兩種血涂片染色方法在教學和臨床應用的比較

張志梅 孫 輝

兩種血涂片染色方法在教學和臨床應用的比較

張志梅 孫 輝

血涂片；教學；臨床應用

血涂片染色廣泛應用于醫學檢驗和教學片的制作，在臨床上血涂片染色效果將直接影響血細胞形態學辨認及疾病診斷，在教學上血涂片的制作和染色質量也會直接影響到學生觀察的效果。我們醫院是漯河醫學高等專科學校的附屬醫院，作為一個教學醫院，既要保證一般臨床檢驗工作的需要，又要考慮教學和保存標本的需要，為此，我們觀察比較了瑞氏染色法（Wright，stain）和瑞氏-姬姆薩氏復合染色法，以其探討既利于日常臨床檢驗工作，又能緊緊結合細胞學教學的染色技術。

1 資料與方法

1.1 標本來源

700張血涂片均來自2008年1月至2009年8月，漯河醫學高等專科學校第三附屬醫院檢驗科采集的130份患者末梢血或者靜脈血血樣、120份臨床檢驗科無需保存、排除無傳染性的靜脈血（加過EDTA-K2抗凝劑）、50份學生自愿相互采集的末梢血或者靜脈血血樣，每份血樣均加EDTA-K2抗凝劑，根據采血量和病情需要制成2～5張血片分別用瑞氏和瑞氏-姬姆薩氏復合染液染色，兩種染色液均根據第三版全國臨床檢驗操作規程[1]由本實驗室自行配制。

1.2 染色方法

瑞氏染色法和瑞氏-姬姆薩氏復合染色法的操作及注意事項主要依據全國臨床檢驗操作規程、供醫學檢驗專業用的《臨床檢驗基礎實驗指導》第3版[2]等教材。

1.2.1 試劑

瑞氏（Wright）染液：包含瑞氏染料粉1.0g、甲醇（AR）600mL、中性甘油15mL。瑞氏-姬姆薩復合染液：包含瑞氏染料粉1.0g、姬姆薩染料粉0.3g、甲醇（AR）500mL、中性甘油10mL。pH 6.4～6.8的磷酸鹽緩沖液：包含無水磷酸二氫鉀（KH2PO4）0.3g、磷酸氫二鈉（Na2HPO4）0.2g、蒸餾水加至1000mL。按臨床檢驗操作規程預先配好。

1.2.2 瑞氏（Wright）染色法

我們使用配制1個月后的Wright氏染液和pH 6.4～6.8的磷酸鹽緩沖液。①滴加瑞氏染液數滴，固定0.5～1min；②加緩沖液，按染液∶緩沖液為1∶1～1∶2加磷酸鹽緩沖液，混勻，染色5～10min后用接近中性的清水沖洗干凈，待干。③如需保存，二甲苯透明，樹膠封片。染色時間與染液的濃度、室溫高低和有核細胞數量有關。根據需要每份染1～2張血片。

1.2.3 瑞氏-姬姆薩氏復合染色法染色步驟同瑞氏（Wright）染色法，只是將瑞氏-姬姆薩復合染液代替瑞氏染液。

1.2.4 注意事項

未干透血膜不能立即染色，否則染色時血膜易脫落；染色時間的長短與染液的濃度、室溫高低和有核細胞數量有關；加染液量應適當；沖洗時不能先倒掉染液，應以流水沖洗；沖洗完的血涂片應立放于支架上；染色偏酸偏堿時應更換緩沖液。

1.3 觀察方法

先在低倍顯微鏡下尋找體尾交界細胞分布好的地方，再換高倍和油鏡認真觀察紅細胞和血小板染色、形態，白細胞胞質、胞核、顆粒著色情況，詳細記錄觀察結果。

2 結 果

染色適宜的血膜，外觀呈淡琥珀色，顯微鏡下紅細胞染成淺紅色，中央著色淺，周圍較深，血小板染成紫紅色，白細胞胞質中的顆粒能顯示出各種細胞的特有色彩，細胞核染紫紅色。瑞氏染色法：對白細胞細胞質和各種粒細胞顆粒染色效果好，染色時間短，最適于一般臨床檢驗；瑞氏-姬姆薩氏復合染色法：除保留了瑞氏染色對細胞質和顆粒染色效果好的優點，又兼有對細胞核染色效果好，結構顯示更為清晰，更適于制作教學用的標本；但染液變性快、易污染并且成本高。

3 討 論

血細胞染色液種類很多，國際血液學標準化委員會（ICSH）推薦羅曼諾夫斯基（Romanowsky）染色為標準染色法[3]，但根據我國的情況，全國臨床檢驗操作規程推薦的是瑞氏染色法和瑞氏-姬姆薩氏復合染色法，這也是目前國內最為常用的血涂片染色方法。通過我們對700張血涂片用兩種染色方法染色的觀察比較，我們認為瑞氏染色法最適于一般臨床檢驗；瑞氏-姬姆薩氏復合法更適于特殊標本以及制作教學用的標本使用。也有文獻報道[4]，單獨用姬姆薩氏染色法更適于特制作教學用的血涂片標本使用，但該法對細胞質和顆粒著色較差，我們沒有作對比觀察。還有一種伊紅美藍快速染色法，時間短，只需2min，但對各種血細胞的染色效果不好，只有經驗豐富的檢驗人員才能觀察，且對幼稚血細胞的觀察也不使用，所以，臨床上很少使用，更不能用于實驗教學。

[1] 葉應嫵,王毓三,申子瑜.全國臨床檢驗操作規程[M].3版.南京:東南大學出版社,2006:123-124.

[2] 吳曉蔓.臨床檢驗基礎實驗指導[M].3版.北京:人民衛生出版社,2007:7.

[3] 趙捷,李揚.四種血細胞染色液染色效果的評價[J].檢驗醫學,2005,20(6):510.

[4] 張賽霞,張立群,吳紹鋒.幾種血涂片染色方法的比較[J].實用醫技雜志,2007,6(7):124.

R446.11+2

A

1671-8194（2010）17-0173-02

漯河醫學高等專科學校第三附屬醫院檢驗科（462000）