寡克隆帶檢測在小兒中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染疾病的應(yīng)用價值

肖持堅,李小敏,黎 敏,郭柳微,李穎莉

(梧州市工人醫(yī)院,廣西 梧州 543000)

在小兒常見的幾種神經(jīng)系統(tǒng)疾病中,如中樞系統(tǒng)炎性疾病[尤其是多發(fā)性硬化(MS)],檢測腦脊液寡克隆帶(OCBs)是其診斷的一項重要指標(biāo)。國內(nèi)外研究表明診斷 MS的 90%-95%患者其 CSF可以檢測到 OCBs[1],而在其他一些神經(jīng)系統(tǒng)炎性疾病,包括大腦的病毒感染、神經(jīng)梅毒、狼瘡性腦病等,腦脊液 OCBs的檢測陽性率亦有 24%-50%,故其可能對這些疾病的診斷有幫助[1-4,10]。在病毒性腦炎癥中,常常出現(xiàn)腦脊液蛋白質(zhì)濃度的升高,其中部分是由于血腦屏障的受損,而另一部分是由于內(nèi)源性合成增加,而后者,即內(nèi)源性的合成增加,并伴有免疫球蛋白的異質(zhì)性,可以在高分辨率的電泳過程中出現(xiàn)單克隆帶,具有特征性。目前中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染疾病的發(fā)生機(jī)制不明,為此,本研究對 46例患者的 OCBs進(jìn)行分析,報道如下:

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取 2005-2007年期間在我院兒科住院的總共 46例確診為中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染性腦病的患兒,其中病毒性腦炎 33例,其他顱內(nèi)感染 13例(結(jié)核性腦膜炎 5例,化膿性腦膜炎 5例,新型隱球菌腦膜炎 3例);男性 31例,女性 15例,年齡最大 13歲,最小 6個月,平均 4.5歲。

1.2 方法

1.2.1 基本方法 所有患兒入院后均做腰穿取 3 ml腦脊液,并同日抽外周血血清 2 ml,根據(jù)病情需要或腦脊液異常,則重復(fù)腰穿留置標(biāo)本,所有標(biāo)本都置于 -20℃保存待測。

1.2.2 腦脊液常規(guī)檢測 所有腦脊液標(biāo)本都檢測并記錄白細(xì)胞數(shù)目、細(xì)胞分類、蛋白定量、葡萄糖水平,做病原學(xué)篩查。

1.2.3 寡克隆帶檢測 采用瓊脂糖凝膠免疫固定電泳(IFE)的方法對采集的腦脊液和血清標(biāo)本予以檢測,經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳將蛋白質(zhì)分離后,再采用免疫固定技術(shù),抗 IgG酶標(biāo)抗血清加入凝膠片上,利用高度特異抗體標(biāo)記的酶,在固相酶免疫反應(yīng)中進(jìn)行顯色后使樣本呈現(xiàn)寡克隆區(qū)帶,并對此寡克隆區(qū)帶的免疫球蛋白的性質(zhì)予以確定。對在腦脊液標(biāo)本出現(xiàn)異常區(qū)帶(OCBs)而血清標(biāo)本無相應(yīng)區(qū)帶出現(xiàn),或腦脊液和血清標(biāo)本均出現(xiàn)異常區(qū)帶,而腦脊液出現(xiàn)不同于血清≥2個以上的異常區(qū)帶視為陽性。所有 CSF和血清的標(biāo)本 OCBs檢測都通過法國西比亞全自動電泳分析儀(HYDRASYS.SEBIA.PN1211)完成,并且由兩個通過培訓(xùn)的實驗室人員分別執(zhí)行,以同樣的陽性結(jié)果為準(zhǔn)[5-6]。

1.2.4 記錄 記錄每個患者的臨床表現(xiàn)、腦電活動和影像學(xué)異常發(fā)現(xiàn),OCBs陽性患者出院后隨訪1-24個月。對病毒性腦炎組 OCBs陽性、非陽性病人的臨床嚴(yán)重程度、腦脊液數(shù)據(jù)進(jìn)行比較。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法 計數(shù)資料比較采用 x2檢驗,定量資料兩樣本均數(shù)比較應(yīng)用 t檢驗。

2 結(jié) 果

46例患者中,CSF-OCBs陽性者有 10例,陽性率為 21.7%,其中病毒性腦炎組 7例,非病毒性腦炎組 3例。兩組比較其 OCBs陽性率差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。見表 1。

表1 兩組 OCBs陽性與陰性比較(例)

