多項目特種蛋白復合凍干質控品的研制

林建軍，徐成國，盛小宗，何燕武，謝海寶

(浙江省寧波市象山第一人民醫院，浙江 寧波 315700)

臨床實驗室要獲得可靠的測定結果，需要建立一個全面的質量管理體系。其中，實驗室內質量控制(以下簡稱室內質控)是一個重要的環節，而質控品是保證質控工作的重要物質基礎[1]。與液體質控品和混合血清等相比較，凍干品穩定性較好，便于長期保存與運輸，是開展質控活動更理想的質控品[2]。

隨著特種蛋白基礎研究的深入和臨床治療實踐經驗的積累，特種蛋白的檢測得到了從事腫瘤基礎和臨床工作者的重視，已成為臨床檢測的重要項目之一，快速準確地檢測特種蛋白有重要的臨床價值。

但目前國內臨床實驗室特種蛋白檢測質控品主要來自國外進口或是國內實驗室配置非商品化生產。上述質控品存在諸多問題，比如：單一項目質控品操作繁瑣、進口產品價格昂貴、多項目水平質控品使用成本明顯增加，在實際使用中推廣困難、非商品化生產的質控品產品的質量及供應無法保證等。本研究旨在研制多項目特種蛋白復合凍干質控品，用于對多種臨床檢測項目同時進行質控。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑 HITACHI 7170全自動生化分析儀 (日本，HITACHI)，Bio-Rad 質控品 (美國，Bio-Rad)，Scientz-12N冷凍干燥機。

1.2 質控品的制備

1.2 .1血清基質的制備 正常人血清中每1000ml血清中加入 50%CaCl2溶液 10ml，36～37℃孵育 2～3h，4000～4500g/min，離心 5min，過濾除去血漿中的纖維蛋白，制得質控品血清基質。

1.2 .2質控品的制備 (1)收集日常工作中檢測出的特種蛋白高濃度、無溶血、無黃疸、無細菌污染剩余血清標本，用國家衛生部門認可的方法檢測標本攜帶傳染病的可能性。檢測項目包括乙型肝炎表面抗(HBsAg)、丙型肝炎抗體、艾滋病抗體(HIV 1/2抗體)、梅毒螺旋體特異性抗體。結果均為陰性的標本經56℃加熱10h滅活，離心或過濾去沉淀，-70℃冰箱保存備用。特種蛋白質控品包括下列檢測項目：載脂蛋白A1(Apo-A1)、載脂蛋白B(ApoB)、前白蛋白(PA)、β2微球蛋白(β2-MG)、IgG、IgA、IgM、補體 C3、補體C4、類風濕因子(RF)、抗鏈球菌溶血素O(ASO)、C-反應蛋白(CRP)、轉鐵蛋白(TRF)。(2)正常人血清中加入不同濃度的特種蛋白陽性血清調整至合適的濃度(水平1和水平2)，并加入0.5%疊氮鈉作為防腐劑和穩定劑溫和混勻。精密分裝貼簽后低溫真空干燥。所得凍干質控血清取出后立即加蓋封口，2～8℃保存備用。制得低濃度指控品(水平1)和高濃度質控品(水平2)。使用前加入域分裝時同體積的去離子水復溶。

1.3 定值 HITACHI 7170全自動生化分析系統校準(采用可溯源至CRM470的校準品)在儀器系統保養校正、項目試劑、定標試劑均為新批號重新定標及熟練操作人員的最佳工作條件下，隨機標本檢測20次以上，統計分析得出平均值和期望區間值。

1.4 穩定性檢測 質控品制備后于2～8℃保存，每個工作日隨機標本檢測一次，統計分析檢測結果在常規條件下的變異情況。與進口伯樂質控品進行比較，并作統計學分析。

1.5 瓶間差檢測 取10瓶質控品，每瓶測試1次，計算測試結果的平均值和標準差S1；另取上述質控品中的一瓶連續測試10次，計算測試結果的平均值和標準差S2；計算瓶間CV%，一般瓶間CV(%)≤5%。

