不鼻息肉中金葡菌及其毒素B測定臨床意義

梁星 劉濤

(1山西醫科大學第一醫院耳鼻咽喉頭頸外科; 2.山西醫科大學第一醫院耳頸外科 山西太原 030001)

乳膠凝集法金黃色葡萄球菌試劑盒(法國生物梅里埃公司);人金黃

鼻息肉是鼻腔和鼻竇粘膜的常見慢性疾病。成人發病率1%～2%,術后易復發,復發率高達15%[1]。目前比較公認的是:鼻息肉的發病是一個涉及感染,變態反應,植物神經功能失調,代謝紊亂,氣流動力改變等多因素,多步驟的過程[2]。近來研究發現,金黃色葡萄球菌及其產物與鼻息肉的發病或演變有關,金黃色葡萄球菌是最為常見的致病菌之一,由它產生的超抗原中金黃色葡萄球菌腸毒素B(Staphylococcal enterotoxin B,SEB)最常見,耐熱且產毒量大,是近來研究熱點,已經有許多臨床研究發現,慢性鼻竇炎患者鼻腔或上鼻竇分泌物中有較高含量的SEB,在鼻息肉合并有鼻竇炎的病例中含量更高。并且在血清中可測到抗SEB抗體。

1 臨床資料

1.1 標本來源

標本取自患有鼻息肉和患有肥厚性鼻炎及其他的住院患者各50例。年齡16～65歲,男女不限,入院前1個月明確無抗生素使用史,入院后未作任何治療前及時取材。

1.2 主要試劑儀器

色葡萄球菌腸毒素B抗體酶聯免疫分析(ELISA)(RD公司生產);全自動微生物藥敏分析儀VITEK2compact(法國生物梅里埃公司);湖南湘儀TDZ4-WS臺式低速離心機(湖南凱達科學儀器有限公司生產),恒溫震蕩培養箱(上海博迅SPX-250B-D型)。

2 方法

2.1 細菌培養

用鼻拭子于待測對象的鼻后孔深處取鼻腔分泌物,放入無菌試管中30min內送細菌培養室。在需氧環境下用接種環將分泌物分別接種于血平皿,巧克力平皿,麥康凱平皿中,33～35℃孵育24h。培養出的細菌菌落由全自動微生物分析儀VITEK2compact及乳膠凝集法金黃色葡萄球菌鑒定試劑盒進行鑒定。

2.2 ELISA測血清

設置空白對照孔和待測樣品孔,之后將SEB標準品稀釋至所需要濃度,加樣于酶標板孔底部混勻,封板膜封板后37℃溫育30m in。取出用稀釋后的洗滌液洗五次,拍干。加入SEB酶標試劑(空白孔不加),置封板膜封板后37℃溫育30min,再洗5次拍干。加入顯色劑避光37℃顯色15m in。以空白孔調零,450納米波長處檢測和采集數據。

3 結果及統計學分析

3.1 細菌培養結果及分析

50例鼻息肉標本經細菌培養后,21例培養出金葡菌菌落。對照組經細菌培養后,8例培養出金葡菌菌落。χ2檢驗得：χ2=8.207>χ20.05,1=3.84,P＜0.05。2組檢出率不同,有統計學意義。

3.2 SEB的ELISA檢測結果及分析

SEB抗體滴度測定采用t檢驗。經SPSS V 13.0軟件分析,sig>5,得兩樣本服從正態分布,(t=4.377),查界值表得(P<0.05)(α=0.05)。兩樣本的差異有統計學意義。

4 討論

鼻息肉的發病機制尚不明確,多年來認為與變態反應和感染關系密切,目前傾向于多因素的病因學,存在金黃色葡萄球菌超抗原假說和真菌變態反應假說[2]。文獻報道,無論是否合并過敏性鼻炎的鼻息肉,感染因素都參與了致病。越來越多的研究發現金葡菌是呼吸道的常見致病菌之一,金葡菌的致病性一方面與其凝固酶密切相關,許多疾病是由于金葡菌直接侵襲所致,另一方面金葡菌還包括許多細胞抗原并可產生多種具有超抗原特性的毒素[3～4]。金葡菌腸毒素(staphylococcus aureus enterotoxins,SAEs)包括(SEA～SEP)可同時影響到免疫調節細胞和促炎細胞的活性,其中SEB最常見,耐熱且產毒量大毒力強,屬于超抗原,有強大的免疫調節功能,可直接激活5%～10%得T細胞增殖并釋放細胞因子和炎性因子,加重局部炎癥反應,因此SEB在慢性炎癥性疾病的發病機制中起到極其重要的作用。

許多臨床研究發現慢性鼻竇炎的鼻竇分泌物中有較高含量的SEB,在并發鼻息肉的病例更高,并在血清中可檢測到抗SEB抗體[5]。國外學者對慢性鼻-鼻竇炎合并鼻息肉(CRS/NP)患者鼻息肉表面分泌物進行研究,發現超半數患者鼻分泌物中有產生超抗原的金葡菌,并分離出SEB,從而認為鼻粘膜中最常見的細菌是金葡菌,通過產生毒素導致鼻腔側壁粘膜的損傷[6]。對慢性鼻-鼻竇炎和鼻息肉的中鼻道拭子研究發現,與對照組(無鼻竇疾病的各體)相比,鼻息肉患者中鼻道寄居的凝固酶陽性的金葡菌菌株更常見。與對照組粘膜相比,鼻息肉組的免疫組化染色也顯示上皮和上皮下纖維結合素表達增加。因此,鼻息肉中特異性炎癥過程可以促進金葡菌定居上皮。

本實驗通過收集鼻息肉和肥厚性鼻炎患者的分泌物進行培養,結果鼻息肉患者超半數培養出金葡菌,而同時進行的肥厚性鼻炎患者的檢出率則相對小許多;以血清檢測SEB抗體結果也發現,鼻息肉患者檢出SEB抗體滴度的平均值要明顯高于同時同法檢測的肥厚性鼻炎患者。

基于以上理論和實驗推測,鼻息肉盡管是多因素導致的常見病,高復發病。然而有相當一部分鼻息肉病人是以‘金葡菌’感染為‘扳機點’導致的‘多米諾骨牌’效應的最終結局。而目前對于鼻息肉的治療臨床上多用的是鼻內鏡加抗生素的治療,這相當程度上是對已經形成息肉病的事后補救。研究報道,由金葡菌產生超抗原SEB毒素也參與導致了許多免疫性疾病,如：潰瘍性結腸炎等。由此提示,針對清除超抗原毒素的治療,以截斷和阻止超抗原引起的過度免疫和組織損傷,以期能夠對息肉病的預防以及術后復發的預防提供一條新的治療手段。這還有待今后無數次實驗和不斷的努力來證明。

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