不同檢驗(yàn)方法檢驗(yàn)梅毒血清的比較研究

陳景云

黑龍江省牡丹江市第二人民醫(yī)院檢驗(yàn)科（157000）

梅毒是由梅毒螺旋體所致的慢性性傳播疾病，是性傳播疾病中危害最嚴(yán)重的一種，其主要通過(guò)性交、接吻、哺乳等方式進(jìn)行傳播。臨床上對(duì)于梅毒螺旋體的確診主要通過(guò)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)，目前實(shí)驗(yàn)室常用的檢測(cè)方法為不加熱血清反應(yīng)素實(shí)驗(yàn)（USR）、快速血漿反應(yīng)素環(huán)狀卡片實(shí)驗(yàn)（RPR）、梅毒螺旋體抗體被動(dòng)顆粒凝集實(shí)驗(yàn)（TPPA）3種，本文選取牡丹江市第二人民醫(yī)院2009年收集的126份梅毒血清標(biāo)本進(jìn)行實(shí)驗(yàn)對(duì)比，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 材料

對(duì)牡丹江市第二人民醫(yī)院2009年1月至12月間收治的126例梅毒患者的血清標(biāo)本分別進(jìn)行不加熱血清反應(yīng)素實(shí)驗(yàn)（USR）、快速血漿反應(yīng)素環(huán)狀卡片實(shí)驗(yàn)（RPR）、梅毒螺旋體抗體被動(dòng)顆粒凝集實(shí)驗(yàn)（TPPA）平行檢測(cè)。

1.2 試劑

USR試劑由廈門新創(chuàng)提供，PRP試劑由上海榮盛提供，TPPA試劑由日本富士瑞比歐株式會(huì)社提供。

1.3 檢測(cè)方法

1.3.1 USR法

取待檢血清0.05mL，加于玻片上的圓圈中，并分散到整個(gè)圓圈。用1mL注射器上專用針頭吸取抗原，每份待檢標(biāo)本上滴加1滴，搖動(dòng)玻片，4min后觀察結(jié)果。

結(jié)果判定：陽(yáng)性（4+～3+）：肉眼可看到大的或較大的塊狀物；陽(yáng)性（2+）：肉眼可見小塊狀物，在顯微鏡下可見較大的塊狀物，懸液清亮；陽(yáng)性（1+）；在顯微鏡下可見小塊狀物，均勻分布，為弱陽(yáng)性；可疑（±）：顆粒分布不規(guī)則，或?yàn)榧?xì)小的粗糙物；陰性（－）：顆粒細(xì)小，分布均勻。

1.3.2 RPR法

取待檢血清0.05mL，加入卡片上圓圈內(nèi)，并分散到整個(gè)圓圈。在每份血清上滴加一滴RPR抗原。旋轉(zhuǎn)搖動(dòng)器皿8min，立即用肉眼觀察結(jié)果。

結(jié)果判定：陽(yáng)性：可見明顯黑色凝集顆粒或絮片。

1.3.3 TPPA法

①在微量反應(yīng)板的第1孔加入標(biāo)本稀釋液100μL，從第2～4孔每孔加25μL。②用微量加樣器取標(biāo)本25μL至第1孔中，然后以2n的方式從第1孔稀釋至第4孔。③用滴管在第3孔中滴入1滴（25μL）未致敏粒子，在第4孔中滴入1滴（25μL）致敏粒子。④用微量振蕩器混合30s，加蓋后于室溫（15～30℃）下水平靜置。2h后觀察結(jié)果。

結(jié)果判定：陰性：粒子成紐扣狀聚集，呈現(xiàn)出外周邊緣均勻且平滑的圓形；弱陽(yáng)性：粒子形成小環(huán)狀，呈現(xiàn)出外周邊緣均勻且平滑的圓形；陽(yáng)性：粒子環(huán)明顯變大，其外周邊緣不均勻且雜亂地凝集在周圍。

2 結(jié) 果

經(jīng)3種不同檢測(cè)方法平行檢測(cè)126份梅毒血清，檢測(cè)陽(yáng)性率分別為：USR法73.8%（93/126），RPR法76.2%（96/126），TPPA法100%（126/126）。前二者之間比較差異不大（P＞0.05），前二者與后者比較差異均顯著（P＜0.05），具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 討 論

故近年來(lái)推出換代產(chǎn)品TPPA試驗(yàn)。TPPA以純化的梅毒螺旋體抗原致敏惰性的人工明膠顆粒替代TPHA試驗(yàn)中的致敏紅細(xì)胞，使結(jié)果更為穩(wěn)定，敏感性和特異性也得到進(jìn)一步提高[1]。TPPA檢測(cè)的是梅毒螺旋體特異性抗體，包括IgM型和IgG型，可作為梅毒的確證試驗(yàn)，但不適合用作治療效果的監(jiān)測(cè)。RPR其反應(yīng)效價(jià)與病變活動(dòng)有關(guān)，據(jù)有關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道[2]。RPR抗原是吸附于活性炭的類脂質(zhì)抗原。試驗(yàn)在特制的白色紙卡上進(jìn)行。陽(yáng)性反應(yīng)時(shí)，在白色底板上出現(xiàn)黑色的凝集顆粒或絮片，結(jié)果容易判斷。肉眼觀察，不需用顯微鏡，更易掌握和推廣。USR法采用的是改良的VDRL抗原。將該抗原用稀釋液稀釋后離心沉淀，于沉淀中加入EDTA、氯化膽堿和防腐劑。EDTA可使抗原在半年內(nèi)不變性，氯化膽堿可起化學(xué)“滅活”作用（滅活補(bǔ)體）。后兩者實(shí)驗(yàn)方法簡(jiǎn)單、方便、經(jīng)濟(jì)，對(duì)于梅毒的普查十分適合，但遇可疑病例仍須經(jīng)TPPA檢測(cè)確定。

[1] 王育瑛,趙文波.TPPA和RPR聯(lián)合檢測(cè)梅毒抗體的實(shí)驗(yàn)研究[J].浙江中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào),2009,33(4):488-489.

[2] 楊建蘭,郎亦波.不同血清學(xué)診斷方法檢測(cè)梅毒螺旋體的結(jié)果分析[J].臨床和實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志,2009,8(5):90-91.