大承氣湯治療重癥急性胰腺炎大鼠的實驗研究

唐 晉,宋孟龍,程 飛,張獻全

(重慶醫科大學第二附屬醫院腫瘤科 400010)

大承氣湯治療重癥急性胰腺炎大鼠的實驗研究

唐 晉,宋孟龍,程 飛,張獻全△

(重慶醫科大學第二附屬醫院腫瘤科 400010)

目的探討大承氣湯治療重癥急性胰腺炎(SAP)的作用機制。方法健康Wistar大鼠50只隨機分成5組,分別為:假手術組(A組),SAP模型組(B組),SAP+烏司他丁治療組(C組),SAP+大承氣湯治療組(D組),SAP+大承氣湯+烏司他丁治療組(E組)。采用胰膽管逆行注射5%牛磺膽酸鈉法建立SAP大鼠模型,于制模后24 h收集樣本,檢測大鼠肺組織、回腸和血漿中促炎因子白細胞介素-6(IL-6)、內毒素(ET)和抑炎因子白細胞介素-10(IL-10)的含量變化。結果SAP+烏司他丁治療組、SAP+大承氣湯治療組、SAP+大承氣湯+烏司他丁治療組與SAP模型組比較血漿及組織ET、IL-6含量明顯降低(P＜0.05),IL-10含量明顯升高(P＜0.05);SAP+大承氣湯+烏司他丁治療組與SAP+烏司他丁治療組、SAP+大承氣湯治療組比較血漿及組織ET、IL-6含量明顯降低(P＜0.05),IL-10含量明顯升高(P＜0.05)。結論大承氣湯可能通過減少致炎因子 ET、IL-6和增加抑炎因子IL-10來影響SAP的炎癥反應,大承氣湯和烏司他丁對大鼠SAP具有相加或協同的抗炎作用。

重癥急性胰腺炎;大承氣湯;炎癥因子

△通訊作者。

重癥急性胰腺炎(severe acute pancreatitis,SAP)是臨床常見的急危重癥之一,是指急性胰腺炎伴有其他器官功能障礙或胰腺出現壞死、膿腫或假性囊腫等局部并發癥者,Ranson評分大于3分,APACHEⅡ評分大于8分,Balthazar CT分級在Ⅱ級或以上者。SAP具有起病急、變化快、并發癥多等特點,常伴發休克、呼吸功能不全、腎功能不全、感染等并發癥,死亡率高達20%～30%。SAP發病機制復雜,近年研究顯示,炎癥因子參與SAP的發病,臨床應用大承氣湯治療SAP可以降低死亡率,但其機制尚不清楚。本實驗研究大承氣湯治療SAP大鼠炎癥因子的變化情況,探討大承氣湯治療SAP的機制。

1 材料與方法

1.1 動物及分組 健康Wistar大鼠50只(購自重慶醫科大學實驗動物中心,清潔級)體質量 220～250 g,隨機分成5組,每組10只。分為A組:假手術對照組;B組:SAP模型組;C組:SAP+烏司他丁治療組;D組:SAP+大承氣湯治療組;E組:SAP+大承氣湯+烏司他丁治療組。

1.2 藥物 烏司他丁(ulinastatin,UTI,天普生物化學制藥有限公司);大承氣湯(重慶醫科大學附屬第二醫院中藥房提供),配方為大黃20 g,枳實10 g,厚樸10 g,芒硝15 g,熬制成W/V為1∶1的藥液。

1.3 主要儀器和試劑 SP-100型微量注射泵(日本JMS公司);TGL-16G恒溫高速離心機(上海安亭科學儀器廠);LP-4000型酶標儀(法國Basture公司);BX50生物光學顯微鏡(日本Olympus公司);超低溫冰箱(日本 SANYO公司);牛磺膽酸鈉(美國Sigma公司);大鼠IL-6 ELISA測試藥盒(中國晶美生物工程公司);大鼠IL-10 ELISA測試藥盒(中國晶美生物工程公司);內毒素(ET)檢測采用上海市醫學化驗所生產的鱟試劑盒(Ⅱ)。

1.4 動物模型的制備 參照 Frossard和Pastor[1]的方法,采用胰管內逆行注入5%硫磺膽酸鈉0.1 mL/100 g建立大鼠SAP模型。

1.5 實驗動物處理 假手術組(A組):大鼠開腹后翻動胰腺數次后關腹;烏司他丁治療組(C組):制模后30 min以4萬u/kg靜脈注入烏司他丁;大承氣湯治療組(E組):制模后12 h灌入熬制好的大承氣湯1 mL/100 g;烏司他丁+大承氣湯治療組(F組):用兩種藥物治療 SAP大鼠,方法同上。術后24 h取靜脈血標本分離血漿置冰箱備用,取大鼠胰腺、左肺、回腸末端組織行病理檢查,右肺組織、部分回腸組織液氮速凍后提取組織勻漿,置-70℃保存備用。

