艾葉的體外凝血作用實驗研究*

張袁森，張 琳，倪 娜，劉慧敏，王小琴，洪 穎，洪宗國

（中南民族大學民族醫藥研究中心，武漢 430074）

艾葉的體外凝血作用實驗研究*

張袁森，張 琳，倪 娜，劉慧敏，王小琴，洪 穎，洪宗國

（中南民族大學民族醫藥研究中心，武漢 430074）

[目的]傳統中醫常用艾炭作為止血藥，且具有較好的止血作用，探討止血的原理。[方法]將艾葉不同組分進行分離，或按傳統方法炮制，得到6種組分：鞣酸、艾焦油、5-叔丁基連苯三酚、艾炭、艾灰、艾葉揮發油。用家兔分別進行體外凝血實驗，得出實驗結果。[結果]凝血作用強弱順序為鞣酸＞艾焦油＞5-叔丁基連苯三酚＞艾炭＞艾灰＞艾葉揮發油。其中添加揮發油凝血時間長于對照品生理鹽水，故為活血組分。[結論]中醫采用艾炭止血有一定的科學性，但是艾炭的凝血效果是最差的，艾葉鞣酸才是真正的凝血物質。為了解艾炭的止血原理，開發新的止血藥創造了條件。

艾葉；鞣酸；艾炭；艾焦油；5-叔丁基連苯三酚；凝血作用

艾葉為菊科植物艾的干燥葉，味苦，微溫，無毒。有理氣血，逐寒濕、溫經、止血、安胎等作用。用于少腹冷痛，經寒不調，宮冷不孕，吐血，崩漏經多，妊娠下血；外治皮膚瘙癢。醋艾炭溫經止血，用于虛寒性出血癥。為了解艾葉中止血有效成分，筆者對艾葉不同組分進行分離或按傳統方法進行炮制，制備出不同樣品并分別進行體外凝血實驗，從中尋找其最佳凝血組分，并分析其結構，為開發新型止血藥物創造條件。

1 實驗

1.1 材料和儀器 健康家兔，體質量2～4 kg，常規飼料喂養。手術刀片、試管、試管架、剪刀、鑷子、干棉球、微量加樣器、標簽紙、稱量紙、天平、37℃恒溫水浴鍋、酒精棉球、生理鹽水（規格：100mL）、干棉球等市售。艾葉采自湖北蘄春，品質鑒定蘄春縣藥工辦郭雙喜，采集時間2009年端陽節。丙酮、甲醇、白醋為市售，蒸餾水自制。

1.2 樣品的制備

1.2.1 醋艾炭 按《中華人民共和國藥典》2005年版方法[1]，將凈艾葉100 g置鍋內用中武火炒至黑色，噴淋15 g米醋，滅盡火星，生炒干，取出及時攤晾，涼透。炮制后形如艾葉，黑褐色，有焦糊氣，略有醋氣。再搗碎成粉末。

1.2.2 鞣酸 用2∶3的丙酮水溶液250mL浸泡10 g艾葉絨30min,150MHz超聲提取20min。抽濾得到濾液，旋轉蒸發儀蒸去丙酮和水，收集燒瓶中剩余部分即得鞣酸[2]。

1.2.3 艾焦油 將艾葉200 g放入鐵鍋中，用暗火燃燒，其上蓋玻璃板，收集其在玻璃罩上凝結而成的油狀物，待其冷卻，將其刮下，即為艾焦油。

1.2.4 揮發油 用蘄艾油簡式提取設備[3]按《蘄艾油簡式提取方法》[4]提取。100 g艾絨，浸泡30min，超聲提取45min，4倍量的水采用水蒸汽蒸餾4～6 h。

1.2.5 5-叔丁基連苯三酚 市售。

1.2.6 艾灰 將艾葉直接暗火燒盡得冷卻即得艾灰。

1.3 實驗方法 取刻度試管14支，分別加入樣品鞣酸、艾焦油、5-叔丁基連苯三酚、艾炭、艾灰各0.05 g，艾葉揮發油、生理鹽水各1滴（約0.05 g），每種樣品各兩支試管。耳靜脈采血法取兔血，每試管1mL，將試劑與血液迅速混勻后置37℃恒溫水浴鍋內。每隔5 s輕輕傾斜試管1次，至血液不再流動即血液凝固為止，記錄全凝血時間，再分別計算各組分的凝血時間。重復體外凝血實驗，取重復性好數據。

2 結果與 討論

2.1 凝血效果 按1.3實驗方法分別測定不同樣品的凝血時間，結果見表1。

由表1可知，不同樣品的凝血作用順序為鞣酸＞艾焦油＞5-叔丁基連苯三酚＞艾碳＞艾灰＞生理鹽水＞艾揮發油。

2.2 艾葉揮發油的活血作用 由表1可知，艾葉揮發油凝血時間長于對照品生理鹽水，故實際為活血成分。艾葉揮發油化學成分為萜類物質[5]，是艾灸與搽劑的主要藥物成分，有通經活絡，活血化瘀作用。故中醫將艾葉作為止血劑使用時，必須將活血的揮發油除去，這是中醫將艾葉炒炭炮制工藝的主要目的。盡管傳統中醫并沒有意識到這一點。

