PAPP-A、sICAM-1和 sVCAM-1變化與子癇前期的關(guān)系

張軍英 韓霞 馬京華 牟桂軍 趙巖紅

子癇前期患者,當(dāng)其他蛋白未受到影響時(shí),妊娠相關(guān)血漿蛋白-A(PAPP-A)水平已開(kāi)始升高,它可作為判定胎盤(pán)功能、預(yù)測(cè)疾病發(fā)展進(jìn)程的重要指標(biāo)[1]。研究證實(shí)子癇前期發(fā)病的中心環(huán)節(jié)是廣泛的血管內(nèi)皮受損及功能障礙,內(nèi)皮細(xì)胞激活是子癇前期的重要病理起因,可溶性細(xì)胞黏附分子-1(sICAM-1)和可溶性血管細(xì)胞黏附分子-1(sVCAM-1)在子癇前期患者血清中有濃度升高趨勢(shì)[2]。為初步探討子癇前期患者血中 PAPP-A水平與血管內(nèi)皮細(xì)胞活性的相關(guān)性,本文對(duì) 115例子癇前期患者血清的 PAPP-A、sICAM-1和sVCAM-1水平進(jìn)行檢測(cè)。

1 資料與方法

1.1 資料來(lái)源 選擇 2006年 4月至 2007年 3月在我院門(mén)診進(jìn)行產(chǎn)前檢查的子癇前期患者115例(子癇前期組),入選患者復(fù)合《婦產(chǎn)科學(xué)》(第 6版)的診斷標(biāo)準(zhǔn),年齡 23～36歲,孕周34～40周。正常對(duì)照組 127例,為隨機(jī)選取的與子癇前期組同期分娩的正常健康孕婦,年齡 22～35歲,孕周 35～40周。

1.2 方法

1.2.1 采血：取靜脈血 5 ml,置于檸檬酸鈉的試管內(nèi),4℃、1 500 r/m in離心 20min。取上層血清貯于 -20℃待測(cè)。

1.2.2 PAPP-A檢測(cè)：采用河北省計(jì)生委科研所提供的 PAPPA檢測(cè)試劑盒。采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫方法測(cè)定PAPP-A蛋白含量,PAPP-A多抗將孕婦血清中的 PAPP-A結(jié)合在酶標(biāo)板上。然后通過(guò)辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的PAPP-A單克隆抗體介導(dǎo)酶促反應(yīng)對(duì)PAPP-A蛋白進(jìn)行定量。每次實(shí)驗(yàn)均設(shè)質(zhì)控及標(biāo)準(zhǔn)曲線,當(dāng)相關(guān)系數(shù)(r)達(dá) 95%以上實(shí)驗(yàn)有效。根據(jù)相關(guān)軟件輸入該次試驗(yàn)蛋白標(biāo)準(zhǔn)溶液各點(diǎn)OD值及樣品 OD值,進(jìn)入分析窗口給出樣本濃度值。

1.2.3 sICAM-1和 sVCAM-1檢測(cè)：均采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA),試劑盒購(gòu)于美國(guó) BBL公司。操作嚴(yán)格按說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。過(guò)程如下：系列稀釋的 sICAM-1和 sVCAM-1標(biāo)準(zhǔn)品和稀釋的待測(cè)血清 100μl加入 96孔酶標(biāo)板,再加生物素標(biāo)記的抗sICAM-1或 sVCAM-1抗體 50μl,室溫下孵育 1 h,用洗滌液洗 3次,每孔加 100μl辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的鏈霉素親和素,室溫下孵育 20m in,按常規(guī)加底物 3,3,5,5-四甲基聯(lián)苯胺(TMB)顯色,于酶標(biāo)儀上測(cè)各孔 A 450 mm值。根據(jù)不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)血清 A450 mm值作標(biāo)準(zhǔn)曲線,計(jì)算待測(cè)樣本血清 sICAM-1和sVCAM-1濃度。

2 結(jié)果

2.1 2組血清中PAPP-A水平比較 子癇前期組 PAPP-A水平明顯高于正常對(duì)照組(P＜0.05)。見(jiàn)表 1。

表1 2組PAPP-A、sICAM-1和sVCAM-1檢測(cè)結(jié)果比較 ±s

表1 2組PAPP-A、sICAM-1和sVCAM-1檢測(cè)結(jié)果比較 ±s

注：與對(duì)照組比較,＊P＜0.05

項(xiàng)目 子癇前期組(n=115) 對(duì)照組(n=127)PAPP-A(mU/m l) 181±32＊ 69±5 sICAM-1(ng/ml) 287±11＊ 207±18 sVCAM-1(ng/m l) 523±15＊ 151±11

2.2 2組血清中 sICAM-1、sVCAM-1水平比較 子癇前期組sICAM-1和 sVCAM-1水平明顯高于正常對(duì)照組(P＜0.05)。見(jiàn)表 1。

