高效液相色譜法測定霉酚酸含量及有關物質

劉勝興 林芹

（1.廣西南寧百會藥業集團有限公司 廣西 南寧 530003; 2.廣西中醫學院制藥廠 廣西 南寧 530023）

高效液相色譜法(High performance liquid chromatography，HPLC)又稱“高壓液相色譜”、“高速液相色譜”等，是一種高壓、高效、高靈敏度、應用范圍廣、分析速度快的分離分析技術。在中國藥典中主要用于藥物的含量測定、有關物質檢查和鑒別等。天然藥物的來源有動物、植物和礦物之分。由于化學成分復雜，有效成分可能有一個，也可以有多個，因此精確測定各有效成分的含量對藥品質量控制，建立質量標準具有重要的意義。高效液相色譜法可對天然藥物的成分進行分離鑒定，并測定有效成分的含量。

霉酚酸(mycophenolic acid,MPA)是一種高效、選擇性、非競爭性、可逆性的次黃嘌呤單核苷酸脫氫酶抑制劑，可抑制鳥嘌呤核苷酸的合成途徑。MPA有關物質的檢測方法作者未見國內報道。本文采用高效液相色譜法對MPA的含量及有關物質進行研究試驗，建立了霉酚酸的HPLC測定方法，可同時測定含量、分離有關物質，為原料質量控制建立標準。

1 儀器與實驗藥品

Waters600-717-2487型高效液相色譜儀。霉酚酸標準品(純度98%，Sigma公司)，霉酚酸原料由本廠提供；乙腈，甲醇為色譜純；三乙胺，磷酸為分析純。

2 色譜條件

采用phenomenexC8色譜柱（250mm×4.6μm×5μm），流動相：三乙胺磷酸緩沖液（取超純水980mL，加入三乙胺20mL，用磷酸調節pH至5.6，攪拌至完全溶解）乙腈（60∶40）,檢測波長250nm,流速：1.0mL/min。

3 方法與結果

用本色譜系統檢測霉酚酸有關物質，色譜圖如下，各雜質峰均能與霉酚酸主峰的達到良好的分離。試驗表明，本品在酸、堿、氧化、高溫及光破壞均不穩定，降解后的雜質峰也均能與霉酚酸主峰達到良好的分離 。

（1）精密度。選取適量的霉酚酸標準品進行精密測量，用甲醇制成的供試液0.4mg/mL進行搖勻，之后按照上述色譜條件連續進樣6次，計算霉酚酸峰面積值，RSD為0.2%。結果：精密度良好。

（2）重復性實驗。選擇適量相同批號的霉酚酸樣品并且稱取相同的6份，用甲醇制成的供試液0.4mg/mL進行搖勻，按之前的步驟進行測定，6份溶液及標準溶液分別進樣10uL，結果得到含量的RSD值為0.52%。

（3）溶液穩定性實驗。選取相同的霉酚酸供試液1份，在0,4,8,12h分別測定霉酚酸的峰面積值以考察試品的溶液穩定性，其中RSD為0.96%。結果說明樣品供試液在12min內基本穩定。

(4)線性實驗。稱取霉酚酸適量，用甲醇制成供試液800.48ug/mL，分別取溶液6.0、5.5、5.0、4.5、3.5、2.5mL置于15mL的容器中，并用甲醇溶液定容至刻度，得到不同濃度的溶液分別為479.32、445.56、397.56、358.24、279.54、201.45μg/mL，然后分別進樣15uL，并記錄下色譜圖，結果顯示霉酚酸濃度在201.45～479.32μg/mL范圍內呈現良好的線性關系。

（5）回收率實驗。稱取霉酚酸適量并且以對照品溶液進樣，按峰面積計算樣品回收率，測得回收率平均值為98.69%。在統一的色譜條件下，測得最低檢測限為0.1ng（S/N≥3）。通過上述方法檢測不同批原料結果為02001含量為98.2%，雜質為0.41%；02001含量為98.9%，雜質為0.65%；02003含量為97.9%，雜質為0.54%。

4 討論

霉酚酸在C8柱上易產生前沿峰。不同品牌C8柱，保留時間、峰形有較大的差異。考察各種配比的流動相，25cm的長柱有利于達到較好的分離效果，分離度>1.5，分離效果好。本方法，霉酚酸的出峰時間快，峰形較好，同時此方法靈敏，準確，重現性好，適用于霉酚酸原料含量及有關物質的測定。

高效液相色譜法是現代藥物分析中最高效、快捷的方法之一，具有專屬性強、靈敏度高等特點，既可用于藥物分離，也可用于定性定量分型，適用范圍廣因此在藥物成分的分離與測定方面能夠充分發揮其它分析方法無與倫比的優勢。而且隨著計算機軟件的開發、專家系統的應用、檢測手段的進步、各種聯用技術的出現以及其他一些相關問題的解決，HPLC將稱為今后質量規范化，國際化的重要途徑之一。

[1]徐蓉，胡輝，朱健.新型免疫抑制抗生素霉酚酸酯的研究進展[N].溫州大學學報,2005.

[2]李發美，于治國，陳發奎，等.醫藥高效液相色譜技術[M].北京：人民衛生出版社，1999.