2.3 艾炭的凝血作用 表1表明艾炭確實具有凝血作用。證明了傳統中醫療法的有效性。但艾炭在實驗樣品中的凝血作用是除揮發油外最弱的，這是由于雖然炒炭工藝去除了活血的揮發油，但包含了艾葉炒制后所有的成分，真正的有效成分只占其中的一小部分。其次，加入米醋的目的是與酚羥基形成酯，防止酚類物質在炒制工藝中被氧化成醌，但此工藝可能減弱了其凝血作用。炒制工藝使艾葉中鞣酸、黃酮等成分發生了分解，文獻報道黃酮多具有活血作用[6]，這種分解有利于艾炭的凝血作用，但鞣酸的分解對凝血作用的影響如何還需要進一步研究。

2.4 艾葉鞣酸的凝血作用 表1中鞣酸具有最強的凝血作用。鞣酸具有澀性，有收斂與止血功能。原因在于鞣酸中存在大量絡合基團能與血液中金屬離子產生絡合作用，從而使血液凝聚。艾葉中含有大量的鞣酸，其中產于蘄春的蘄艾其鞣酸含量更高達13%，可作為止血凝血劑的理想原料。艾葉中含有多種不同結構的鞣酸，需要進一步分離繼而分別研究其凝血作用。

2.5 艾葉燃燒焦油和5-叔丁基聯苯三酚的凝血作用 艾葉燃燒后產生焦油，主要成分為艾葉鞣酸與黃酮等大分子裂解后的較大碎片，其中有大量的長鏈烴類和酚類物質，后者具有絡合功能和止血凝血作用。但由于酚類物質在艾葉燃燒焦油中比例較小，故整體上的凝血效果小于鞣酸。在艾葉燃燒物的重組分和焦油中均含有5-叔丁基連苯三酚[7]，它具有強的抗自由基、抗氧化、抗菌作用，同時本實驗證明它也具有強的凝血作用，但它在焦油的各組分中并非最強的凝血物質。

3 結論

筆者分別制備不同艾葉組分和按傳統工藝炒制艾炭，進行體外凝血實驗，結果表明凝血作用順序為鞣酸＞艾焦油＞5-叔丁基連苯三酚＞艾碳＞艾灰＞生理鹽水＞艾油。鞣酸具有最強的凝血作用，艾揮發油具有活血作用。

傳統中醫艾炭炒制工藝通過去除艾葉中的揮發油從而除去活血成分，并保留其他凝血成分，使艾炭具有凝血止血功能。加入米醋能保護酚羥基，防止炒制過程中氧化，均體現了該工藝的合理性。

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典[M].北京：化學工業出版社，2005：61-61.

[2]張 建，李寶坤，毛曉英.超聲波提取葡萄梗中單寧的研究[J].安徽農業科學，2008.36(23):9828-9830.

[3]洪宗國.蘄艾油簡式提取設備：中國，ZL01212203[P].2001-11-01.

[4]洪宗國.蘄艾油簡式提取方法:中國，ZL01106404[P].2003-10-15.

[5]洪宗國，余學龍，陳藝球.蘄艾、北艾、川艾揮發油化學成分比較研究[J].中草藥,1996,27（3):138-139.

[6]楊宇杰，董曉強，郭金甲.山楂葉總黃酮活血化瘀作用實驗研究[J].河北醫學，2009,15(1):22-23.

[7]楊 梅，江 丹，洪宗國，等.艾葉燃燒物的抗自由基作用[J].中南民族大學學報，2008,27（3）:48-49.

Experimentstudy on externalhemagglutination testof argywormwood leaf

ZHANGYuan-sen,ZHANG lin,NiNa，etal
（NationalMedicine Research Center， South-CentralUniversity for Nationalities， Wuhan 430074，China）

[Objective]Argywormwood leaf carbonwascommonly used asa hemostatic by traditionalChinese doctorsbecause itshowed abetter role in hemostasis.We conducted an experiment in order to investigate the principlesofhemostasis.[Methods]After separating the differentcomponentsofArtemsiaargyior concocting them by traditionalmethods,we separated 6 kind of components:tannin,Artemsia argyi tar,5-tert-butyl trihydroxybenzene,Artemsia argyicarbon,Artemsia argyiash and Artemsia argyivolatile oil.Their coagulation effect then detected in vitro.[Results]The results showed that themosteffective componentwas tannin,followed by Artemsia argyi tar,5-tert-butyl trihydroxybenzene,Artemsia argyi carbon,Artemsia argyi ash,and Artemsia argyi volatile oil.Among them.Artemsia argyi volatile oilhad someblood-activating componentsince itcould prolong the clotting time ifadding.[Conclusion]Ourexperimenthasestablished the conditions forunderstanding the processingmechanism of Artemsia argyicarbon and developed a new hemostatic.Themost effective componentwas tannin.

Artemsia argyi；tannin；Artemsia argyicarbon；Artemsia argyitar；5-tert-butyl trihydroxybenzene；the coagulation effect

R285.5

A

1672-1519(2010)02-0156-02

2009年中南民族大學大學生創新科研基金（本科）（KYCX090503Z）。

張袁林（1989-），男，中南民族大學2007級藥物制劑專業學生。

洪宗國。

2009-11-13）