2 結果

2.1 自制凍干特殊蛋白質控品的均值(x)及批內重復精確度見表1。

2.2 穩定性

表1 自制凍干特殊蛋白質控品13項目的批內重復(CV)和均值

自制凍干特殊蛋白質控品第一個月、第六個月 和第十二個月結果比較見表2、3，不同時間段結果比較均無明顯差異(P＞0.05)。

表2 自制凍干特殊蛋白質控品(水平1)第1、6和12個月結果比較(n=20)

自制質控品與伯樂質控品第1、6和12月變異情況比較見表4、表5，不同時間段結果比較均無明顯差異(P＞0.05)。

2.3 瓶間差

使用上述1.4中的方法測得自制質控品水平1瓶間CV為1.86%，水平2瓶間CV為1.57%，伯樂質控品瓶間CV為1.55%。

3 討論

作為較理想的質控品至少應具備以下一些特性(以臨床化學質控品為例)：(1)人血清基質，分布均勻；(2)無傳染性；(3)添加劑和調制物的數量少；(4)瓶間變異小；(5)凍干品復溶后穩定，2～8℃ 時≥24h，－20℃ 時≥20d；某些不穩定成分(如膽紅素、ALP等)在復溶后前4 h的變異應<2%；(6)到實驗室后的有效期應在1年以上[1]。其中，穩定性和瓶間差是質控品的兩個重要性能，只有兩者據符合要求，室內質控品才能發揮其檢測和控制實驗室精密測定工作的作用[3]。本研究以日常工作中檢測出的特種蛋白高濃度血清為基礎，以正常人血清為基質，調整至適當濃度，經精密分裝和真空冷凍干燥，自制了多項目特殊蛋白復合凍干質控品，以達到同時對多種臨床檢測項目進行質控、降低醫療成本的目的。制備的質控品定制準確，批內重復好，分裝差異僅為1.86%和

表3 自制凍干特殊蛋白質控品(水平2)第1、6和12個月結果比較(n=20)

表4 自制質控品(水平1)與伯樂質控品13個項目變異情況比較(CV%)

1.57 %；第1、6和12月結果比較差異無統計學差異(P＞0.05)，2～8℃至少可保存 12 個月，穩定性較好；各時間段與同類進口質控品變異情況比較，均無明顯統計學差異(P＞0.05)，可以滿足日常室內質控品的要求。臨床實驗室的成本核算是一個非常現實的問題，特別是2006年特種蛋白的收費價格調整后，使用原廠質控品高昂的代價更是讓一些中小型醫院的實驗室望而卻步[4]。本實驗結果表明，自制特種蛋白質控品完全能夠滿足實驗室日常室內質控的要求，解決了特種蛋白質控成本偏高的問題，為特種蛋白檢測的全面質量控制提供了技術和經濟上的保證。自制質控品含有多種特種蛋白項目，使儀器分析系統僅使用一個質控樣本就能達到對其不同檢測項目的質控，克服了單項目質控品操作繁瑣的弊端，明顯降低醫療成本，同時結合目前實驗室情況，使用方便，有利于實驗室內質控扎實地開展，提高檢測質量，具有較高的社會效益和經濟效益。

表5 自制質控品(水平2)與伯樂質控品13個項目變異情況比較(CV%)

[1]王治國,李小鵬.臨床檢驗定量測定室內質控系統的建立[J].檢驗醫學,2004,19(1):6-7.

[2]張 林,劉延齡.現代實用臨床檢驗質量控制學[M].陜西天則出版社,1990:187-191.

[3]任愛英,王 凡.臨床實驗室定量測定項目室內質控品的評價方法進展[J].中國社區醫師,2008,10(2):97.

[4]謝科杰,王 凱,張麗紅.特種蛋白室內質控品制備及應用評價[J].檢驗醫學,2009,34(5):381-383.