2.3 2組血清中 PAPP-A、sICAM-1和sVCAM-1水平相關(guān)性子癇前期組血清中PAPP-A水平與sVCAM-1水平呈正相關(guān)(r=0.56,P＜0.05)。子癇前期組血清中PAPP-A與 sICAM-1水平、正常對(duì)照組血清中PAPP-A水平與 sICAM-1、sVCAM-1水平均無(wú)相關(guān)性(P＞0.05)。

3 討論

3.1 正常妊娠及子癇前期時(shí)PAPP-A水平變化 PAPP-A是一種大分子糖蛋白,相對(duì)分子質(zhì)量為 750 000。PAPP-A由胎盤(pán)合體滋養(yǎng)層和蛻膜產(chǎn)生,屬于α2巨球蛋白,具有激活補(bǔ)體,起免疫抑制的作用,孕早期就可以在母體血清中檢測(cè)到,在正常妊娠過(guò)程中隨著妊娠進(jìn)展,母體PAPP-A水平繼續(xù)升高,當(dāng)其他妊娠蛋白水平開(kāi)始下降時(shí),母血PAPP-A水平仍在升高,到妊娠足月時(shí)達(dá)高峰此時(shí)母血 PAPP-A水平是羊水的 10倍,而整個(gè)妊娠期間,胎血中測(cè)不到PAPP-A,這是因?yàn)?PAPP-A相對(duì)分子質(zhì)量大,不能透過(guò)胎盤(pán)進(jìn)入血循環(huán),產(chǎn)后2～3 d在母血中即測(cè)不出。它是惟一一種在母血中濃度最高,羊水中次之,胎血中不含有的妊娠蛋白。其來(lái)源于絨毛周?chē)w維蛋白,生物功能尚不完全清楚,可能具有免疫抑制、保護(hù)胎兒免遭排斥的作用。當(dāng)自然流產(chǎn)、異位妊娠、宮內(nèi)胎兒發(fā)育遲緩(IUGR)、胎死宮內(nèi)時(shí),母血PAPP-A呈低值,這與胎盤(pán)功能不足使其合成減少有關(guān)[3,4]。有研究表明,子癇前期患者血清中PAPP-A水平已開(kāi)始升高,它可作為判定胎盤(pán)功能,預(yù)測(cè)胎兒高危程度及先兆子癇發(fā)展程度的指標(biāo)[1,5]。本研究結(jié)果與此一致。

3.2 子癇前期與血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷的相關(guān)性 子癇前期患者血管內(nèi)皮細(xì)胞激活與中性粒細(xì)胞關(guān)系密切并可調(diào)節(jié)其他內(nèi)皮細(xì)胞黏附因子,介導(dǎo)白細(xì)胞與激活內(nèi)皮之間結(jié)合的黏附分子日益引起人們重視。細(xì)胞間黏附分子(ICAM)與血管細(xì)胞黏附分子(VCAM)均屬于免疫球蛋白超家族黏附分子,ICAM介導(dǎo)單核細(xì)胞、淋巴細(xì)胞及中性粒細(xì)胞與激活內(nèi)皮的黏附;VCAM介導(dǎo)單核細(xì)胞、淋巴細(xì)胞及嗜伊紅性粒細(xì)胞與激活內(nèi)皮的黏附。在循環(huán)系統(tǒng)中上述黏附分子的趨化作用誘導(dǎo)白細(xì)胞進(jìn)入炎癥部位。

因此,黏附分子的表達(dá)反映了內(nèi)皮細(xì)胞的激活,通過(guò)測(cè)量循環(huán)系統(tǒng)中這些黏附分子的可溶性形式,即可反映內(nèi)皮細(xì)胞的活性狀態(tài)。很多種疾病均可發(fā)現(xiàn)循環(huán)系統(tǒng)中有內(nèi)皮細(xì)胞黏附分子的濃度升高現(xiàn)象,例如腫瘤、炎癥及代謝病(如糖尿病)等。國(guó)外關(guān)于子癇前期患者血清中黏附分子的研究越來(lái)越多,而且結(jié)論并不一致[2,6]。在我們的研究中,測(cè)量了子癇前期患者血清中sICAM-1及sVCAM-1濃度,結(jié)果發(fā)現(xiàn)子癇前期患者血清中 sICAM-1及 sVCAM-1均明顯高于正常妊娠女性,產(chǎn)生此差別的原因有待于進(jìn)一步研究。總之,本研究結(jié)果進(jìn)一步支持了內(nèi)皮激活是子癇前期的中心發(fā)病原因的理論,也說(shuō)明了激活的白細(xì)胞在子癇前期組織損傷中的作用,測(cè)量孕婦血清中sVCAM-1及sVCAM-1水平對(duì)于子癇前期有重要的預(yù)測(cè)價(jià)值。

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