多項(xiàng)目特種蛋白復(fù)合凍干質(zhì)控品的研制

林建軍，徐成國(guó)，盛小宗，何燕武，謝海寶

(浙江省寧波市象山第一人民醫(yī)院，浙江 寧波 315700)

臨床實(shí)驗(yàn)室要獲得可靠的測(cè)定結(jié)果，需要建立一個(gè)全面的質(zhì)量管理體系。其中，實(shí)驗(yàn)室內(nèi)質(zhì)量控制(以下簡(jiǎn)稱室內(nèi)質(zhì)控)是一個(gè)重要的環(huán)節(jié)，而質(zhì)控品是保證質(zhì)控工作的重要物質(zhì)基礎(chǔ)[1]。與液體質(zhì)控品和混合血清等相比較，凍干品穩(wěn)定性較好，便于長(zhǎng)期保存與運(yùn)輸，是開展質(zhì)控活動(dòng)更理想的質(zhì)控品[2]。

隨著特種蛋白基礎(chǔ)研究的深入和臨床治療實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)的積累，特種蛋白的檢測(cè)得到了從事腫瘤基礎(chǔ)和臨床工作者的重視，已成為臨床檢測(cè)的重要項(xiàng)目之一，快速準(zhǔn)確地檢測(cè)特種蛋白有重要的臨床價(jià)值。

但目前國(guó)內(nèi)臨床實(shí)驗(yàn)室特種蛋白檢測(cè)質(zhì)控品主要來(lái)自國(guó)外進(jìn)口或是國(guó)內(nèi)實(shí)驗(yàn)室配置非商品化生產(chǎn)。上述質(zhì)控品存在諸多問(wèn)題，比如：?jiǎn)我豁?xiàng)目質(zhì)控品操作繁瑣、進(jìn)口產(chǎn)品價(jià)格昂貴、多項(xiàng)目水平質(zhì)控品使用成本明顯增加，在實(shí)際使用中推廣困難、非商品化生產(chǎn)的質(zhì)控品產(chǎn)品的質(zhì)量及供應(yīng)無(wú)法保證等。本研究旨在研制多項(xiàng)目特種蛋白復(fù)合凍干質(zhì)控品，用于對(duì)多種臨床檢測(cè)項(xiàng)目同時(shí)進(jìn)行質(zhì)控。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑 HITACHI 7170全自動(dòng)生化分析儀 (日本，HITACHI)，Bio-Rad 質(zhì)控品 (美國(guó)，Bio-Rad)，Scientz-12N冷凍干燥機(jī)。

1.2 質(zhì)控品的制備

1.2 .1血清基質(zhì)的制備 正常人血清中每1000ml血清中加入 50%CaCl2溶液 10ml，36～37℃孵育 2～3h，4000～4500g/min，離心 5min，過(guò)濾除去血漿中的纖維蛋白，制得質(zhì)控品血清基質(zhì)。

1.2 .2質(zhì)控品的制備 (1)收集日常工作中檢測(cè)出的特種蛋白高濃度、無(wú)溶血、無(wú)黃疸、無(wú)細(xì)菌污染剩余血清標(biāo)本，用國(guó)家衛(wèi)生部門認(rèn)可的方法檢測(cè)標(biāo)本攜帶傳染病的可能性。檢測(cè)項(xiàng)目包括乙型肝炎表面抗(HBsAg)、丙型肝炎抗體、艾滋病抗體(HIV 1/2抗體)、梅毒螺旋體特異性抗體。結(jié)果均為陰性的標(biāo)本經(jīng)56℃加熱10h滅活，離心或過(guò)濾去沉淀，-70℃冰箱保存?zhèn)溆谩Ｌ胤N蛋白質(zhì)控品包括下列檢測(cè)項(xiàng)目：載脂蛋白A1(Apo-A1)、載脂蛋白B(ApoB)、前白蛋白(PA)、β2微球蛋白(β2-MG)、IgG、IgA、IgM、補(bǔ)體 C3、補(bǔ)體C4、類風(fēng)濕因子(RF)、抗鏈球菌溶血素O(ASO)、C-反應(yīng)蛋白(CRP)、轉(zhuǎn)鐵蛋白(TRF)。(2)正常人血清中加入不同濃度的特種蛋白陽(yáng)性血清調(diào)整至合適的濃度(水平1和水平2)，并加入0.5%疊氮鈉作為防腐劑和穩(wěn)定劑溫和混勻。精密分裝貼簽后低溫真空干燥。所得凍干質(zhì)控血清取出后立即加蓋封口，2～8℃保存?zhèn)溆谩Ｖ频玫蜐舛戎缚仄?水平1)和高濃度質(zhì)控品(水平2)。使用前加入域分裝時(shí)同體積的去離子水復(fù)溶。