1.6 大鼠肺、回腸組織勻漿的獲取 參照Tulzo等[2]的方法制作組織勻漿,肺、回腸組織勻漿分別以1∶8和1∶10的比例加入PBS緩沖液(0.1 mmol/L,pH=7.4)并用勻漿器攪勻,于低溫高速離心機(4℃,8 000 r/min,30 min)分離出上清液分裝置于小離心管于-70℃冰箱保存用于檢測蛋白。

1.7 觀察指標及方法

1.7.1 胰腺、左肺、回腸組織病理學檢查 10%中性甲醛固定,石蠟包埋切片,HE染色后,光鏡下觀察各組動物病理變化。

1.7.2 內毒素、IL-6、IL-10測定 內毒素采用鱟試劑偶氮基質顯色法定量檢測,IL-6、IL-10采用酶聯免疫測定(ELISA)試劑盒測定。

1.8 統計學方法 所有數據采用±s來表示,統計學分析采用SAS8.0軟件行單因素方差分析,組間均數比較用t檢驗。

2 結 果

2.1 病理學變化 模型組胰腺腺泡細胞腫脹,可見灶性壞死,腺泡細胞間有大量炎癥細胞浸潤;小葉排列紊亂,其間有大量炎性滲出;壞死區內腺泡結構消失,胞核溶解;葉間隙增寬,間質微血管破裂,大量紅細胞溢出;肺臟及回腸組織均有程度不同的充血、水腫及間質白細胞浸潤,并可見白細胞貼附于血管內膜。各治療組均有不同程度的改善,炎癥細胞浸潤減少。

2.2 ET檢測結果 B組ET表達水平明顯高于A組,E組與B、C組比較,ET表達水平明顯降低,差異有統計學意義(P＜0.05)。見表 1。

表1 各組大鼠血漿、肺和回腸內毒素的濃度比較(Eu/mL,x ±s)

2.3 IL-6檢測結果 B組IL-6表達水平明顯高于假手術組(A組),E組與 B、C組比較,IL-6表達水平明顯降低,P＜0.05。見表2。

表 2 各組大鼠血漿、肺和回腸IL-6比較(pg/mL,x ±s)

2.4 IL-10檢測結果 模型組IL-10表達水平明顯高于A組,E組與B、C組比較,IL-10表達水平明顯升高,P＜0.05。見表3。

表3 各組大鼠血漿、肺和回腸組織IL-10的濃度比較(pg/mL,±s)

表3 各組大鼠血漿、肺和回腸組織IL-10的濃度比較(pg/mL,±s)

★:與B組比較,P＜0.05;☆:與 C、D 組比較,P＜0.05。

組別 血漿 肺組織 回腸組織A 組 0.68±0.15 10.21±0.22 14.04±2.95 B組 11.50±1.28 46.89±4.08 27.40±4.17 C組 16.30±2.04★ 56.96±4.47★ 36.34±2.30★D 組 20.70±2.99★ 60.30±5.00★ 39.85±2.30★E組 32.12±4.30★☆ 73.81±8.42★☆ 45.16±1.81★☆

3 討 論

大承氣湯治療SAP的療效已在臨床得到證實并廣泛應用,但其確切機制至今尚不明確。大承氣湯為臨床經驗方制劑,主要由柴胡、大黃、芒硝、枳實等組成,具有通里攻下、清熱解毒、活血化淤之功效。柴胡、枳實可促使胃排空,枳實、厚樸增加小腸蠕動,芒硝有清熱瀉下之功效,可以降低腸管壓力,協助大黃通腑泄濁。生大黃促使結腸蠕動,改善胃腸黏膜微循環,降低血清和小腸組織腫瘤壞死因子、磷脂酶A2和血小板激活因子(PAF)的含量,從而減輕上述介質引發的其他炎癥介質的釋放和炎癥反應[3]。本實驗發現,SAP大鼠分別經大承氣湯治療、烏司他丁治療和大承氣湯+烏司他丁治療24 h后,大鼠血清、肺組織和回腸末端組織的內毒素水平明顯降低,與陳海龍等[4]和王春妍等[5]研究相似,表明大承氣湯具有減少內毒素的生成和吸收、加快滅活和排泄等作用,并因此減輕內毒素引起的全身炎性反應綜合征和急性肺損傷以及內毒素引起的腸黏膜屏障的損害。本研究還發現,SAP大鼠應用大承氣湯治療后血漿、肺和回腸組織的IL-6水平明顯下降,與烏司他丁治療結果相似,但大承氣湯結合烏司他丁治療IL-6水平較單獨應用烏司他丁或大承氣湯明顯下降,提示二者對治療SAP大鼠有相加或者協同作用。IL-6是炎癥反應中一個非常重要的因子,可以作為促炎因子引起炎癥反應的一系列連鎖反應和放大效應,導致全身炎癥反應綜合征(systemic inflammatory response syndrome,SIRS)和多器官功能障礙綜合征(multiple organ dysfunction syndrome,MODS)的發生。最近的研究顯示,IL-6在SAP的發病中起重要作用,其升高的幅度與SAP的嚴重程度密切相關,發病后24 h內檢測血漿IL-6含量預測SAP是目前早期評價SAP嚴重程度的較好指標[6]。實驗還發現,經大承氣湯、烏司他丁和大承氣湯+烏司他丁分別治療后,大鼠血漿、肺和回腸組織中的抑炎因子IL-10的水平明顯升高,與呂冠華等[7]研究結果相一致,表明大承氣湯具有雙重調節作用,即具有降低致炎因子IL-6和內毒素和提高抑炎因子IL-10的雙向作用,提示大承氣湯可能是通過參與炎癥反應的調控而發揮治療SAP的作用的。何俊等[8]研究也發現,應用生長抑素聯合柴芍承氣湯鼻飼和生大黃灌腸治療SAP,可更快改善患者腹痛、腹脹癥狀,恢復心率、呼吸,降低死亡率。由于大承氣湯的成分不是很單一,加上SAP的發病機制復雜,調控炎癥反應可能只是大承氣湯治療SAP一條比較重要的途徑。

