氣相色譜-質譜聯用技術(GC-MS)對不同種類太子參揮發性成分檢測

閆嬌霞

(河南省中牟縣衛生防疫站 河南中牟 451450)

太子參是華東地區主產的大宗藥材之一，含有三萜皂苷類、環肽類、多糖類以及揮發性成分等[1]。具有抗衰老、抗應激、抗缺氧等藥理作用。氣相色譜-質譜聯用技術(Gas Chromatography-Mass Spectrometry，GC-MS)通過指紋的建立，分離檢測效率高，能方便定性揮發性成分，且一次能分離上百個揮發性成分，近些年來被廣泛應用于中草藥揮發性成分分析。

1 儀器與試藥

乙醚分析純，購自江蘇漢邦科技有限公司；高純氦(含量≥99.999%)，購自河南新航工業氣體有限公司；HP6890GC／5973MSD氣質聯用儀(美國惠普公司)；揮發油測定裝置。太子參藥材從當地醫藥公司購買，除5、7、10號樣品生產產地分別為福建、貴州、安徽宣州產區外，其他樣品均為江蘇不同產地。均經品種鑒定為石竹科植物孩兒參的塊根。

2 實驗方法與結果

2.1 揮發性成分的提取方法

分別取10批太子參樣品200g，粉碎后過篩，篩孔徑為0.84μm。稱取過篩后的100g太子參粗粉，置于500mL圓底燒瓶中，加入1000mL水，浸泡6h。浸泡后將樣品經水蒸汽6h蒸餾，蒸餾液用乙醚5mL萃取3次，回流提取8h，得揮發性成分乙醚提取液后，對萃取液進行30℃減壓蒸餾，直至濃縮至10mL左右，然后經無水硫酸鈉干燥后得揮發油，經過濾（0.22μm微孔濾膜），密封待測。

2.2 分析條件

氣相色譜條件:HP-5MS石英毛細管柱(30.0m×0.25mm ID，0.25μm Film Thickness)；載氣為高純氦，恒定流速0.7mL/min，體積流量1.0mL/min；升溫程序：柱溫60℃，以5℃/min升溫至250℃；進樣口溫度280℃；分流進樣，分流比為20：1，進樣量1μL。以8℃/min的速度升溫至300℃，保持2min。質譜條件：電離方式EI；接口溫度280℃；倍增器電壓為1480V；四級桿溫度150℃；離子源溫度230℃；電子能量70eV；溶劑延遲2min；掃描質量為50～550amu。

2.3 指紋圖譜建立

按選定的GC-MS條件進行分析太子參的各揮發性成分，測得所有供試品的GC-MS總離子流圖；質譜技術對總離子流圖中的各峰掃描后，得質譜圖。經計算機處理和NIST-98標準質譜圖庫檢索對所有組分質譜的數據鑒定，將其與有關標準譜圖核對，初步確定出78種化合物在太子參揮發性成分中。根據太子參揮發性成分GC-MS總離子流圖所給出的峰面積、峰保留時間和峰數值等成分鑒定結果以及相關參數，進行比較、分析，制定GC-MS指紋圖譜。

2.4 指紋圖譜分析

經過分析、比較揮發性成分的GC-MS總離子流圖，標定太子參指紋圖譜的12個共有峰作為的特征峰，按照序號從大到小其峰化學成分依次為：正-十六烷酸、未鑒定B、2-環己烯-1-醇-苯甲酸酯、未鑒定A、4-丁基-3-甲氧基-2-環己烯-1-酮、4-環己二烯-1-酮、4-丁基-3-甲氧基-2、3-呋喃甲基乙酸酯、2-戊基呋喃、糠醇、糠醛、己醛、吡咯。其中4-環已二烯-1-酮，4-丁基-3-甲氧基-2是太子參揮發性成分中相對含量最高的成分。以4-環己二烯-1-酮(7號峰)，4-丁基-3-甲氧基-2為參照峰，分別求出各共有峰與之相比的a值(調整保留時間之比)和各共有峰的相對峰面積。

2.5 指紋圖譜的聚類分析

選擇太子參揮發性成分中12個比較明顯的共有峰，用SPSS 11.0軟件中的hierarchical cluster analysis對10個太子參樣品進行聚類分析，距離公式為square euclidean distance，所用聚類方法為average linkage(between groups)。結果顯示，當距離標尺在1時，2、9、3、4、8、10各歸為一類；在2時,2、3、4、8、9、10歸為一類；在6時,2、3、4、6、8、9、10歸為一類；在7時,1，2、3、4、6、8、9、10歸為一類；在25時，全部歸為一類。由此可見，江蘇產太子參指紋圖譜相似性較好，與外省樣品5、7號有一定的區別。

3 討論

一般在制定指紋圖譜時，由于缺少適宜的對照品作參照，故以供試品中峰形好、較穩定、峰面積適中、純度高的共有峰作為參照峰來標定[2]。色譜指紋譜技術是國際公認的有效控制天然產物或中藥內在質量的關鍵技術，已成為目前中藥質量評價的重要手段之一，本實驗在用GCMS法對不同產地太子參中揮發性成分分析鑒定的基礎上，初步建立太子參揮發性成分GC-MS指紋圖譜，初步建立了以此12個共有峰為特征指紋信息的GC-MS指紋圖譜，證實不同種類的太子參揮發成分有一定的差異，此方法穩定可靠，為太子參藥材的質量評價和GAP實施提供科學依據。

[1]Liang X T.Basic Studies on Chinese Materia Medica(常用中藥基礎研究)[M].Vol I.Beijing:Science Press,2003.

[2]吳朝峰，林彥銓.藥用植物太子參的研究進展[J].福建農林大學學報,自然科學版，2004，33(4)：426～430.