1.3 定值 HITACHI 7170全自動(dòng)生化分析系統(tǒng)校準(zhǔn)(采用可溯源至CRM470的校準(zhǔn)品)在儀器系統(tǒng)保養(yǎng)校正、項(xiàng)目試劑、定標(biāo)試劑均為新批號(hào)重新定標(biāo)及熟練操作人員的最佳工作條件下，隨機(jī)標(biāo)本檢測(cè)20次以上，統(tǒng)計(jì)分析得出平均值和期望區(qū)間值。

1.4 穩(wěn)定性檢測(cè) 質(zhì)控品制備后于2～8℃保存，每個(gè)工作日隨機(jī)標(biāo)本檢測(cè)一次，統(tǒng)計(jì)分析檢測(cè)結(jié)果在常規(guī)條件下的變異情況。與進(jìn)口伯樂(lè)質(zhì)控品進(jìn)行比較，并作統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。

1.5 瓶間差檢測(cè) 取10瓶質(zhì)控品，每瓶測(cè)試1次，計(jì)算測(cè)試結(jié)果的平均值和標(biāo)準(zhǔn)差S1；另取上述質(zhì)控品中的一瓶連續(xù)測(cè)試10次，計(jì)算測(cè)試結(jié)果的平均值和標(biāo)準(zhǔn)差S2；計(jì)算瓶間CV%，一般瓶間CV(%)≤5%。

2 結(jié)果

2.1 自制凍干特殊蛋白質(zhì)控品的均值(x)及批內(nèi)重復(fù)精確度見表1。

2.2 穩(wěn)定性

表1 自制凍干特殊蛋白質(zhì)控品13項(xiàng)目的批內(nèi)重復(fù)(CV)和均值

自制凍干特殊蛋白質(zhì)控品第一個(gè)月、第六個(gè)月 和第十二個(gè)月結(jié)果比較見表2、3，不同時(shí)間段結(jié)果比較均無(wú)明顯差異(P＞0.05)。

表2 自制凍干特殊蛋白質(zhì)控品(水平1)第1、6和12個(gè)月結(jié)果比較(n=20)

自制質(zhì)控品與伯樂(lè)質(zhì)控品第1、6和12月變異情況比較見表4、表5，不同時(shí)間段結(jié)果比較均無(wú)明顯差異(P＞0.05)。

