絨毛染色體異常在胚胎停育中的細胞遺傳學分析

田麗 王玉新 張石嶺 郭文潮

胚胎停育是婦科的常見病之一。合子內在的缺陷是引起胚胎早死及胚胎停育的重要原因。本文對 69例胚胎停育絨毛進行染色體分析,報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 69例絨毛來自因有自然流產先兆,前來河北省人民醫院婦科門診、三優門診就診以及在婦科病房住院的患者,均 B型超聲(B超)檢查提示：“胚胎停育”或“難免流產”,而行清宮術。流產胚胎在孕 37～80 d,孕婦年齡 20～40歲。

1.2 絨毛染色體的直接制備法 在無菌負壓吸宮術中獲得絨毛組織,選出優質絨毛組織約 10mg左右,直接放入預溫 37℃低滲液(1%枸櫞酸鈉內含秋水仙素 0.1～0.4μg/ml)5 ml,混勻。低滲 30 min。預固定加甲醇冰醋酸 =(3∶1)1 ml,混勻5min。更換新鮮固定液室溫固定 30m in。然后棄去固定液,順管壁加入 60%冰醋酸 1m l,1～2m in,由管底部緩緩加入甲醇3ml,然后輕輕混勻,10 min(在固定 5min時用滴管把絨毛挑出)然后離心 5m in去上清液。在加入新鮮固定液 2～3滴,輕輕混勻,以冰片進行滴片,立即放入 60℃烤箱 16～24h或 37℃放置 72 h。自然令卻后即可顯帶,核型分析 3個,計數 20個以上[1]。結構異常或嵌合體增加計數及分析。同時對 69例夫婦進行外周血染色體分析。

2 結果

在對 69例絨毛染色體進行核型分析中,正常核型 33例,異常核型 36例,異常率為 52.17%。絨毛染色體異常核型見表1。

3 討論

孕早期胚胎染色體異常是胚胎停育最重要的原因之一。自然流產胚胎染色體畸變者約占流產胚胎的 42%[2]。國內外文獻均有報道：自然流產中胚胎染色體異常約占 50%左右。本文結果顯示胚胎染色體異常率 52.17%與報道相近。大約70%的人類胚胎都在著床前后死亡,染色體的非整倍體被認為是造成人類胚胎這種低著床率和早期丟失的一個重要原因。這種染色體數目畸變的主要發生源自雙親之一方的配子形成時或妊娠初期受精卵卵裂時出現染色體不分離,則導致該染色體增多或減少一條,亦即導致三體性或單體性。21-三體在活產兒中最常見,13-三體、18-三體也常可見,而其它常染色體三體的罕見大多導致流產。性染色體的三體在活產女嬰中有見,性染色體的單體性不僅見子流產兒,也見于兒童或成人。在本文流產絨毛染色體分析中,常染色體三體是最多見的數目畸變,檢出 32例,占異常核型的88.9%(32/36),它涉及 2、3、7、8、13、14、16、21、和 22號染色體。 性染色體單體數目畸變,本文 4例,占異常核型的 11.0%(4/36),45,x,這種畸變,除減數分裂時性染色體不分離,導致減少一條性染色休外,其中大約 3/4是父系性染色體丟失[3]。

表 1 絨毛染色體異常核型

三倍體在流產兒中也十分常見。本文 2例,占 5.6%(2/36),這種染色體的數目異常可源自新的突變,或源自雙親之一方配子形成中的異常有絲分裂或源自精母細胞或卵母細胞減數分裂中的異常,也可源自雙受精等。這類染色體異常一般在孕 8周以前流產,曾有極少數純三倍體的活嬰報告[4]在流產絨毛染色體分析中,染色體結構異常本文檢出 4例(常染色體結構異常 3例,性染色體結構異常 1例)。例 1：染色體核型：13-三體,雙親外周血染色體檢查均正常,異常染色體來自新的突變。例 2：染色體核型：46;XY,-13,+der(13)t(5;13)(5q22;13p 13),雙親外周血染色體檢查,父親核型正常,母親核型為 46,XX,t(5;13)(q22;p 13)。異常染色體來自母親相互易位的染色體配子,在減速分裂中,通過同源染色休間的配對、交換和分離,形成 18種類型的配子,其中一種異常配子與正常配予結合,即形成為 5號染色體長臂部分,13號染色體短臂部分單體的衍生染色體胚胎導致流產。例 3：46,XY,inv(9)/46,inv(9),-7,+der(7)t(7;13)(7q35;I3q13),雙親外周血染色體檢查,父親核型正常,母親核型為 46,XX,inv(9)的9號染色體臂間倒位,屬于多態變異,它在人群中的發生率為1%[5]。多態現象通常沒有不良的臨床后果。但目前許多資料都傾向于多態現象與異常妊娠有關。9號染色體臂間倒位的遺傳主要決定于重復的或缺失片斷的長短及其所含基因的致死效應[6]。本文出現的嵌合型染色體異常,是否與之相關,尚待進一步研究。本文另一例 9號染色體臂間倒位者,其絨毛染色體核型為：47,XY,inv(9),+21。例 4：46,xy(y≥18),父親核型為 46,XY(y≥18),母有二次胚胎停育史,之后,隨訪生育一正常女孩。Y染色體大小差異亦屬于多態變異,大Y異染色質中 DNA過多重復在某些方面可能造成有絲分裂發生錯誤或影響基因調節及細胞分化紊亂[7],從而導致不良妊娠結局。染色體異常是導致胚胎停育的重要因素之一。進行染色體檢查,對胚胎停育的病因、診斷及再次妊娠具有重要的指導意義。

1 朱俊真,左一鵬主編.產前實驗室診斷.第 1版.石家莊：河北科學技術出版社,1992.31.

2 夏家輝,李麓蕓主編.染色體病.第 1版.北京：科學出版社,1989.269.

3 夏家輝,李麓蕓主編.染色體病.第 1版.北京：科學出版,1989.226.

4 周煥庚,夏家輝,李麓蕓主編.人類染色體.第 1版.北京：科學出版社,1987.249.

5 夏家輝,李麓蕓主編.染色體病.第 1版.北京：科學出版社,1989.273.

6 郭小寶,阮永銘,李文典,等.9號染色體臂間倒位的遺傳效應分析.中華醫學遺傳學雜志 ,2006,23：365.

7 巫新春,曹云霞,從林,等.50對胚胎停育夫婦染色體分析.中華醫學遺傳學雜志,2006,23：112.