病毒性腦炎組 29人次腦電圖描記異常,占87.8%,主要異常表現(xiàn)為彌漫或局部慢波發(fā)放,檢查頭顱 CT,異常率占 17%,頭顱核磁共振檢查 12人次,異常率 41%,OCBs陽性組均檢查頭顱核磁共振,異常 2例,均為局部腦實質(zhì)炎癥改變。病毒性腦炎組根據(jù) OCBs陽性與否分兩組,比較它們之間臨床輕重程度,腦脊液細(xì)胞數(shù)、蛋白定量差異無統(tǒng)計學(xué)意義 ,見表 2。

10例 OCBs陽性病例中重復(fù)腰穿腦脊液持續(xù)陽性 2例,1例是腮腺炎和病毒性腦炎,1例是隱球菌腦膜炎,病程時間均 ＞4周,后者多次行腰穿涂片查隱球菌陽性。

9例 OCBs陽性患者經(jīng)治療好轉(zhuǎn),隨訪 24個月,無再次神經(jīng)系統(tǒng)損傷的臨床表現(xiàn)。另外 1例隱球菌腦膜炎多次腰穿腦脊液 OCBs持續(xù)陽性,出現(xiàn)多條異常區(qū)帶,該患兒住院 10周,因經(jīng)濟(jì)困難自動出院,失去隨訪。

表2 病毒性腦炎組臨床數(shù)據(jù)比較結(jié)果[例(%),x±s,n=33]

3 討 論

檢測腦脊液和血清寡克隆帶廣泛應(yīng)用于神經(jīng)系統(tǒng)炎癥性疾病的臨床診斷上,它證明神經(jīng)中樞本身參與活躍的免疫應(yīng)答。OCBs是一項靈敏的定性指標(biāo),其陽性存在表明中樞神經(jīng)系統(tǒng)有其本身合成的免疫球蛋白。在國內(nèi)外的臨床研究中,OCBs陽性可出現(xiàn)在多發(fā)性硬化和中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染疾病,前者大多血清檢測陰性而 CSF陽性,后者可有血清、腦脊液陽性,腦脊液陽性區(qū)帶異于血清的表現(xiàn)形式,提示其 OCBs陽性區(qū)帶可能與多發(fā)性硬化的意義不同[7-8]。

本研究應(yīng)用瓊脂糖凝膠免疫固定電泳方法檢測中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染疾病 CSF-OCBs,其陽性率為21.7%,與國內(nèi)、國外相關(guān)研究結(jié)果接近或偏低,考慮為由于本組研究的患兒在治療上大多應(yīng)用皮質(zhì)激素,可能造成 OCBs陽性率偏低。病毒性腦炎組陽性率為 21.2%(7/33),與非病毒性組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義,提示 CSF-OCBs與感染病原無關(guān),OCBs可作為腦脊液異質(zhì)性免疫球蛋白出現(xiàn)的定性指標(biāo),但對病因診斷為非特異性指標(biāo)。

病毒性腦炎組中根據(jù)寡克隆帶陽性與否分組,比較其臨床表現(xiàn)的輕重、腦脊液細(xì)胞計數(shù)、蛋白定量分析,其差異無統(tǒng)計學(xué)意義,隨訪的 OCBs陽性病兒臨床無新的神經(jīng)系統(tǒng)損傷癥狀和體征,顯示在中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染疾病中,OCBs出現(xiàn)的機(jī)制不明,往往顯示一過性,常見的一些神經(jīng)系統(tǒng)疾病臨床特征如腦脊液的白細(xì)胞數(shù)目、蛋白總量不能反映 OCBs的出現(xiàn)意義;一例腮腺炎和病毒性腦炎、一例隱球菌腦膜炎重復(fù)腰穿 OCBs持續(xù)陽性,后者多次涂片均找到隱球菌,OCB異常帶顯示多條陽性。2個病例病程均 ＞4周,支持“持續(xù)活動的感染、血腦屏障功能受損或病毒誘導(dǎo)顱內(nèi)免疫紊亂可能與 OCBs陽性有關(guān)”的推測[9-11]。

小兒中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染可引起體液和顱內(nèi)免疫紊亂,應(yīng)用瓊脂糖凝膠免疫固定電泳方法檢測OCBs,敏感性可達(dá) 70%-85%,而檢驗要求和價格比等電聚焦加免疫印跡等技術(shù)更簡單、省時和便宜,值得在普通兒科神經(jīng)內(nèi)科推廣[6]。

CSF-OCBs檢測陽性可反映顱內(nèi)自身免疫球蛋白鞘內(nèi)合成,不單單是應(yīng)用于某個病人考慮脫髓鞘病變的診斷,如多發(fā)性硬化,它具有更多的臨床意義。綜合分析其在神經(jīng)系統(tǒng)炎性疾病,如對小兒中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染疾病的診斷和發(fā)病機(jī)制甚至治療上有重要的參考價值。

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