檢驗(yàn)結(jié)核分枝桿菌及結(jié)果分析

徐懿

(益陽醫(yī)學(xué)高等專科學(xué)校附屬醫(yī)院 湖南 益陽 413000）

檢出痰液中結(jié)核分枝桿菌一直是臨床診斷肺結(jié)核或鑒別肺結(jié)核與其他肺病的主要依據(jù)，涂片法簡單易行，但陽性率較低，羅氏培養(yǎng)法雖為金標(biāo)準(zhǔn)，但因周期較長，均難以滿足臨床需要。近年來，作為直接檢測分枝桿菌種系的鑒定及藥敏的許多分子生物學(xué)方法得到長足發(fā)展，這些方法能將診斷的時(shí)間從幾周縮短到幾天，其中實(shí)時(shí)熒光定量PCR(FQ-PCR)因其技術(shù)成熟，具有較高的敏感性和特異性，已逐步應(yīng)用于臨床，我們用以上3種方法同時(shí)檢測100例臨床痰液標(biāo)本結(jié)核桿菌，對結(jié)果進(jìn)行分析。

1 資料與方法

1.1 一般資料

取自本院呼吸內(nèi)科的肺結(jié)核病人100例，均選自門診和住院病人，經(jīng)X線檢查或病理學(xué)檢查確診為結(jié)核病(均系初治病人)。非結(jié)核肺部病例40例，其中肺炎23例，支氣管擴(kuò)張12例，肺癌5例。

1.2 試劑

FQ-PCR試驗(yàn)盒由中山醫(yī)科大學(xué)達(dá)安基因公司生產(chǎn)，羅氏培養(yǎng)基由浙江省結(jié)核病防治所提供，萋-納氏抗酸染色法，均按《全國結(jié)核病診斷細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)規(guī)程》[1]試劑配制、操作及結(jié)果報(bào)告。

1.3 方法

痰液直接涂片抗酸染色鏡檢；結(jié)核桿菌培養(yǎng)采用羅氏培養(yǎng)法，痰液堿前處理后，于30min內(nèi)接種完畢；熒光定量PCR痰液標(biāo)本處理：痰液根據(jù)不同性狀，加入4倍體積40g/LNaOH液化30min，取1mL液化好的痰液離心，再用生理鹽水洗滌沉淀2次，離心取沉淀加入50mLDNA提取液置水浴100℃10min裂解，取2mL做PCR模板，93℃2min預(yù)變性，93℃30s，55℃min，40個(gè)循環(huán)，結(jié)果判定，>1.0×l03拷貝／mL為陽性。

2 結(jié)果

(1)100例標(biāo)本結(jié)核桿菌檢測結(jié)果，見表1。(2)40例非肺結(jié)核病患者痰液標(biāo)本檢測結(jié)果，TB-DNA均為陰性。(3)抗酸染色、羅氏培養(yǎng)和FQ-PCR標(biāo)本結(jié)果的相關(guān)性，見表2。

表1 100例標(biāo)本檢測結(jié)果

表2 3種方法檢測結(jié)果相關(guān)性

3 討論

目前，結(jié)核病的細(xì)菌學(xué)實(shí)驗(yàn)診斷，主要依靠痰液涂片鏡檢抗酸桿菌。由于該方法陽性率不高，發(fā)展中國家此法的敏感性僅為20%～40%，發(fā)達(dá)國家達(dá)40%～60%，只能發(fā)現(xiàn)抗酸桿菌菌體。很難鑒別是死菌還是活菌[2]。羅氏培養(yǎng)，耗時(shí)是活菌才能生長，整個(gè)過程長達(dá)8～12周，已不適合現(xiàn)代短程化療的需要，但仍可繼續(xù)做藥物敏感性試驗(yàn)、菌種鑒定和毒力試驗(yàn)[3]。本文檢測結(jié)果證實(shí)，在確診的MTB患者中FQ-PCR的陽性檢出率可達(dá)58%，明顯高于培養(yǎng)法與涂片法，這與AL ZahraniK等[4]報(bào)道相反，其原因在于培養(yǎng)陽性率不高。由于FQ-PCR采用閉管操作，本文檢測的40例非MTB病人無一例為陽性，與LInuma等[5]報(bào)告的結(jié)果較為一致。因此，無論敏感性還是特異性，F(xiàn)Q-PCR法較涂片和培養(yǎng)法都有優(yōu)勢，應(yīng)當(dāng)列入MTB的常規(guī)檢驗(yàn)項(xiàng)目。

結(jié)核桿菌培養(yǎng)仍是目前診斷MTB的金標(biāo)準(zhǔn)，尤其是藥敏實(shí)驗(yàn)結(jié)果指導(dǎo)臨床用藥及耐藥性監(jiān)測等方面具有重要作用，涂片法和FQ-PCR都無法替代，但其耗時(shí)太長有待改進(jìn)。我們建議將上述3種方法同時(shí)使用，涂片和FQ-PCR法可為臨床及時(shí)提供診斷依據(jù)，培養(yǎng)及藥敏結(jié)果可指導(dǎo)臨床用藥，F(xiàn)Q-PCR定量監(jiān)測TB-DNA可用于判斷療效。

[1]中國防癆協(xié)會.結(jié)核病診斷細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)規(guī)程[J].中國防癆雜志,2006.

[2]金法祥.結(jié)核分枝桿菌實(shí)驗(yàn)室診斷3種方法的初步評價(jià)[J].現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志，2003，12：634～635.

[3]閏國蕊,臘勝明,楊建華,等.結(jié)核病五項(xiàng)實(shí)驗(yàn)檢測方法的對比分析[J].中國防癆雜志,21：165～l66.

[4]Al Zahrani K,Al jahdali H,Poirier L,el al.Aceuracy utili～ofc0lnrnercilyavml～emcalionand ogict florthedi isofminit pllltT my tubel js[J].Am J Rcspir Cift Care Med,2000,l63:l323～1329.

[5]linuma Y,Ichiym～S,Yamori S,et a1.Dia0sticvueoftl1eAm—plio0rPcRas8ayf0_riniti～ di～ ismdassess～ ntof～ lncntre ef0rlJu1rrl('nnry1)ercu s[J].Mic～id hm～und,42:281～287.