結核患者檢測 T淋巴細胞亞群的意義

王 敏,蔣 強,劉賽云,程文兵,張明霞

(深圳市第三人民醫院肝研所,廣東 深圳 518020)

結核病是全世界范圍內最普遍的傳染性疾病之一,近十年來,全球結核病的發病率呈增高趨勢。全球約有 1/3人口感染結核桿菌,其中約 900萬人為活動性結核病[1]。結核桿菌感染率很高,但發病率卻較低,表明結核病發生、發展和轉歸不僅與感染的細菌量及其毒力等因素有關,且取決于機體免疫功能。結核桿菌是胞內寄生菌,機體抗結核免疫主要是細胞免疫,決定細胞免疫強弱的主要是 T淋巴細胞亞群的數量及功能。我們應用流式細胞儀對 92例肺結核患者及 54例健康人進行了 T淋巴細胞亞群檢測,現將研究結果報道如下:

1 資料與方法

1.1 研究對象

1.1.1 肺結核患者組 選取 2008年 1月至2009年 11月本院住院及門診確診患者 92例。其中男性 54例,女性 38例,年齡 18-59歲,平均 33.7歲。

1.1.2 健康對照組 54例健康成人標本來源于本院體檢中心。其中男性 23例,女性 31例,年齡18-58歲,平均 34.9歲。均衡性檢驗顯示,肺結核患者組與健康對照組兩組之間的年齡、性別差異均無統計學意義(P＞0.05)。

1.1.3 肺結核的診斷標準 (1)痰、胸腔積液結核分枝桿菌陽性或淋巴結、胸膜、肺組織活檢證實結核者;(2)有明顯結核中毒癥狀;(3)抗結核抗體(抗 TB-Ab-IgG)吸光度值≥0.30或蛋白純化衍生物(PPD)試驗中、強度陽性;(4)胸片有典型肺結核影像改變;(5)抗結核治療有效。具備上述診斷標準第 1項或 2-5項者,診斷為肺結核。所有患者均無慢性肝炎、腎病、腫瘤等影響免疫功能的疾病。

1.2 試劑與儀器

1.2.1 試劑 采用法國 Immunotech公司的三色熒光標記的單克隆抗體 CD4-FlTC/CD8-PE/CD3-PC5;OptiLyse C免洗溶血素原液;以及自備的PBS液體;空白對照組為鼠 IgG1-FTTC/IgG1-PE/IgG1-PC5。

1.2.2 儀器 使用 Coulter Epics XL流式細胞儀(美國 Beckman Coulter公司)。

1.3 實驗方法

1.3.1 標本處理 抽取外周靜脈血 2 ml,使用EDTA抗凝。每份標本編 3支試管,其中一管立即在SFM—2000血球分析儀上進行白細胞計數與分類。其余兩管中,一管加入三標的單克隆抗體 20μl,另一管中加入對照樣本量 20μl;每管各加入全血 100 μl,充分混勻,室溫下孵育 15 min;然后在每管中加入 OptiLyse C免洗溶血素 500μl,充分混勻,室溫下孵育 15 min;在每管中加入 PBS緩沖液 500μl,混勻,室溫下孵育 10 min。

1.3.2 對照組處理 以對照管作為空白定標,淋巴細胞設門,計算 5 000個淋巴細胞,記錄標本的陽性細胞百分率。

1.4 統計學方法 各數據以(x±s)表示,采用t檢驗,方差分析,判斷各組之間的相關程度,由SPSS 10.0軟件包完成統計學分析。

2 結 果

2.1 肺結核患者 T淋巴細胞亞群檢測結果與性別、年齡的關系 見表 1、表 2。表 1說明經統計分析,肺結核患者性別間 CD3、CD4、CD8、CD4/CD8差異無統計學意義(P＞0.05)。表 2說明經統計分析,顯示成人肺結核患者各年齡組間 CD3、CD4、CD8、CD4/CD8差異無統計學意義(P＞0.05)。

表1 肺結核患者T淋巴細胞亞群檢測結果與性別的關系(x±s)

表2 肺結核患者T淋巴細胞亞群檢測結果與年齡的關系(x±s)