2.3 瓶間差

使用上述1.4中的方法測(cè)得自制質(zhì)控品水平1瓶間CV為1.86%，水平2瓶間CV為1.57%，伯樂(lè)質(zhì)控品瓶間CV為1.55%。

3 討論

作為較理想的質(zhì)控品至少應(yīng)具備以下一些特性(以臨床化學(xué)質(zhì)控品為例)：(1)人血清基質(zhì)，分布均勻；(2)無(wú)傳染性；(3)添加劑和調(diào)制物的數(shù)量少；(4)瓶間變異小；(5)凍干品復(fù)溶后穩(wěn)定，2～8℃ 時(shí)≥24h，－20℃ 時(shí)≥20d；某些不穩(wěn)定成分(如膽紅素、ALP等)在復(fù)溶后前4 h的變異應(yīng)<2%；(6)到實(shí)驗(yàn)室后的有效期應(yīng)在1年以上[1]。其中，穩(wěn)定性和瓶間差是質(zhì)控品的兩個(gè)重要性能，只有兩者據(jù)符合要求，室內(nèi)質(zhì)控品才能發(fā)揮其檢測(cè)和控制實(shí)驗(yàn)室精密測(cè)定工作的作用[3]。本研究以日常工作中檢測(cè)出的特種蛋白高濃度血清為基礎(chǔ)，以正常人血清為基質(zhì)，調(diào)整至適當(dāng)濃度，經(jīng)精密分裝和真空冷凍干燥，自制了多項(xiàng)目特殊蛋白復(fù)合凍干質(zhì)控品，以達(dá)到同時(shí)對(duì)多種臨床檢測(cè)項(xiàng)目進(jìn)行質(zhì)控、降低醫(yī)療成本的目的。制備的質(zhì)控品定制準(zhǔn)確，批內(nèi)重復(fù)好，分裝差異僅為1.86%和

表3 自制凍干特殊蛋白質(zhì)控品(水平2)第1、6和12個(gè)月結(jié)果比較(n=20)

表4 自制質(zhì)控品(水平1)與伯樂(lè)質(zhì)控品13個(gè)項(xiàng)目變異情況比較(CV%)

1.57 %；第1、6和12月結(jié)果比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)，2～8℃至少可保存 12 個(gè)月，穩(wěn)定性較好；各時(shí)間段與同類進(jìn)口質(zhì)控品變異情況比較，均無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)，可以滿足日常室內(nèi)質(zhì)控品的要求。臨床實(shí)驗(yàn)室的成本核算是一個(gè)非常現(xiàn)實(shí)的問(wèn)題，特別是2006年特種蛋白的收費(fèi)價(jià)格調(diào)整后，使用原廠質(zhì)控品高昂的代價(jià)更是讓一些中小型醫(yī)院的實(shí)驗(yàn)室望而卻步[4]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，自制特種蛋白質(zhì)控品完全能夠滿足實(shí)驗(yàn)室日常室內(nèi)質(zhì)控的要求，解決了特種蛋白質(zhì)控成本偏高的問(wèn)題，為特種蛋白檢測(cè)的全面質(zhì)量控制提供了技術(shù)和經(jīng)濟(jì)上的保證。自制質(zhì)控品含有多種特種蛋白項(xiàng)目，使儀器分析系統(tǒng)僅使用一個(gè)質(zhì)控樣本就能達(dá)到對(duì)其不同檢測(cè)項(xiàng)目的質(zhì)控，克服了單項(xiàng)目質(zhì)控品操作繁瑣的弊端，明顯降低醫(yī)療成本，同時(shí)結(jié)合目前實(shí)驗(yàn)室情況，使用方便，有利于實(shí)驗(yàn)室內(nèi)質(zhì)控扎實(shí)地開展，提高檢測(cè)質(zhì)量，具有較高的社會(huì)效益和經(jīng)濟(jì)效益。

表5 自制質(zhì)控品(水平2)與伯樂(lè)質(zhì)控品13個(gè)項(xiàng)目變異情況比較(CV%)

[1]王治國(guó),李小鵬.臨床檢驗(yàn)定量測(cè)定室內(nèi)質(zhì)控系統(tǒng)的建立[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué),2004,19(1):6-7.

[2]張 林,劉延齡.現(xiàn)代實(shí)用臨床檢驗(yàn)質(zhì)量控制學(xué)[M].陜西天則出版社,1990:187-191.

[3]任愛英,王 凡.臨床實(shí)驗(yàn)室定量測(cè)定項(xiàng)目室內(nèi)質(zhì)控品的評(píng)價(jià)方法進(jìn)展[J].中國(guó)社區(qū)醫(yī)師,2008,10(2):97.

[4]謝科杰,王 凱,張麗紅.特種蛋白室內(nèi)質(zhì)控品制備及應(yīng)用評(píng)價(jià)[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué),2009,34(5):381-383.