溫州海產(chǎn)貝類單核細胞增生李斯特菌的污染檢查*

諸葛青云,胡 昕,潘長旺,梁韶暉,黃慧聰,譚 峰

2.溫州醫(yī)學院生命科學學院、檢驗醫(yī)學院,溫州325035

單核細胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes,Lm)是一種能引起人畜共患的食源性致病菌〔1-2〕。它在自然界中分布極廣,人們食用含有Lm污染的食物后,會導致腦膜炎、骨髓炎、心肌炎、孕婦流產(chǎn)以及產(chǎn)褥感染等疾病〔3〕。由Lm引起感染的疾病死亡率極高,可達30%～70%〔4〕。在歐美、日本由該菌造成的臨床疾病和食物污染問題,已超過在細菌性食物中毒中占第1位的沙門菌。我國到目前為止,雖未出現(xiàn)有關(guān)Lm引起食物中毒暴發(fā)流行的報道,但從國內(nèi)多篇調(diào)查報道了解到,Lm對我國人群的潛在危害仍很嚴重,不過這些報道中絕大多數(shù)的陽性菌均從冷凍肉類以及乳制品中檢出,在水產(chǎn)品中有零星報道,主要集中在冷凍魚類,但在養(yǎng)殖場中直接抽取的鮮活貝類水產(chǎn)品中還未見其報道,本次調(diào)查即為掌握我國主要貝類產(chǎn)區(qū)這一受Lm污染動態(tài),了解消費者食用貝類產(chǎn)品尤其是生食或半生食的貝類產(chǎn)品受Lm的危害程度,同時為尋求Lm在貝類水產(chǎn)品加工過程中的污染來源提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 樣品來源 本次調(diào)查于2009年7月從溫州沿海地區(qū)貝類養(yǎng)殖區(qū)中采集100份鮮活貝類樣品,其中,牡蠣56份、菲律賓蛤 11份、縊蟶10份、泥蚶 13份、梭子蟹10份。

1.2 培養(yǎng)基 EB增菌液、TSA-YE培養(yǎng)基、MMA培養(yǎng)基 、TSI瓊脂、LB 增菌液(LB1、LB2)、SIM 動力培養(yǎng)基、血瓊脂平板以及微量生化管均購自上海市疾病預防控制中心。

1.3 檢驗方法 按GB4789130-2003進行操作,樣品經(jīng)培養(yǎng)在MMA平板上出現(xiàn)菌落似水滴樣,用白熾燈45°斜光照射,呈現(xiàn)淡藍色為可疑。挑其涂片做革蘭染色鏡檢,同時接種于TSI斜面培養(yǎng)基及SIM半固體動力培養(yǎng)基觀察。如果TSI上生長為+/+H2S-、SIM 培養(yǎng)基中出現(xiàn)傘狀現(xiàn)象時,刮SIM上菌苔做觸酶試驗;如觸酶陽性,就按 GB-4789130-20031617進行各項生化試驗;根據(jù)Lm菌生化特點,先行甘露醇、鼠李糖、木糖、七葉苷及溶血等5項生化試驗。結(jié)果如符合-+-++者,再按國標擴大生化項目。如符合可基本判斷為Lm菌,最后純培養(yǎng)菌種做小鼠毒力試驗。

2 結(jié) 果

2.1 檢出率 在100份鮮活貝類水產(chǎn)品中檢出3株Lm,檢出率為3.00%,分別為牡蠣1.78%(1/56)和菲律賓蛤18.2%(2/11)。

212生化試驗結(jié)果對檢出的3株Lm的生化鑒定,符合國標GB4789130-2003要求結(jié)果(表1)。

2.3 小鼠毒力試驗 3株Lm陽性菌株經(jīng)TSB-YE純培養(yǎng)24h,制成約1010cfu/mL細菌的菌懸液,注射1mL在健康小鼠腹腔觀察,結(jié)果小鼠在3d內(nèi)死亡,這說明該菌株有很強的致病性。

3 討 論

由于Lm是一種典型的能引起人畜共患的食源性致病菌,具有分布廣,適應能力強,發(fā)病死亡率高的特點,因此在2000年被WHO食品安全工作計劃列為重點檢測的食源性致病菌之一。本次隨機抽檢直接從養(yǎng)殖場中抽取的鮮活貝類產(chǎn)品,100份中有3份檢出Lm,污染率為3.00%,說明貝類產(chǎn)品在養(yǎng)殖過程中就不同程度地受到Lm的污染。陳偉偉〔5〕等人在調(diào)查泉州市食品中Lm的污染情況時,發(fā)現(xiàn)貝類受Lm的污染率為4.3%,比此次調(diào)查的污染率高,說明貝類產(chǎn)品在加工、運輸過程中還可能存在Lm不同程度的交叉污染。該菌的廣泛存在和交叉污染將可能直接引發(fā)Lm病的流行暴發(fā),對人們構(gòu)成了潛在的危險,因此應加強對該菌的檢測。貝類產(chǎn)品營養(yǎng)豐富,是人們喜愛的海產(chǎn)品之一,加上貝類產(chǎn)品自身的一些特點,人們往往將牡蠣等一些貝類產(chǎn)品生食或半生食。此次調(diào)查得知由于一些貝類產(chǎn)品在養(yǎng)殖環(huán)境中就受到Lm不同程度的污染,因此生食或半生食貝類產(chǎn)品將有可能直接導致Lm病流行暴發(fā)。

〔1〕Nakama A,Matsuda M.M olecular trying ofListera monocytogenesisolated in Japan by pulsed field gelelectrophoresis〔J〕.J Vet Med Sci,1998,60(6)：749-752.

〔2〕董麗麗,王春生,安笑秋,等.單核細胞增生李斯特菌簡介〔J〕.中國鄉(xiāng)村醫(yī)學,2000,7(12)：24-25.

〔3〕王為黎,馬景紅,牟榮,等.食源性單核細胞增生李斯特菌的帶染研究〔J〕.中國醫(yī)學理論與實踐,2002,4：501-502.

〔4〕 Kerr KG,Laoey Listeriosis RW.New problems with an old pathogen〔J〕.J Hosp lnfect,1988,12：247.

〔5〕陳偉偉,楊育紅,楊毓環(huán),等.泉州市食品中單核細胞增生李斯特菌的定性定量及耐藥性分析〔J〕.中國食品衛(wèi)生雜志,2003,15(1)：43-45.