準周期較長，白細胞分類校準周期最短，RBC、MCV校準周期較長，大于191d。從表3結果表明，更換不同批次的試劑其檢測結果未發現超出規定范圍。值得提醒的是：由于試劑的批間差，可能會導致相關指標出現偏離質控范圍，溶血劑影響HGB、白細胞及其分類，稀釋液影響MCV或HCT。所以，在確立檢測系統的校準周期時，一定要分析各種影響校準周期的因素，選擇合適的校準時機。

3.3 影響血細胞分析系統校準周期的因素有：

3.3 .1不同批次的試劑：溶血劑與稀釋液有效組分濃度改變，如溶血表面活性劑、與HGB相結合的成分、滲透壓等會導致白細胞分類、HGB、MCV等指標的變化；試劑pH明顯改變也會引起白細胞分類、HGB、MCV等指標不同程度的變化。

3.3 .2儀器保養與維護的頻次：一般而言血液分析儀均具備自動清洗與定期保養功能，Sysmex公司生產的KX-21血液分析儀開機時將自動進行清洗，關機時用濃縮清洗液自動清洗與保養，起到清洗計數池、寶石孔與管道的效果，防止賭孔發生，起到延長校準周期的作用。

3.3.3比色光源的使用壽命：使用540±2nm波長的發光二極管其實際壽命一般為50000h，供電電壓不穩定有一定影響，受溫度影響較小。

3.3 .4 關鍵部件的更換或維修：如光源、寶石孔、分血閥、吸樣針、真空泵、試劑或樣品管道等部件的更換或維修需要重新校準。

3.3 .5儀器本身的漂移或壽命：儀器機械部件的磨損，電子元器件與管道系統的老化，直接影響儀器的使用壽命或性能指標的漂移，一般血液分析儀使用壽命為5~8年，其使用壽命又受使用頻率和樣本量的影響。

3.3 .6校準周期受儀器性能的影響：血液分析儀即使滿足YY/T0653-2008血液分析儀標準，不同檔次的儀器也有一定差異，尤其是PLT重復性指標小于8.0%，接近CLIA’88的1/3，所以，本次實驗監測到PLT156d超出范圍后，又回復到正常。意味著到了校準時期。

3.4 本次監測MCV較為穩定，直到191d仍然處于允許值范圍，可能是由于質控品紅細胞進行適當處理的原因，其形態相對穩定。

3.5 由于KX-21血液分析儀白細胞分群采用浮動界標，從表3可以看出Mid%106d就出現異常，往后又回復正常，至111d再次出現異常，表明浮動界標存在分類的不確定性。在實驗監測過程中有時會出現不分類的現象；即使某項分類結果超出質控范圍，也不主張輕易調整分類界標或改變白細胞增益。

3.6 如果采用低值或高值質控品，其校準周期可能前移或滯后，理由是根據CLIA’88允許誤差，參考值越大允許值范圍隨之放大，檢測值越不易超出規定范圍，故選擇中值質控品確立校準周期較為合適。至于低值或高值質控品確立校準周期實驗有待進一步驗證。

總之，血細胞分析系統校準周期受諸多因素影響，臨床實驗室有3個月、6個月甚至更長的校準時間；無例外的情況下，至少半年校準一次。確立血細胞分析系統校準周期既能節省檢驗工作的時間和成本，避免不必要的校準，又可保證檢測結果的準確性。科學地建立校準周期、對檢測系統進行定期校準，是保證血細胞分析結果可靠性的基本要求。必須指出的是：①血細胞分析系統監測到異常后，又可能回復正常；②不能忽視校準品或及質控品的質量對校準周期的影響；③當室內或室間質控信息出現異常的趨勢或偏移，超出實驗室質控規定的接受限，應分析原因，采取相應的預防糾正措施后，仍不能識別問題和糾正問題時，需重新進行校準[7]。因此，在做好“定期校準監測”工作的基礎上，確立適宜、有效的校準周期，才不致于失控。

[1]黃亨建,宋昊嵐,李 萍.檢測系統的線性分析與校正驗證[J].中華檢驗醫學雜志,2006,29(6):562-564.

[2]彭明婷,谷小林,陸 紅,等.我國血細胞分析參考系統的建立[J].中華檢驗醫學雜志,2006,29(3):196-198.

[3]叢玉隆.血液學體液學檢驗與臨床解疑[M].北京:人民軍醫出版社,2004:294-298.

[4]吳志勇,劉丙秀,崔 彬.Kx-21血球儀的校準[J].實用醫技雜志,2003,10(5):20-21.

[5]馮仁豐.臨床檢驗質量管理技術基礎(第2版).上海:上海科學技術文獻出版社,2007:81.

[6]葉應嫵,王毓三,申子瑜.全國臨床檢驗操作規程[M](第3版).南京:東南大學出版社,2006:141.

[7]申子瑜.我國臨床實驗室質量管理的基本要求[J].中華檢驗醫學雜志,2003,26(11):700-701.