[1] Frossard JL,Pastor CM.Experimental acute pancreatitis:new insights into the pathophysiology[J].Front Biosci,2002,7(1):257.

[2] Tulzo YL,Shenkar R,Kancko D,et a1.Hemorrhage increase cytokine expression in lung mononuclear cells in mice[J].Clin Invest,1997,99(7):1516.

[3] 劉峰,高士杰,胡慧剛,等.大黃治療休克后胃腸功能障礙的研究[J].中國急救醫學,2003,23(1):38.

[4] 陳海龍,吳咸中,關鳳林,等.大承氣湯對 MODS時腸道細菌微生態學影響的實驗研究[J].中國微生態學雜志,2007,19(2):132.

[5] 王春妍,楊世忠,遲寶榮.大承氣湯對急性肝損傷大鼠腸源性內毒素血癥生物學效應的阻斷作用[J].中西醫結合肝病雜志,2006,16(6):356.

[6] Garg PK,Prasad H,Tandon RK.Elevated level of interleukin-6 predicts organ failure and severe disease in patients with acute pancreatitis[J].J Gastroenterol Hepatol,2007,22(4):550.

[7] 呂冠華,王長洪,王立新,等.大承氣湯對重癥急性胰腺炎大鼠細胞因子及外周血γ δ T細胞的影響[J].中國中西醫結合消化雜志,2008,16(6):355.

[8] 何俊,何慶玲,陳忠華,等.生長抑素聯合柴芍承氣湯鼻飼和生大黃灌腸治療重癥急性胰腺炎50例分析[J].重慶醫學,2008,37(22):2603.

Effects of Dachengqi Decoction on rats with severe acute pancreatitis

T ANGJ in1,SONG Meng-long1,CHENG Fei1,et al.

(Departmentof Oncology,Second Af f iliated Hospital,Chongqing Medical University,Chongqing400010,China)

ObjectiveTo observe the effects of Dachengqi Decoction on rats with severe acute pancreatitis(SAP).MethodsFifty Wistar rats were randomly divided into sham operation group(A group),SAP group(B group),SAP+ulinastatin group(C group),SAP+Dachengqi Decoction group(D group)and SAP+Dachengqi Decoction+ulinastatin group(E group).SAP was induced by retrograde injection of 5%sodium taurocholate,the levels of IL-6,IL-10 and ET from lung,ileum and blood plasma were detected after 24 h since SAP induced.ResultsThe levels of IL-6 and ET of lung,ileum and blood plasma in SAP+ulinastatin group,SAP+Dachengqi Decoction group,SAP+Dachengqi Decoction+ulinastatin group decreased significantly than that in SAP group(P＜0.05),and they were significantly lower in the SAP+Dachengqi Decoction+ulinastatin group compared with other two group(P＜0.05);but the levels of IL-10 increased significantly(P＜0.05).ConclusionDachengqi Decoction could affect inflammatory reaction of SAP by reducing proinflammatory factors of ET and IL-6 and increasing anti-inflammatory factor of IL-10.Dachengqi Decoction and ulinastatin have additive or synergetic effects on anti-inflammatory action in rats with SAP.

severe acute pancreatitis;Dachengqi Decoction;inflammatory factor

R365.576

A

1671-8348(2010)09-1051-02

2009-10-19

2009-11-12)

?論 著?