2.2 肺結核患者與對照組 T淋巴細胞亞群的關系 見表 3。表 3說明經統計分析,肺結核患者 T細胞亞群比較,除 CD8增高外,CD3、CD4、CD4/CD8均明顯降低,與對照組比較差異均有統計學意義(P＜0.05)。

表3 肺結核患者與對照組T淋巴細胞亞群數據對比分析(x±s)

3 討 論

結核桿菌是胞內寄生菌,機體抗結核免疫主要是細胞免疫,決定細胞免疫強弱的主要是 T淋巴細胞亞群數量及功能。自 1979年 Kung和 Goldstein等[2]首次報道 T細胞單克隆抗體 OKT系列制備成功以來,對人 T細胞的研究提供了有力的工具。研究發現 T淋巴細胞在機體免疫過程中起著中心樞紐的作用,它不僅發揮著細胞免疫功能,而且是體液免疫不可缺少的組成部分。正常免疫應答的形成有賴于 T淋巴細胞亞群(主要是CD4與 CD8)之間的相互促進或相互制約。輔助性 T淋巴細胞(CD4)和抑制性 T細胞(CD8)是免疫調節的中心環節。Syriala等[3]研究表明,CD4/CD8比值降低是疾病嚴重和不良的重要指標之一,機體對結核桿菌的免疫以細胞免疫為主,通過效應 T淋巴細胞直接殺滅結核桿菌,輔助性 T淋巴細胞可促進效應 T淋巴細胞的殺菌功能,并釋放大量淋巴因子發揮抗結核作用。抑制性T淋巴細胞抑制機體的細胞和體液免疫功能,導致機體免疫力下降。本文結果顯示,肺結核患者與健康對照組相比 CD3、CD4、CD4/CD8明顯降低,而 CD8明顯增高(P＜0.05),與有關報道一致[4]。提示結核發病與機體免疫力下降有關,免疫功能正常的機體感染結核分枝桿菌后,可誘導 T細胞活化成為致敏的 T淋巴細胞產生各種細胞因子,從而殺滅結核分枝桿菌,使機體免于發病,使病灶局限。若免疫功能異常,則可導致發病或病灶惡化[5]。肺結核患者痰菌陽性是結核病進展、結核病變開放的重要指標,從上面的實驗結果可看出,結核病患者的 CD3、CD4陽性細胞數及 CD4/CD8比值均低于正常對照組,差異具有統計學意義(P＜0.05),尤其是 CD4/CD8陽性細胞比值差異具有統計學意義(P＜0.05)。結果表明 T淋巴細胞亞群在一定程度上可反映結核病患者的細胞免疫水平,檢測病人外周血中 T淋巴細胞亞群數及比例可以判斷受檢者的細胞免疫水平,特別是 CD4/CD8比值比單項 CD3、CD4、CD8敏感。可能是由于結核病患者免疫力低下,從而導致 CD4/CD8陽性細胞比例失調,病情嚴重患者的 CD4/CD8陽性細胞比值長期降低。CD4下降使效應 T細胞殺菌活性降低,與殺菌有關的淋巴因子分泌減少,CD8升高直接抑制機體免疫力,使結核菌繁殖而發病。

本文結果表明,T淋巴細胞亞群變化可作為判斷肺結核免疫功能的指標之一,相信隨著對結核病的發病及免疫病理損傷機理研究的深入,將在臨床診斷、預后判斷及預防和治療中,發揮重要作用。

[1] Aziz MA,Wright A.The world health organization/international union against tuberculosisand lung disease global project on surveillance for anti-tuberculosis drug resistance:A model for other infectious diseases[J].Clin Infect Dis,2005,41(4)∶258-262.

[2] Reinher EL,Sehlosnman SF.The differentiation and function of human T lymphocytes[J].Cell,1980,19∶821.

[3] Syriala H,Surcel HM,Honen J.Low CD4/CD8lymphocyte ratio in acute myocardial infarction[J].Clin Exp Immunol,1991,83∶326.

[4] 費曉峰,吳建鴻.肺結核患者血清中 IAP和 T淋巴細胞亞群關系的研究[J].中國防癆雜志,2003,25(6)∶388-390.

[5] 閻世明,余秉真,周善德,等.老年肺結核患者周圍血 T淋巴細胞亞群的觀察[J].中華老年醫學雜志,1990,9(3)∶172.